本文關(guān)鍵詞：雙靶修飾策略同時實現(xiàn)阿霉素脂質(zhì)體腫瘤細(xì)胞高度識別與攝取，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：構(gòu)建葉酸（Folate， FA）、 TAT肽雙靶修飾阿霉素脂質(zhì)體（FA/TAT-LP-DOX），旨在實現(xiàn)FA主動靶向的同時，增強(qiáng)阿霉素脂質(zhì)體的細(xì)胞攝取，從而提高其抗腫瘤效果；同時研究雙靶脂質(zhì)體FA/TAT-LP-DOX的攝取途徑，闡明其發(fā)揮作用的機(jī)理。 方法：通過酰胺化反應(yīng)合成脂質(zhì)材料長鏈DSPE-PEG_(5000)-FA，加成反應(yīng)合成短鏈DSPE-PEG2000-TAT，以薄層色譜（TLC）、紅外光譜（FTIR）、氫譜（~1H-NMR）、高效液相色譜（HPLC）等方法分別對合成產(chǎn)物進(jìn)行表征。采用薄膜分散法及pH梯度法制備阿霉素脂質(zhì)體（LP-DOX），后插入法制備雙靶脂質(zhì)體。通過測定粒徑、Zeta電位、形態(tài)、包封率對脂質(zhì)體進(jìn)行表征。體外評價中以過度表達(dá)葉酸受體的KB細(xì)胞作為細(xì)胞模型。采用MTT法評價雙靶脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性；通過熒光顯微鏡及流式細(xì)胞儀定性定量考察雙靶脂質(zhì)體的攝取效率；應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡觀察雙靶脂質(zhì)體在細(xì)胞內(nèi)的分布情況；最后通過流式細(xì)胞儀及共聚焦顯微鏡考察不同抑制劑的攝取抑制作用來闡明雙靶脂質(zhì)體的內(nèi)吞機(jī)制。 結(jié)果：脂質(zhì)材料DSPE-PEG_(5000)-FA經(jīng)~1H-NMR鑒定，其純度約為75%，DSPE-PEG2000-TAT經(jīng)HPLC計算，其TAT肽連接率約為95%。所制備雙靶脂質(zhì)體平均粒徑為142.1nm，包封率為92.2%，Zeta電位為4.4mV，證明TAT肽的正電荷被成功掩蔽。透射電鏡圖（TEM）顯示，雙靶阿霉素脂質(zhì)體分布均勻且呈球形。MTT實驗表明，配體FA、TAT肽最佳密度分別為5%、2.5%，以此密度構(gòu)建最優(yōu)雙靶脂質(zhì)體FA/TAT-LP-DOX，與葉酸單靶脂質(zhì)體FA-LP-DOX相比，顯著（p0.01）提高了細(xì)胞毒性。細(xì)胞攝取實驗證實，，TAT肽與FA存在協(xié)同作用，雙靶脂質(zhì)體顯著地（p0.01）提高了細(xì)胞攝取，其平均熒光強(qiáng)度為單靶葉酸脂質(zhì)體的1.7倍，攝取速率為單靶葉酸脂質(zhì)體的1.6倍。共聚焦顯微鏡及機(jī)制考察表明，雙靶脂質(zhì)體通過以網(wǎng)格蛋白為主的多種途徑進(jìn)入KB細(xì)胞，遞送至溶酶體，并快速釋放DOX入核。 結(jié)論：本研究構(gòu)建了粒徑均一、包封率高的雙靶阿霉素脂質(zhì)體FA/TAT-LP-DOX，在保留FA主動靶向的基礎(chǔ)上，賦予脂質(zhì)體優(yōu)越的細(xì)胞膜穿透能力，顯著地提高了腫瘤細(xì)胞毒性。以網(wǎng)格蛋白為主的多種內(nèi)吞途徑促進(jìn)了雙靶脂質(zhì)體的細(xì)胞攝取，有利于其發(fā)揮細(xì)胞毒作用。雙靶修飾策略為設(shè)計同時具有靶向及穿透功能的納米載體提供了新穎的思路及一定實驗基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：阿霉素脂質(zhì)體 雙靶 細(xì)胞攝取 攝取機(jī)理
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R943;R96
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 前言11-22
• 1 腫瘤微環(huán)境11-13
• 1.1 腫瘤血管新生11
• 1.2 增強(qiáng)滲透及滯留效應(yīng)11-12
• 1.3 高壓環(huán)境12-13
• 1.4 低 pH 環(huán)境13
• 2 腫瘤靶向策略13-15
• 2.1 被動靶向13
• 2.2 主動靶向13-15
• 2.3 多功能納米載體15
• 3 脂質(zhì)體研究進(jìn)展15-18
• 3.1 免疫脂質(zhì)體16
• 3.2 長循環(huán)脂質(zhì)體16-17
• 3.3 長循環(huán)免疫脂質(zhì)體17
• 3.4 主動靶向脂質(zhì)體的新發(fā)展17-18
• 4 納米載體攝取機(jī)理18-19
• 5 本課題設(shè)計理念及意義19-22
• 第二章 脂質(zhì)材料的合成與表征22-35
• 1 DSPE-PEG_(5000)-FA 的合成與表征22-26
• 1.1 材料與儀器22
• 1.2 實驗方法22-25
• 1.3 實驗結(jié)果25-26
• 2 DSPE-PEG2000-TAT 的合成與表征26-34
• 2.1 材料與儀器26-27
• 2.2 實驗方法27-29
• 2.3 實驗結(jié)果29-34
• 討論與小結(jié)34-35
• 第三章 雙靶脂質(zhì)體的制備及表征35-41
• 1 材料與儀器35
• 1.1 材料與試劑35
• 1.2 實驗儀器35
• 2 實驗方法35-38
• 2.1 DOX 體外分析方法的建立35-36
• 2.2 脂質(zhì)體的制備36-37
• 2.3 脂質(zhì)體的表征37-38
• 3. 實驗結(jié)果38-40
• 3.1 DOX 體外分析方法的建立38-39
• 3.2 粒徑、Zeta 電位及包封率39
• 3.3 TEM 形態(tài)觀察39-40
• 討論與小結(jié)40-41
• 第四章 雙靶脂質(zhì)體的體外評價41-55
• 1 材料與儀器41
• 1.1 材料與試劑41
• 1.2 實驗儀器41
• 2 實驗方法41-44
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)41-42
• 2.2 最佳配體密度的篩選42
• 2.3 細(xì)胞毒性考察42
• 2.4 細(xì)胞攝取考察42-43
• 2.5 細(xì)胞內(nèi)定位研究43
• 2.6 攝取機(jī)理研究43-44
• 2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析44
• 3 實驗結(jié)果44-54
• 3.1 最佳配體密度的篩選44
• 3.2 細(xì)胞毒性考察44-45
• 3.3 細(xì)胞攝取考察45-49
• 3.4 細(xì)胞內(nèi)定位研究49-50
• 3.5 攝取機(jī)理研究50-54
• 討論與小結(jié)54-55
• 全文總結(jié)55-57
• 課題特色57-58
• 后續(xù)工作及展望58-59
• 參考文獻(xiàn)59-66
• 攻讀碩士學(xué)位期間公開發(fā)表的論文66-67
• 致謝67-68

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  本文關(guān)鍵詞：雙靶修飾策略同時實現(xiàn)阿霉素脂質(zhì)體腫瘤細(xì)胞高度識別與攝取，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：385423