本文關(guān)鍵詞：肝素鈉中主要雜質(zhì)的NMR定量分析方法及污染肝素的分離技術(shù)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肝素鈉（Heparin Sodium，HP）是從豬小腸粘膜中提取出來(lái)的一種糖胺聚糖類(lèi)抗凝血藥物，具有抗凝血和抗血栓形成的功能，還有抗炎、抗過(guò)敏、抑制平滑肌細(xì)胞增殖、抗病毒、抗腫瘤等多種生物學(xué)功能，是需要迅速達(dá)到抗凝作用的首選藥物，在臨床上得到廣泛應(yīng)用。 在2008年初，美國(guó)、歐洲等多個(gè)國(guó)家發(fā)生了嚴(yán)重的肝素鈉注射液不良反應(yīng)事件，引發(fā)數(shù)百例病人產(chǎn)生嚴(yán)重的過(guò)敏反應(yīng)，甚至導(dǎo)致了約百例病人死亡。肝素鈉事件在世界范圍內(nèi)引起了廣泛的探討與研究，F(xiàn)DA分析結(jié)果表明：該事件與肝素鈉中存在的污染物多硫酸軟骨素（Oversulfated Chondroitin Sulfate，OSCS）有關(guān)。OSCS具有和肝素鈉相似的結(jié)構(gòu)、相對(duì)分子量范圍，常規(guī)的生物化學(xué)方法難以對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。為了加強(qiáng)該類(lèi)原料質(zhì)量監(jiān)督，建立一種快速有效的檢測(cè)HP中OSCS的方法十分重要。常規(guī)的1H-NMR雖可用于兩者的檢測(cè)，但存在檢出限（Limit of detection，LOD）、定量檢測(cè)限（Limit of quantitation，LOQ）高的缺點(diǎn)。 本文優(yōu)化了1H-NMR法檢測(cè)HP中的OSCS的實(shí)驗(yàn)儀器條件：樣品濃度25mg/mL，定標(biāo)物TSP含量為0.020%（W/V），樣品旋轉(zhuǎn)為10Hz，窗函數(shù)線寬因子Lb為1.00Hz，采樣脈沖序列PULPROG為zg，馳豫延遲時(shí)間D1為4.00s，在此實(shí)驗(yàn)條件另外，LOD為0.01%，比文獻(xiàn)報(bào)道提高了10倍。應(yīng)用峰高法和峰面積法對(duì)HP中雜質(zhì)OSCS進(jìn)行了定量計(jì)算，結(jié)果表明峰高法的LOQ為0.1%，比文獻(xiàn)報(bào)道提高了5倍。 污染肝素的分離純化技術(shù)可使已污染肝素的價(jià)值回歸。同時(shí)，肝素鈉中污染物OSCS的來(lái)源研究對(duì)以后肝素鈉的生產(chǎn)具有重要意義。 利用陰離子樹(shù)脂交換法分離肝素鈉與OSCS的研究。根據(jù)HP與OSCS的電荷數(shù)的不同，以離子交換法對(duì)兩者進(jìn)行分離，采用單因素試驗(yàn)研究了樹(shù)脂型號(hào)、樹(shù)脂用量等因素對(duì)兩者分離度的影響，，最優(yōu)結(jié)果為：樹(shù)脂型號(hào)FBD202，樹(shù)脂用量20%，吸附時(shí)間4h，吸附PH9.5，吸附溫度55℃，鹽濃度15%。分離度達(dá)75%以上。 對(duì)肝素鈉中污染物OSCS來(lái)源的研究。從肝素鈉的主要原料豬小腸著手，將豬小腸分離為三部分（腸粘膜、腸衣、漿膜），分別進(jìn)行粘多糖組成分析，結(jié)果表明：三者均不含有OSCS，腸粘膜中主要成分是HP，而腸衣及漿膜中主要成分是硫酸皮膚素。 有機(jī)溶劑沉淀法分離提純肝素鈉的研究。肝素鈉粗品中含有多種類(lèi)似物雜質(zhì)，如硫酸軟骨素（Chondroitin Sulfate，CS）及硫酸皮膚素（Dermatan Sulfate，DS），根據(jù)其在不同極性的溶劑中溶解度不同而進(jìn)行分離，結(jié)果表明：乙醇、甲醇、丙酮三者均可分離提純HP，溶劑用量分別為：9.1%—28.6%，33.3%—41.2%，16.7%—33.3%。 此外，為了從一張核磁共振氫譜上得到更多有效信息，本文用核磁共振氫譜標(biāo)準(zhǔn)加入法對(duì)肝素鈉中有機(jī)殘留（乙醇、甲醇、丙酮）進(jìn)行了研究，并初步建立了定量計(jì)算肝素鈉中有機(jī)殘留（乙醇、甲醇、丙酮）新方法，結(jié)果表明：丙酮的線性回歸方程為y=0.0012x-0.4631，R~2=0.9825；乙醇的線性回歸方程為y=0.0003x-0.0033，R~2=0.9989；甲醇的線性回歸方程為y=0.0006x+0.0293，R~2=0.9963；本方法采用NMR組學(xué)理論，對(duì)復(fù)雜混合樣品的快速分析提供了思路。
【關(guān)鍵詞】：核磁共振 肝素鈉 多硫酸軟骨素 定量分析 分離純化
【學(xué)位授予單位】：青島科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R927
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 第一章 引言12-35
• 1.1 肝素鈉的綜述12-25
• 1.1.1 肝素鈉的來(lái)源12-15
• 1.1.2 肝素鈉的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與分類(lèi)15-22
• 1.1.3 肝素鈉的生物學(xué)功能22-24
• 1.1.4 肝素鈉事件后需要解決的問(wèn)題24-25
• 1.2 硫酸軟骨素的概述的綜述25-29
• 1.2.1 硫酸軟骨素的來(lái)源與分類(lèi)25-26
• 1.2.2 硫酸軟骨素的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與生物學(xué)功能26-27
• 1.2.3 硫酸皮膚素的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與生物學(xué)功能27-28
• 1.2.4 多硫酸軟骨素的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與生物學(xué)功能28-29
• 1.3 核磁共振在多糖分析領(lǐng)域的應(yīng)用29
• 1.4 肝素鈉事件29-30
• 1.5 肝素鈉中污染物 OSCS 的測(cè)定技術(shù)進(jìn)展30-35
• 第二章 肝素鈉類(lèi)物質(zhì) NMR 譜圖分析與歸屬35-49
• 2.1 未分級(jí)肝素鈉類(lèi)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品的 NMR 譜圖分析與歸屬35-45
• 2.1.1 肝素鈉標(biāo)準(zhǔn)品的1H-NMR 譜圖歸屬35-37
• 2.1.2 肝素鈉標(biāo)準(zhǔn)品的13C-NMR 譜圖歸屬37-39
• 2.1.3 硫酸軟骨素的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及1H-NMR 譜圖歸屬39-41
• 2.1.4 硫酸皮膚素的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及1H-NMR 譜圖歸屬41-42
• 2.1.5 多硫酸軟骨素的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及1H-NMR 譜圖歸屬42-43
• 2.1.6 HP、CS、DS、OSCS 的特征峰歸屬及肝素工業(yè)品的譜圖解析43-45
• 2.2 肝素鈉工業(yè)品的1H-NMR 譜圖歸屬45-49
• 2.2.1 肝素鈉工業(yè)粗品的1H-NMR 譜圖歸屬45-47
• 2.2.2 肝素鈉工業(yè)精品的1H-NMR 譜圖及歸屬47-49
• 第三章 1H-NMR 檢測(cè)分析肝素鈉實(shí)驗(yàn)條件的選擇49-57
• 3.1 樣品的濃度（樣品量）的選擇49
• 3.2 定標(biāo)物及含量的選擇49-52
• 3.3 轉(zhuǎn)速的選擇52-53
• 3.4 處理參數(shù)的選擇53-55
• 3.5 儀器條件的選擇55-57
• 第四章 豬小腸粘膜/腸衣/漿膜中的粘多糖組成探源57-64
• 4.1 試驗(yàn)材料與儀器設(shè)備57-58
• 4.1.1 原料與試劑57-58
• 4.1.2 儀器設(shè)備58
• 4.2 試驗(yàn)方法58-59
• 4.2.1 肝素鈉粗品的提取58-59
• 4.2.2 核磁共振采樣參數(shù)59
• 4.3 結(jié)果與分析59-63
• 4.3.1 腸粘膜部分實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物鑒定59-60
• 4.3.2 腸衣部分實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物鑒定60
• 4.3.3 腸皮部分實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物鑒定60-61
• 4.3.4 腸粘膜、腸衣、漿膜實(shí)驗(yàn)結(jié)果探討與比較61-63
• 4.4 小結(jié)63-64
• 第五章 肝素鈉中 CS、DS 的分離純化64-71
• 5.1 試驗(yàn)材料與儀器設(shè)備64
• 5.1.1 原料與試劑64
• 5.1.2 儀器設(shè)備64
• 5.2 試驗(yàn)方法64-65
• 5.2.1 肝素鈉工業(yè)粗品的乙醇的分布沉淀64
• 5.2.2 肝素鈉工業(yè)粗品的甲醇的分布沉淀64-65
• 5.2.3 肝素鈉工業(yè)粗品的丙酮的分布沉淀65
• 5.3 結(jié)果與分析65-71
• 5.3.1 乙醇分步沉淀的實(shí)驗(yàn)結(jié)果65-67
• 5.3.2 甲醇分步沉淀的實(shí)驗(yàn)結(jié)果67-68
• 5.3.3 丙酮分步沉淀的實(shí)驗(yàn)結(jié)果68-69
• 5.3.4 三種有機(jī)溶劑分步沉淀的實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較69-71
• 第六章 污染肝素鈉中 OSCS 的分離純化71-76
• 6.1 試驗(yàn)材料與儀器設(shè)備71-72
• 6.1.1 原料與試劑71
• 6.1.2 儀器設(shè)備71-72
• 6.2 試驗(yàn)方法72-73
• 6.2.1 新樹(shù)脂的處理方法72
• 6.2.2 強(qiáng)堿型陰離子交換樹(shù)脂吸附 OSCS 的實(shí)驗(yàn)方法72
• 6.2.3 實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的核磁共振氫譜檢測(cè)72-73
• 6.3 結(jié)果與分析73-76
• 6.3.1 不同樹(shù)脂型號(hào)對(duì)肝素鈉分離度的影響73
• 6.3.2 樹(shù)脂用量對(duì)肝素鈉分離度的影響73-74
• 6.3.3 吸附 PH 對(duì)肝素鈉分離度的影響74-75
• 6.3.4 吸附時(shí)間對(duì)肝素鈉分離度的影響75
• 6.3.5 吸附溫度對(duì)肝素鈉分離度的影響75-76
• 6.3.6 鹽濃度對(duì)肝素鈉分離度的影響76
• 6.4 小結(jié)76
• 第七章 定量計(jì)算76-91
• 7.1 試驗(yàn)材料與儀器設(shè)備77
• 7.1.1 原料與試劑77
• 7.1.2 儀器設(shè)備77
• 7.2 試驗(yàn)方法77-78
• 7.2.1 TSP 內(nèi)標(biāo)液的制備77
• 7.2.2 肝素鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備77
• 7.2.3 含 OSCS 的肝素鈉梯度溶液的制備77-78
• 7.2.4 核磁共振采樣參數(shù)78
• 7.3 結(jié)果與分析78-91
• 7.3.1 丙酮的定量實(shí)驗(yàn)78-79
• 7.3.2 乙醇的定量實(shí)驗(yàn)79-80
• 7.3.3 甲醇的定量實(shí)驗(yàn)80-81
• 7.3.4 肝素鈉工業(yè)粗品譜圖定量全分析81-84
• 7.3.5 肝素鈉工業(yè)精品譜圖定量全分析84-86
• 7.3.6 峰高法定量計(jì)算 HP 中的 OSCS86-88
• 7.3.7 峰面積定量計(jì)算 HP 中的 OSCS88-89
• 7.3.8 峰面積與峰高定量計(jì)算的準(zhǔn)確度比較89-91
• 參考文獻(xiàn)91-97
• 論文總結(jié)與創(chuàng)新97-98
• 致謝98-99
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文99-100

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：肝素鈉中主要雜質(zhì)的NMR定量分析方法及污染肝素的分離技術(shù)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：365700