本文關(guān)鍵詞：基于Hsp90-Cdc37蛋白交互作用的抗胰腺癌天然產(chǎn)物篩選，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：胰腺導(dǎo)管腺癌(胰腺癌,Pancreatic cancer)在癌癥引起的死亡人數(shù)中位列第四位。胰腺癌的死亡率與其發(fā)病率相當(dāng)。中老年人人群胰腺癌發(fā)病率明顯高于年輕人,其中僅有20%以下的病人表現(xiàn)為局部的可以治愈的腫瘤,且胰腺癌五年生存率低于5%。近幾十年來(lái),關(guān)于胰腺癌的治療方案并沒(méi)有取得很大的進(jìn)步,手術(shù)治療仍然是主要的治療手段,而由于胰腺癌的快速擴(kuò)散、晚期診斷以及耐藥性導(dǎo)致化療和放療的效果并不明顯。只有15-20%的患者可以進(jìn)行手術(shù)切除腫瘤,而剩余的80%的晚期及腫瘤轉(zhuǎn)移的病人不可以進(jìn)行手術(shù)切除腫瘤,即使是那些已經(jīng)切除腫瘤的病人其五年生存率仍低于15%。目前,吉西他濱是胰腺癌治療的標(biāo)準(zhǔn)化的藥物,然而其僅僅是改善了疾病癥狀,而對(duì)生存率并沒(méi)有明顯的改善。最新研究發(fā)現(xiàn),熱休克蛋白90(Hsp90)在癌癥中扮演著非常重要的角色,與正常情況相比,Hsp90在癌細(xì)胞中表達(dá)量增加2-10倍,這就提示Hsp90可能在癌細(xì)胞的增殖和存活中扮演著非常重要的角色。最近多項(xiàng)研究表明,雷公藤紅素、蘿卜硫素可以通過(guò)阻斷Hsp90蛋白與細(xì)胞分裂周期蛋白Cdc37之間的相互作用起到一定的抗胰腺癌作用,且抑制Hsp90與Cde37之間的相互作用能增強(qiáng)抗胰腺癌專一性并能減弱其副作用�？v觀過(guò)去半個(gè)世紀(jì)的藥物研發(fā)的歷史,天然產(chǎn)物來(lái)源的藥物與合成的化藥相比占了很大的比重。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì),中草藥中有超過(guò)21000種植物物種被全世界范圍內(nèi)廣泛應(yīng)用于疾病預(yù)防與治療,因此,傳統(tǒng)中藥在全世界人民健康領(lǐng)域占有重要的地位,并且為藥物研發(fā)過(guò)程中尋找新的先導(dǎo)化合物提供了的巨大寶庫(kù)。越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn),許多中草藥中的天然產(chǎn)物具有很好的抗癌活性,例如生物堿類、萜類、及黃酮類等都具有很強(qiáng)的抗癌活性。因此從天然產(chǎn)物中篩選能夠阻斷Hsp90與Cdc37之間相互作用并起到抗胰腺癌作用的藥物及先導(dǎo)化合物是抗胰腺癌藥物發(fā)現(xiàn)的一大途徑。傳統(tǒng)的抗癌藥物篩選方法耗時(shí)費(fèi)力且靶向性差,因此有必要建立一種體外模擬體內(nèi)的快速、高效、靶向性強(qiáng)的抗癌藥物篩選方法,從而對(duì)眾多的活性天然產(chǎn)物進(jìn)行快速的篩選。第一部分查閱文獻(xiàn),查找了具有抗癌作用的植物,及從抗癌植物當(dāng)中分離出的天然產(chǎn)物,收集了天然產(chǎn)物600個(gè),建立中藥天然產(chǎn)物庫(kù)。第二部分采用海腎熒光素酶雙分子標(biāo)記技術(shù)建立體外Hsp90-Cdc37蛋白交互作用模型,首先對(duì)模型是否有效進(jìn)行了驗(yàn)證,然后對(duì)模型中影響蛋白交互作用的參數(shù)包括蛋白濃度、反應(yīng)時(shí)間及底物濃度進(jìn)行了優(yōu)化,確定了模型反應(yīng)的最優(yōu)條件。最后采用此模型對(duì)天然產(chǎn)物進(jìn)行了篩選,共篩選到了4個(gè)天然產(chǎn)物可以阻斷Hsp90與Cdc37蛋白之間的交互作用。第三部分針對(duì)篩選到的4個(gè)天然產(chǎn)物進(jìn)行了體外吸收代謝特性的初步評(píng)價(jià),然后對(duì)吸收代謝特性良好的天然產(chǎn)物進(jìn)行了大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究。在藥物篩選的初期,采用體外吸收代謝模型對(duì)藥物的吸收代謝特性進(jìn)行初步的評(píng)價(jià),及早的排除那些吸收代謝特性較差的候選化合物,避免后續(xù)不必要的人力和財(cái)力的浪費(fèi)。本部分采用Caco-2細(xì)胞transwell模型及體外肝微粒體代謝模型對(duì)篩選到的天然產(chǎn)物的吸收代謝特性進(jìn)行了初步的評(píng)價(jià),然后采用大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)對(duì)吸收代謝特性良好的天然產(chǎn)物進(jìn)行了藥代動(dòng)力學(xué)研究。本課題采用海腎熒光素酶雙分子標(biāo)記技術(shù)建立了基于Hsp90-Cdc37蛋白交互作用的天然產(chǎn)物抗胰腺癌篩選方法,可快速靶向篩選出阻斷Hsp90-Cdc37蛋白交互作用并起到抗胰腺癌作用的化合物。采用此模型對(duì)收集到的天然產(chǎn)物進(jìn)行了抗胰腺癌篩選,共篩選到了4個(gè)天然產(chǎn)物(雷公藤甲素、雷公藤三萜酸A、槲皮素和槐果堿)可以阻斷Hsp90-Cdc37之間的相互作用。然后對(duì)篩選到的天然產(chǎn)物的吸收代謝特性進(jìn)行了評(píng)價(jià),而吸收代謝特性好的天然產(chǎn)物則進(jìn)一步進(jìn)行了體內(nèi)藥代動(dòng)力研究。本課題建立一套從抗胰腺癌藥物快速篩選到吸收代謝評(píng)價(jià)的快速高效的抗胰腺癌藥物篩選方法,可以提高抗胰腺癌藥物篩選的靶向性及效率。
【關(guān)鍵詞】：天然產(chǎn)物 Hsp90 Cdc37 海腎熒光素酶雙分子標(biāo)記技術(shù) 藥代動(dòng)力學(xué) Caco-2細(xì)胞 肝微粒體 胰腺癌
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 縮略詞表12-14
• 前言14-21
• 一、課題背景介紹14-20
• (一) 胰腺癌病癥概述14-16
• 1、胰腺癌治療現(xiàn)狀14
• 2、Hsp9014-16
• 3、Cdc3716
• (二) 抗癌藥物發(fā)現(xiàn)概況16-18
• (三) 藥物ADMET研究概況18-20
• 1、藥物腸道吸收18-19
• 2、藥物代謝19-20
• 二、本課題的研究?jī)?nèi)容和意義20-21
• (一) 研究?jī)?nèi)容20
• (二) 研究意義20-21
• 第一章 抗癌中藥天然產(chǎn)物庫(kù)的構(gòu)建21-23
• 一、引言21-22
• 二、抗癌中藥天然產(chǎn)物庫(kù)的構(gòu)建22-23
• 第二章 基于Hsp90/Cdc37蛋白交互作用的抗胰腺癌藥物篩選模型的構(gòu)建23-37
• 一、引言23-25
• 二、實(shí)驗(yàn)部分25-29
• (一) 材料和試劑25-26
• (二) 感受態(tài)細(xì)胞的制備26
• (三) 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化26-27
• (四) 蛋白表達(dá)27
• (五) 蛋白純化27-28
• 1、蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)27
• 2、裝柱27-28
• 3、金屬螯合親和柱純化28
• 4、濃縮和脫鹽28
• 5、蛋白濃度測(cè)定28
• (六) 熒光實(shí)驗(yàn)28
• (七) 影響熒光強(qiáng)度的參數(shù)的優(yōu)化28-29
• (八) 模型的驗(yàn)證29
• (九) 天然產(chǎn)物的篩選29
• 三、結(jié)果與討論29-36
• (一) 蛋白表達(dá)29-31
• (二) 蛋白純化31-32
• (三) 熒光強(qiáng)度參數(shù)的優(yōu)化32-34
• 1、蛋白濃度的優(yōu)化32-33
• 2、結(jié)合時(shí)間的優(yōu)化33-34
• 3、底物濃度的優(yōu)化34
• (四) 模型的驗(yàn)證34-35
• (五) 天然產(chǎn)物的篩選35-36
• 四、本章小結(jié)36-37
• 第三章 藥物體外吸收代謝特性及體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究37-54
• 一、引言37-38
• 二、實(shí)驗(yàn)部分38-47
• (一) 材料和試劑38-39
• (二) 儀器與分析條件39-42
• (三) Caco-2細(xì)胞模型吸收測(cè)定42-44
• 1、細(xì)胞培養(yǎng)42
• 2、細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)42
• 3、轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)42
• 4、樣品處理42-43
• 5、標(biāo)曲和質(zhì)控樣品的制備43
• 6、數(shù)據(jù)分析43-44
• (四) 大鼠肝微粒體代謝穩(wěn)定性考察44-45
• 1、實(shí)驗(yàn)方法44
• 2、標(biāo)曲和質(zhì)控樣品的制備44-45
• 3、數(shù)據(jù)分析45
• (五) 雷公藤甲素大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究45-47
• 1、儀器與分析條件45
• 2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物45
• 3、實(shí)驗(yàn)方法45-46
• 4、血漿樣品前處理方法46
• 5、標(biāo)曲和質(zhì)控樣品的制備46
• 6、方法學(xué)驗(yàn)證46-47
• (1) 選擇性考察46
• (2) 線性及最低定量限46
• (3) 準(zhǔn)確度及精密度46-47
• (4) 提取回收率及基質(zhì)效應(yīng)47
• (5) 穩(wěn)定性47
• 7、數(shù)據(jù)分析47
• 三、結(jié)果與討論47-53
• (一) Caco-2細(xì)胞模型的吸收測(cè)定47-48
• (二) 代謝穩(wěn)定性考察48
• (三) 雷公藤甲素藥代動(dòng)力學(xué)研究48-53
• 1、色譜與質(zhì)譜條件48-50
• 2、方法學(xué)考察50-52
• 3、藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)52-53
• 四、本章小結(jié)53-54
• 附錄54-86
• 參考文獻(xiàn)86-102
• 在讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文102-103
• 致謝103

【相似文獻(xiàn)】

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3 柯華　本報(bào)記者 洪繼東;從天然產(chǎn)物里提取“金子”[N];成都日?qǐng)?bào);2010年

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8 楊杰松　金永紅;專家呼吁——加強(qiáng)以天然產(chǎn)物為來(lái)源的藥物創(chuàng)新[N];健康報(bào);2009年

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