本文關(guān)鍵詞：網(wǎng)格蛋白抑制劑的設(shè)計、合成與生物活性評價，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：在目前的主要流行性傳染病中,因病毒感染引起的疾病占據(jù)了一半以上。盡管目前能夠?qū)е氯祟惣膊〉牟《居袛?shù)百種之多,而被批準的抗病毒療法只有不到10種。大多數(shù)臨床一線的抗病毒藥物主要針對病毒特有的酶類,為直接作用于病毒的抗病毒藥物(direct acting antivirals,DAAs)。然而,病毒在進化過程中具有易變異性,對現(xiàn)有的抗病毒藥物容易產(chǎn)生耐藥,尤其當致病病毒屬于突發(fā)或未知時,沒有大量類似于抗生素一樣廣譜、高效、安全的藥物治療手段,使得新型廣譜抗病毒藥物的研發(fā)具有必要性與緊迫性。已有研究證實,一些病毒如登革病毒,艾滋病毒,Ebola病毒等主要通過網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進入宿主細胞。由于病毒通過網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進入細胞的功能和機制與病毒本身無關(guān),病毒不易產(chǎn)生耐藥性,使得網(wǎng)格蛋白成為近年來廣譜抗病毒藥物研發(fā)的潛在靶標�；衔飌itstop2可以選擇性抑制網(wǎng)格蛋白末端結(jié)構(gòu)域(clathrin terminal domain,CTD)和其他蛋白配體結(jié)合,進而阻斷病毒侵入細胞。本文以pitstop2為先導(dǎo)化合物,基于pitstop2與CTD結(jié)合的方式,保留其活性必需基團,同時將pitstop2的結(jié)構(gòu)分成三個區(qū)域進行化合物的設(shè)計改造,共首次合成了28個新化合物,其結(jié)構(gòu)均經(jīng)MS、1H-NMR確證。采用非洲綠猴腎細胞(Vero細胞)和橫紋肌瘤細胞(RD細胞),通過細胞水平的體外藥效學(xué)試驗評價了所合成化合物的抗腸道病毒(EV71病毒)活性,并且評價了化合物對Vero細胞和RD細胞毒性。同時,通過熒光標記法檢測化合物對依賴網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用和非依賴網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進入細胞的貨物分子的作用,探索化合物抗病毒活性的作用機制。實驗結(jié)果表明,化合物3、4、5、6、8和14具有良好的抗EV71活性,其中化合物3的活性最好,其抗病毒活性與陽性藥相當,且對細胞毒性要小于陽性藥。而熒光標記法的實驗結(jié)果顯示,化合物3在10μM濃度下能夠抑制網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑,并且該作用具有可逆性。此外,該化合物對于非網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用沒有抑制作用,說明化合物能夠特異性作用于網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑,從而起到抗病毒的作用。根據(jù)化合物的生物活性評價結(jié)果,可得出化合物結(jié)構(gòu)和生物活性之間的一些初步的構(gòu)效關(guān)系,苯環(huán)上引入羥基對化合物的活性有很大的影響。噻唑環(huán)連接疏水性基團可能對化合物的活性有一定的促進作用。而萘環(huán)是這一系列化合物的活性必需基團。綜上所述,化合物3特異性抑制網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用,可以作為廣譜抗病毒藥物研發(fā)的先導(dǎo)化合物進行深入地研究。
【關(guān)鍵詞】：廣譜抗病毒 網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用 網(wǎng)格蛋白抑制劑 合成 活性評價
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R914;R96
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 第1章 緒論9-19
• 1.1 網(wǎng)格蛋白的結(jié)構(gòu)與功能9-12
• 1.1.1 網(wǎng)格蛋白的結(jié)構(gòu)9-11
• 1.1.2 網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑11-12
• 1.2 網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)型內(nèi)吞途徑抑制劑的研究進展12-18
• 1.2.1 發(fā)動蛋白抑制劑14-16
• 1.2.2 網(wǎng)格蛋白抑制劑16-17
• 1.2.3 其他17-18
• 1.3 小結(jié)18-19
• 第2章 網(wǎng)格蛋白抑制劑的設(shè)計與合成19-34
• 2.1 網(wǎng)格蛋白抑制劑的設(shè)計19-20
• 2.2 網(wǎng)格蛋白抑制劑的合成20-24
• 2.3 實驗方法24-34
• 第3章 網(wǎng)格蛋白抑制劑的生物活性評價34-41
• 3.1 化合物抗腸道病毒EV71活性篩選34-37
• 3.2 化合物對細胞貨物分子內(nèi)吞作用的抑制37-39
• 3.3 小結(jié)與討論39-41
• 第4章 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-48
• 附圖48-76
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果76-77
• 致謝77

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  本文關(guān)鍵詞：網(wǎng)格蛋白抑制劑的設(shè)計、合成與生物活性評價，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：355765