發(fā)布時(shí)間：2017-05-03 22:01

  本文關(guān)鍵詞：PGDS-DP通路參與鋁鹽致原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元損傷機(jī)制初步探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：(1)觀察鋁負(fù)荷原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元PGDS-DP通路變化特征；(2)觀察PGDS-DP通路干預(yù)對(duì)鋁負(fù)荷原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元的影響。方法：(1)鋁負(fù)荷原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元PGDS-DP通路變化情況選取孕期18d左右的SD大鼠,離體培養(yǎng)胎鼠海馬神經(jīng)元,d7進(jìn)行NSE免疫組化鑒定并給予麥芽酚鋁(Al(malt)3,終濃度100μM)建立鋁負(fù)荷致原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元損傷模型(空白對(duì)照組給予PBS,對(duì)照組給予300μM麥芽酚)。MTT法測(cè)定海馬神經(jīng)元存活率；LDH法測(cè)定海馬神經(jīng)元乳酸脫氫酶漏出率；HE染色法觀察海馬神經(jīng)元病理形態(tài)學(xué)變化；ELISA試劑盒檢測(cè)海馬神經(jīng)元PGD2含量；RT-PCR檢測(cè)海馬神經(jīng)元L-PGDS、DP1、DP2mRNA表達(dá)；Western-Blotting檢測(cè)海馬神經(jīng)元L-PGDS、DP1、DP2蛋白表達(dá)。(2) PGDS-DP通路干預(yù)對(duì)鋁負(fù)荷原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元的作用觀察選取孕期18d左右的SD大鼠,離體培養(yǎng)胎鼠海馬神經(jīng)元,d7給予Al(malt)3建立鋁負(fù)荷致原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元損傷模型,并給予DP1激動(dòng)劑BW245C、DPI拮抗劑BWA868C. DP2激動(dòng)劑DK-PGD2=DP2拮抗劑CAY10471進(jìn)行干預(yù)。MTT法測(cè)定海馬神經(jīng)元存活率；LDH法測(cè)定海馬神經(jīng)元乳酸脫氫酶漏出率；HE染色法觀察海馬神經(jīng)元病理形態(tài)學(xué)變化；Ca2+熒光探針Fluo-3/AM檢測(cè)海馬神經(jīng)元胞內(nèi)Ca2+水平。結(jié)果：(1)培養(yǎng)至7d的海馬神經(jīng)元聚集成團(tuán),有較強(qiáng)折光率；胞體呈橢圓形或錐體形,突起相互交織成稠密的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。NSE鑒定神經(jīng)元純度超過95%。與空白對(duì)照組相比,鋁負(fù)荷模型組神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)目明顯減少,突起萎縮甚至消失,部分細(xì)胞核固縮；MTT值明顯降低；LDH漏出率明顯升高；PGD2含量明顯升高；L-PGDS=DP1 mRNA和蛋白表達(dá)明顯升高；DP2mRNA和蛋白表達(dá)明顯降低。(2)與空白對(duì)照組相比,鋁負(fù)荷模型組神經(jīng)元Ca2+熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)。與鋁負(fù)荷模型組相比,DP1激動(dòng)劑BW245C干預(yù)組海馬神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)目明顯增多,部分突起仍相互交織成網(wǎng)狀；MTT值明顯升高；LDH漏出率明顯降低；Ca2+熒光強(qiáng)度明顯減弱。DP1拮抗劑BWA868C干預(yù)組海馬神經(jīng)元胞體破裂,無完整細(xì)胞結(jié)構(gòu)；MTT值明顯降低；LDH漏出率明顯升高；盡管Ca2+熒光強(qiáng)度有增強(qiáng)趨勢(shì),但無顯著性。DP2激動(dòng)劑DK-PGD2干預(yù)組海馬神經(jīng)細(xì)胞幾乎全部核固縮、裂解：MTT值明顯降低；LDH漏出率明顯升高；Ca2+熒光強(qiáng)度有增強(qiáng)趨勢(shì),但無顯著性。DP2拮抗劑CAY10471干預(yù)組海馬神經(jīng)細(xì)胞胞體、胞核明顯,裂解細(xì)胞明顯減少；MTT值明顯升高；LDH漏出率明顯降低;Ca2+熒光強(qiáng)度明顯降低。結(jié)論：(1)鋁負(fù)荷原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元PGD2含量增加,L-PGDS.DP1表達(dá)升高,DP2表達(dá)降低。(2)DP1表達(dá)與激活可減弱神經(jīng)元對(duì)鋁鹽損傷的易感性,DP2表達(dá)與激活可增強(qiáng)神經(jīng)元對(duì)鋁鹽損傷的易感性。(3) PGDS-DP通路可能參與了鋁負(fù)荷致原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元損傷機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元 麥芽酚鋁 L-PGDs PGD_2 DP1 DP2
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R965
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-19
• 參考文獻(xiàn)16-19
• 第一部分：鋁負(fù)荷原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元PGDS-DP通路變化情況19-46
• 1 材料與方法19-31
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-38
• 3 討論38-41
• 小結(jié)41-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 第二部分：PGDS-DP通路干預(yù)對(duì)鋁負(fù)荷原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元的作用觀察46-65
• 1 材料與方法46-49
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-58
• 3 討論58-61
• 小結(jié)61-62
• 參考文獻(xiàn)62-65
• 全文總結(jié)65-66
• 文獻(xiàn)綜述66-74
• 參考文獻(xiàn)70-74
• 致謝74-75
• 攻讀碩士研究生期間發(fā)表的論文75

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