本文關(guān)鍵詞：丁酸鈉基于PKM2干預(yù)大鼠心肌缺血性損傷的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：急性心肌缺血是冠狀動脈急性、持續(xù)性閉塞所導(dǎo)致的,如不及時救治,將導(dǎo)致局部心肌壞死。其由于起病急、病情危重和病死率高,一直是中老年人猝死的主要原因。當(dāng)前調(diào)查顯示,我國急性心肌缺血發(fā)病率呈年輕化趨勢,猝死率高,嚴重威脅著人們的生命與健康。目前急性心肌缺血的治療以藥物治療為主,同時配合冠狀動脈介入治療等再灌注方法,但如何提高抗心肌缺血的治療效果、減少不良反應(yīng)及改善預(yù)后仍是當(dāng)前面臨的主要問題。丁酸鈉作為一種組蛋白去乙酰化酶抑制劑,已經(jīng)在多個領(lǐng)域有了廣泛應(yīng)用。丁酸鈉能夠抑制腫瘤細胞的增殖及促進腫瘤細胞的衰老、凋亡。這可能與丁酸鈉調(diào)控組蛋白的乙�；接嘘P(guān),并且丁酸鈉在腫瘤領(lǐng)域的臨床研究上已經(jīng)得到應(yīng)用。有研究報道,丁酸鈉可保護急性缺血的心肌組織,而在心肌缺血保護和治療方面研究的還不夠深入,相關(guān)機制及信號通路并沒有具體闡明。丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)是糖酵解途徑中的關(guān)鍵限速酶,能不可逆地催化其上游底物磷酸烯醇式丙酮酸(Phosphoenolpyruvic acid,PEP)生成丙酮酸,并生成一分子ATP。M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)為PK的同工酶之一。PKM2在增殖的細胞中特別是腫瘤細胞中有高表達,其四聚體和二聚體形式之間的轉(zhuǎn)換決定了葡萄糖轉(zhuǎn)化成丙酮酸后是用于供能還是參與到生物合成的過程中。隨著對其調(diào)節(jié)機制的深入研究,PKM2在腫瘤代謝方面的重要作用使其成為臨床上腫瘤治療的一個新的靶點,但近來其在心肌能量代謝方面的研究受到學(xué)者們的關(guān)注。本實驗擬基于PKM2,尋找丁酸鈉干預(yù)心肌缺血的保護作用機制。實驗?zāi)康?本實驗主要研究丁酸鈉對心肌缺血損傷的保護作用,觀察這種作用是否由調(diào)節(jié)PKM2表達及其活性產(chǎn)生;進一步探討丁酸鈉基于PKM2對心肌缺血時能量代謝的影響,研究丁酸鈉基于PKM2對急性心肌缺血保護作用的機制。實驗方法:構(gòu)建心肌缺血大鼠模型,檢測各組模型是否制備成功;檢測丁酸鈉各給藥組是否對心肌缺血起到保護作用。應(yīng)用westernblot實驗檢測pkm2在急性心肌缺血后1d、2d、3d及7d的表達情況,從而確定在心肌缺血過程中pkm2表達量的動態(tài)變化;采用western技術(shù)檢測pkm1、pkm2在正常組織和缺血心肌組織中蛋白表達量的變化,從而觀察在心肌缺血損傷中pkm1與pkm2的相互關(guān)系;再給予pkm2特異性抑制劑紫草素后,檢測血清心肌酶、mda含量、sod活性及相關(guān)蛋白表達,以確認丁酸鈉對心肌缺血損傷的保護作用是否通過pkm2實現(xiàn)的。采用免疫熒光實驗,觀察給予丁酸鈉對pkm2表達的影響;采用丙酮酸激酶活性試劑盒,檢測丙酮酸激酶活性,進而觀察在急性心肌缺血后不同時間點pkm2活性的變化情況;應(yīng)用三磷酸腺苷(atp)含量試劑盒,檢測給予丁酸鈉后對atp含量的影響。實驗結(jié)果:實驗發(fā)現(xiàn),丁酸鈉減少心肌缺血大鼠心肌梗死面積,降低血清心肌酶ast、ck、ldh,減少mda含量,升高sod活性。通過westernblot實驗發(fā)現(xiàn),心肌缺血后1、2、3和7天pkm2的表達量增加;采用westernblot技術(shù)與免疫熒光技術(shù)發(fā)現(xiàn),給予丁酸鈉增加缺血心肌組織pkm2的表達,以2天組表達量最高,提示丁酸鈉可能促進心肌缺血后pkm2的表達。實驗發(fā)現(xiàn),丁酸鈉能提高心肌缺血大鼠丙酮酸激酶活性,增加atp含量。選用pkm2的特異性抑制劑紫草素發(fā)現(xiàn),紫草素能拮抗丁酸鈉對心肌梗死面積的影響,以及丁酸鈉對ck、ast、ldh的作用,提示給予紫草素抑制pkm2后心肌損傷程度加重。通過westernblot實驗發(fā)現(xiàn),給予抑制劑紫草素后下調(diào)心肌組織中pkm2的表達,減弱了丁酸鈉增加pkm2表達的作用,提示丁酸鈉對急性心肌缺血的保護作用有pkm2的參與。實驗結(jié)論:1.丁酸鈉降低心肌缺血大鼠梗死面積,對大鼠急性心肌缺血性損傷有保護作用。2.缺血大鼠心肌組織中pkm2表達增加,且在缺血后的第二天最明顯。3.丁酸鈉能夠上調(diào)pkm2的表達,增強其活性,增加atp的含量。4.pkm2抑制劑紫草素能部分拮抗丁酸鈉的作用,提示丁酸鈉對缺血心肌的保護作用部分通過調(diào)控pkm2來實現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：丁酸鈉 心肌缺血 PKM2 PKM1 心肌能量代謝
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R965
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 英文縮寫詞表12-13
• 引言13-14
• 第1章 文獻綜述14-22
• 1.1 心肌梗死的概況14-16
• 1.1.1 心肌梗死的簡介14
• 1.1.2 心肌缺血的治療方法14-16
• 1.2 丁酸鈉簡介16-17
• 1.3 PKM2與心肌缺血的關(guān)系17-22
• 1.3.1 PKM2簡介17-18
• 1.3.2 PKM2與腫瘤的關(guān)系18-19
• 1.3.3 PKM1與PKM2的相互轉(zhuǎn)換19-20
• 1.3.4 PKM2與能量代謝的關(guān)系20-22
• 第2章 實驗材料與方法22-30
• 2.1 實驗用動物22
• 2.2 主要儀器設(shè)備22
• 2.3 主要試劑22-23
• 2.4 主要試劑的配制23-26
• 2.5 動物實驗方法26-28
• 2.6 相關(guān)實驗方法28-29
• 2.7 統(tǒng)計學(xué)分析29-30
• 第3章 實驗結(jié)果30-49
• 3.1 丁酸鈉對大鼠急性心肌缺血損傷的保護作用30-35
• 3.1.1 丁酸鈉對大鼠心肌梗死面積的影響30-31
• 3.1.2 丁酸鈉對心肌缺血大鼠血清心肌酶的影響31-33
• 3.1.3 丁酸鈉對心肌缺血大鼠血清MDA和SOD的影響33-35
• 3.2 丁酸鈉對心肌缺血大鼠保護作用的機制35-39
• 3.2.1 PKM2在大鼠心肌缺血過程中的動態(tài)變化35-36
• 3.2.2 丁酸鈉對大鼠心肌缺血過程中PKM2動態(tài)變化的影響36-39
• 3.3 PKM1表達量的變化39-42
• 3.3.1 PKM1在大鼠心肌缺血過程中的動態(tài)變化39-40
• 3.3.2 丁酸鈉對大鼠心肌缺血過程中PKM1動態(tài)變化的影響40-42
• 3.4 紫草素（SHIKONIN）對大鼠心肌缺血過程中PKM2動態(tài)變化的影響42-46
• 3.4.1 紫草素對心肌缺血大鼠心肌梗死面積和心肌酶的影響43-44
• 3.4.2 紫草素對大鼠心肌缺血過程中PKM2變化的影響44-45
• 3.4.3 紫草素對大鼠心肌缺血過程中PKM1態(tài)變化的影響45-46
• 3.5 丁酸鈉對心肌缺血大鼠丙酮酸激酶活性的影響46-47
• 3.6 丁酸鈉對心肌缺血大鼠心肌能量代謝變化的影響47-49
• 第4章 討論49-52
• 第5章 結(jié)論52-53
• 參考文獻53-61
• 致謝61

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Lucia Carulli;;Telomere shortening as genetic risk factor of liver cirrhosis[J];World Journal of Gastroenterology;2015年02期

  本文關(guān)鍵詞：丁酸鈉基于PKM2干預(yù)大鼠心肌缺血性損傷的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：338529