發(fā)布時間：2017-04-30 18:11

  本文關鍵詞：高氨損傷肝細胞中CPS-Ⅱ特異性表達變化的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的為了研究肝衰竭病理過程中血氨的代謝特點,尤其是血氨通過氨基甲酰磷酸合酶Ⅱ(human carbamyi phosphate synthetase-Ⅱ, CPS-Ⅱ)途徑的基本機制,探索血氨升高對肝細胞損傷的基本規(guī)律,為高血氨在肝衰竭發(fā)生中的分子生物學機制提供理論基礎。方法體外構建細胞高血氨模型,設定不同梯度濃度的氯化銨(NH4C1)干預肝細胞混合孵育,光鏡下觀察肝細胞形態(tài)變化,流式細胞儀檢測細胞凋亡率,Real-time PCR (RT-PCR)檢測CPS-Ⅱ基因表達情況,Western blot檢測CPS-Ⅱ蛋白定量。結果光鏡下干預組與對照組相比,隨著氨濃度的升高,肝細胞均出現(xiàn)不同程度的損傷、壞死和凋亡,對照組肝細胞形態(tài)良好。流式細胞儀分析發(fā)現(xiàn)肝細胞凋亡率逐漸增高,干預組細胞凋亡率(24.7%±2.39%)明顯上升,顯著高于對照組(4.1%±0.78%, q=8.06, P0.01). RT-PCR結果表明肝細胞中CPS-Ⅱ的mRNA的表達隨著氨濃度梯度呈升高的趨勢,對照組與干預組CPS-Ⅱ的mRNA的灰度值分別為1.040±0.045、1.641±0.123、2.285±0.167、3.347±0.124與正常對照組相比,干預組CPS-Ⅱ的mRNA的表達逐漸增強(F=191.881, P0.01)。 Western blot結果顯示CPS-Ⅱ蛋白表達水平顯著增強,CPS-Ⅱ蛋白與內參GAPDH灰度值比值：0.099±0.0130,0.143±0.025、0.161±0.036和0.223±0.042,干預組均明顯高于對照組(t值分別為3.825、3.968和6.908,P0.01)。結論隨著肝細胞外氨濃度升高,CPS-Ⅱ在肝細胞損傷中mRNA水平和蛋白表達均增強,表明在高氨情況下除鳥氨酸循環(huán)外,CPS-Ⅱ在參與氨代謝中可能發(fā)揮著重要作用。
【關鍵詞】：CPS-Ⅱ 氨代謝 氨
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要4-6
• abstract6-9
• 中英文縮略詞對照表9-10
• 研究背景10-17
• 前言17-21
• 1 材料和試劑21-24
• 2 實驗方法24-28
• 結果28-31
• 討論31-34
• 參考文獻34-37
• 綜述37-48
• 參考文獻46-48
• 個人簡歷及在研期間發(fā)表論文48-49
• 致謝49

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前4條

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  本文關鍵詞：高氨損傷肝細胞中CPS-Ⅱ特異性表達變化的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：337364