發(fā)布時間：2017-04-29 02:03

  本文關(guān)鍵詞：“Cocktail”探針?biāo)幬锓ㄔu價丹參酮ⅡA對大鼠肝微粒體細胞色素P450不同亞型體外代謝活性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 建立評價大鼠肝微粒體藥物代謝酶細胞色素P450(Cytochrome P450, CYP450)不同亞型CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4活性的'Cocktail"探針?biāo)幬锶芤旱母咝б合嗌V檢測方法；優(yōu)化肝微粒體孵育條件,建立肝微粒體體外孵育體系,研究丹參酮IⅡA對大鼠肝微粒體該6種主要CYP450亞型體外代謝活性的影響,為臨床合理用藥提供參考。 方法： 選擇CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4的特異性代謝底物咖啡因、美托洛爾、奧美拉唑、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗和咪達唑侖制備成"Cocktail"探針溶液,建立同時測定該6種探針?biāo)幬镌诟挝⒘ｓw中的高效液相色譜檢測方法。通過優(yōu)化微粒體蛋白濃度和孵育時間,建立肝微粒體體外孵育體系。研究丹參酮ⅡA對大鼠肝微粒體內(nèi)6種主要CYP亞型活性的影響。實驗分三組進行：丹參酮ⅡA組、空白對照組和無活性組(不加大鼠肝微粒體組),每組實驗平行三個樣本。應(yīng)用高效液相色譜-紫外檢測(HPLC-UV)法檢測大鼠肝微粒體中丹參酮ⅡA對探針底物代謝剩余量的影響,得到酶活性百分數(shù),以丹參酮ⅡA濃度的對數(shù)為橫坐標(biāo),以酶活性百分數(shù)為縱坐標(biāo),使用GraphPad Prism5.0軟件按照非線性回歸,作圖并計算IC50值。評價丹參酮ⅡA在大鼠肝微粒體孵育體系中對CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4體外代謝活性的影響。 結(jié)果： 1.本研究所建立的高效液相色譜方法,可以同時測定6種探針?biāo)幬锟Х纫�、美托洛爾、氯唑沙宗、奧美拉唑、甲苯磺丁脲和咪達唑侖在肝微粒體中的濃度,各吸收峰分離完全,線性關(guān)系良好,準(zhǔn)確度、精密度及穩(wěn)定性均符合生物樣本檢測要求,操作簡便。 2.低濃度(0.5、1、2、4、8、16μmol·L-1)丹參酮ⅡA對大鼠肝微粒CYP1A2、 CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4酶活性無顯著性影響(P0.05),而高濃度(32和96μmol·L-1)丹參酮ⅡA對大鼠肝微粒CYP1A2、 CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9和CYP2E1酶活性具有抑制作用(P0.05)。丹參酮ⅡA對大鼠肝微粒CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1的IC50值分別為32.48、34.76、26.12、26.29和26.38μmol·L-1,表示對其具有弱抑制作用。 結(jié)論： 1.本研究建立的大鼠肝微粒體中的'Cocktail"探針?biāo)幬锓ú僮骱啽?精密度、準(zhǔn)確度、靈敏度高,檢測周期短,能夠同時評價藥物在體外對大鼠肝微粒體6種主要CYP450亞型CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4活性的影響。 2.丹參酮ⅡA在體外大鼠肝微粒孵育體系中對CYP1A2、CYP2D6、 CYP2C19、CYP2C9和CYP2E1的代謝活性具有較弱的抑制作用。臨床上通常不易發(fā)生代謝性藥物相互作用。
【關(guān)鍵詞】：細胞色素P450 酶(CYP450) 大鼠肝微粒體“Cocktail”探針?biāo)幬锓?/strong> 高效液相色譜 丹參酮ⅡA藥物相互作用
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R96
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• ~.略語10-11
• 前言11-15
• 研究現(xiàn)狀、成果11-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、“Cocktail”探針?biāo)幬锏闹苽浼癏PLC方法的建立15-31
• 1 實驗材料15-16
• 2 實驗方法16-19
• 3 實驗結(jié)果19-30
• 3.1 方法的專一性19-21
• 3.2 肝微粒體標(biāo)準(zhǔn)曲線21-25
• 3.3 肝微粒體樣品的靈敏度25-26
• 3.4 精密度實驗結(jié)果26-28
• 3.5 回收率實驗結(jié)果28-30
• 3.6 穩(wěn)定性實驗結(jié)果30
• 4 小結(jié)30-31
• 二、“Cocktail”探針?biāo)幬锓ㄔu價丹參酮ⅡA對大鼠肝微粒體CYP450不同亞型體外代謝活性的影響31-41
• 1 實驗材料31-32
• 2 實驗方法32-35
• 3 實驗結(jié)果35-40
• 3.1 不同濃度丹參酮ⅡA對大鼠肝微粒體CYPs酶活性的影響35-36
• 3.2 抑制曲線及IC_(50)結(jié)果36-40
• 4 小結(jié)40-41
• 討論41-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻49-54
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明54-55
• 綜述55-75
• 綜述參考文獻71-75
• 致謝75

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：“Cocktail”探針?biāo)幬锓ㄔu價丹參酮ⅡA對大鼠肝微粒體細胞色素P450不同亞型體外代謝活性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：333958

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