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長效GLP-1-IgG2σ Fc融合蛋白的真核表達與生物活性鑒定

發(fā)布時間:2017-04-28 07:14

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【摘要】:目的:在真核細胞中融合表達胰高血糖素樣肽1(GLP-1),純化后探究產(chǎn)物的生物學活性。方法:通過預留酶切位點將合成的GLP-1-Ig G2σFc融合蛋白表達序列連入表達載體質粒,用電轉方法將線性化質粒穩(wěn)定轉染CHO-K1細胞,通過亞克隆篩選出蛋白高表達細胞株;收集高表達細胞株培養(yǎng)上清并初步純化,采用口服葡萄糖耐量試驗(OGTT)探究GLP-1融合蛋白降低血糖的生物學活性。結果:經(jīng)過一輪亞克隆,篩選得到的細胞株的GLP-1融合蛋白產(chǎn)量達1 g/L,OGTT實驗結果表明GLP-1融合蛋白具有降血糖生物活性。結論:GLP-1變體和Ig G2σ的Fc段連接是一種可行的融合蛋白形式,融合蛋白具有GLP-1受體激動劑的降糖作用,并且細胞株的篩選方式和初步純化方法也具有可行性,為后續(xù)的體內(nèi)、外活性研究和純化方法確定提供了基礎。
【作者單位】: 安徽醫(yī)科大學;軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所;
【關鍵詞】胰高血糖素樣肽 受體激動劑 融合蛋白 真核表達 口服葡萄糖耐量試驗
【基金】:國家自然科學基金(81272701)
【分類號】:R392;Q78
【正文快照】: 胰高血糖素樣肽1(glucagon like peptide-1,GLP-1)是由胰高血糖素原基因編碼的一種腸促胰島素激素,由腸道L細胞在接受進食刺激后合成分泌[1];谄溲且蕾囆缘拇龠M胰島素分泌作用和抑制胰高血糖素釋放作用,GLP-1成為一種極具潛力的糖尿病治療藥物。然而,制約GLP-1成藥的主

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