發(fā)布時(shí)間：2017-04-26 09:01

  本文關(guān)鍵詞：LKB1對大腸癌血管生成及轉(zhuǎn)移影響的分子機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究LKB1對大腸癌血管生成及轉(zhuǎn)移影響的分子機(jī)制,探討二甲雙胍對LKB1-AMPK-AKT信號(hào)通路的影響,為大腸癌的基因治療提供新的分子靶點(diǎn),對突變或缺失的LKB1進(jìn)行修補(bǔ)有望成為治療大腸癌血管生成及轉(zhuǎn)移的新方法。方法:采用免疫組織化學(xué)SP法檢測大腸癌組織芯片中抑癌基因LKB1的表達(dá)趨勢。通過體外培養(yǎng)大腸癌LoVo細(xì)胞,將人工合成的LKB1siRNA由LipofectamineTM2000介導(dǎo)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。同時(shí)采用CCK8試劑盒檢測在不同時(shí)間段不同濃度二甲雙胍對大腸癌LoVo細(xì)胞的增殖影響,然后用適宜濃度的二甲雙胍干預(yù)轉(zhuǎn)染的大腸癌LoVo細(xì)胞。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,通過Western-Blot檢測LKB1和P-LKB1、AMPK和P-AMPK、AKT和P-AKT蛋白的表達(dá)量。Boyden小室法測定二甲雙胍對轉(zhuǎn)染的大腸癌LoVo細(xì)胞遷移力和侵襲力的影響。結(jié)果:轉(zhuǎn)染LKB1siRNA約48h后,Western-Blot檢測LKB1和P-LKB1表達(dá)量明顯減少,P-AMPK表達(dá)量也明顯降低,而P-AKT表達(dá)量卻增加,AMPK和AKT表達(dá)量均無明顯變化。當(dāng)二甲雙胍濃度為20Mmol/L,干預(yù)細(xì)胞48小時(shí),抑制率約50%,用20Mmol/L濃度二甲雙胍干預(yù)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞后,LKB1、P-LKB1、AMPK、AKT蛋白表達(dá)量幾乎沒有增加,而P-AMPK表達(dá)量卻增加,進(jìn)而抑制了AKT的活化,使P-AKT表達(dá)量減少。結(jié)論:轉(zhuǎn)染LKB1siRNA能敲除大腸癌LoVo細(xì)胞抑癌基因LKB1,LKB1表達(dá)降低。LKB1的缺失導(dǎo)致其下游通路中磷酸化AMPK減少,使磷酸化AKT的活化增加,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和血管生成,增強(qiáng)了大腸癌細(xì)胞遷移和侵襲力。二甲雙胍在LKB1-AMPK-AKT信號(hào)通路中,可直接通過激活A(yù)MPK阻礙腫瘤細(xì)胞內(nèi)蛋白合成,抑制腫瘤細(xì)胞的惡性增殖。
【關(guān)鍵詞】：組織芯片 LKB1小干擾RNA LoVo細(xì)胞 遷移 侵襲
【學(xué)位授予單位】：湖北科技學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 縮略詞4-5
• 中文摘要5-6
• ABSTRACT6-8
• 前言8-10
• 第一部分 免疫組織化學(xué)法檢測大腸癌組織中LKB1表達(dá)10-16
• 材料10-11
• 方法11-12
• 結(jié)果12-15
• 討論15
• 結(jié)論15-16
• 第二部分 LKB1對大腸癌LoVo細(xì)胞生物學(xué)行為的影響16-42
• 實(shí)驗(yàn)一 SiRNA沉默LKB1基因表達(dá)16-22
• 材料16-18
• 方法18-22
• 實(shí)驗(yàn)二 二甲雙胍對LKB1-AMPK-AKT信號(hào)通路的影響22-28
• 材料22-25
• 方法25-28
• 實(shí)驗(yàn)三 二甲雙胍對大腸癌Lo Vo細(xì)胞遷移和侵襲的影響28-31
• 材料28-29
• 方法29-31
• 結(jié)果31-40
• 討論40-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-44
• 綜述44-50
• 參考文獻(xiàn)48-50
• 攻讀學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果50-51
• 致謝51

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2 劉福坤;大腸癌化療的回顧與展望[J];大腸肛門病外科雜志;2003年04期

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4 王志軍;中藥輔助大腸癌化療的臨床觀察[J];甘肅科技;2003年07期

5 金海敏;李克強(qiáng);孟慶勇;;膠滴腫瘤藥敏檢測技術(shù)在大腸癌治療中的應(yīng)用[J];浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2008年02期

6 胡麗娟;黃紹剛;周福生;黃穗平;;中醫(yī)藥抗大腸癌的研究思路[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2008年08期

7 韓力;潘永福;;大腸癌從脾論治研究進(jìn)展[J];上海中醫(yī)藥雜志;2010年01期

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本文編號(hào)：328104