本文關(guān)鍵詞：吉非替尼對奧沙利鉑體外抗睪丸癌作用的影響及可能機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：1.觀察吉非替尼(gefitineb)對睪丸間質(zhì)腫瘤(I-10)細胞間縫隙連接(gap junction,GJ)功能的影響。2.觀察吉非替尼與奧沙利鉑(oxaliplatin, OHP)合用對I-10細胞生存率及凋亡的影響并探討其可能機制。3.探討吉非替尼增強I-10細胞GJ功能的激酶(PKC、src)調(diào)節(jié)機制。方法：1.MTT法檢測藥物對I-10細胞生長的影響。2.細胞熒光示蹤法(parachu te)檢測I-10細胞間的GJ功能。3.細胞免疫熒光法檢測I-10細胞膜上Cx43的表達。4Western blot法檢測I-10細胞中Cx43、磷酸化Cx43、激酶PKC、src、凋亡蛋白Bax、Bcl-2、caspase 3、9的表達。5. Annexin V-FITC/PI雙染法和Hoechst 33258法分別檢測I-10細胞的早期和晚期凋亡結(jié)果：1.0～5μ(0.25、0.5、1、2μM)的吉非替尼顯著增強I-10細胞間的熒光傳遞能力及細胞膜上Cx43的蛋白表達。與對照組相比,吉非替尼藥物組的GJ熒光傳遞分別增強40.17%±18.4%(P0.05)、190.43%±11.5%(P0.01)、167.81%±9.8%(P0.01)、153.38%±10.4%(P0.01),其中濃度在0.5μM作用時的作用最強。2.實驗中選用0.5μM的吉非替尼與不同濃度的OHP合用,觀察其對I-10細胞的毒性作用。與單用OHP比較,40 μM的OHP與吉非替尼合用時細胞毒性作用顯著增強(P0.01)；40μM OHP與吉非替尼合用對I-10細胞的早期和晚期凋亡進行檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與OHP單用組相比,合用組的早期和晚期凋亡率分別增加了32.6%±14.2%和30.5%±9.7%(均P0.05)3.細胞熒光示蹤法檢測細胞GJ功能結(jié)果表明,與OHP單用組相比,合用組(吉非替尼+OHP)的GJ熒光傳遞能力增強180%±30.6%(P0.01),膜Cx43表達亦顯著增強；Western blot檢測Cx43總蛋白和磷酸化蛋白結(jié)果表明,與OHP單用組相比,合用組(吉非替尼+OHP)的Cx43總蛋白表達增加了170.43%±23.3%,磷酸化水平降低了57.94%±10.3%(均P0.01)4Western blot檢測檢測細胞凋亡相關(guān)蛋白結(jié)果表明,與OHP單用組相比,合用組(吉非替尼+OHP)凋亡蛋白Bax/Bc1-2的比值增加了63.05%±15.4%、剪切的caspase 3、9表達分別增加了43.2%±5.2%和32.5%±6.2%,結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.01)5.吉非替尼作用I-10細胞后,srC、PKC激酶的表達降低,與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。選用src激酶抑制劑PP2和PKC激酶抑制劑GF109203X作用I-10細胞后可顯著增強GJ功能,并且細胞膜蛋白表達增加,Cx43磷酸化水平降低,與對照組相比差異均有顯著性(P0.01)。結(jié)果提示吉非替尼增加I-10的GJ功能可能與其抑制src和PKC的表達有關(guān)。結(jié)論：1.吉非替尼增強I-10細胞的GJ功能,該作用與磷酸化Cx43蛋白表達降低有關(guān)。2.磷酸化Cx43水平降低與src和PKC激酶水平降低有關(guān)。3.吉非替尼與OHP合用可顯著增強OHP的細胞毒性和凋亡誘導(dǎo)作用,該作用與吉非替尼增強細胞的GJ功能,Bax/Bcl-2比率增高、caspase 3、9剪切增多有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：吉非替尼 奧沙利鉑 縫隙連接 磷酸化 凋亡
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 引言9-11
• 材料與方法11-19
• 1 材料11
• 2 主要儀器和耗材11-12
• 3 方法12-18
• 3.1 細胞培養(yǎng)12
• 3.2 MTT法—檢測細胞存活率12-13
• 3.3 細胞接種熒光示蹤法—測定細胞間的GJ功能13-14
• 3.4 細胞免疫熒光法—檢測細胞膜Cx43蛋白表達14-15
• 3.5 Western blot法—檢測細胞內(nèi)蛋白表達15-17
• 3.6 Annexin V-FITC/PI雙染法流式細胞術(shù)17-18
• 3.7 Hoechst 33258法18
• 4 統(tǒng)計學(xué)處理方法18-19
• 實驗結(jié)果19-31
• 1 吉非替尼對I-10細胞GJ功能的影響19-21
• 2 吉非替尼與OHP合用對I-10細胞生存率及凋亡的影響21-23
• 3 吉非替尼增加OHP對細胞凋亡的可能機制23-28
• 4 吉非替尼增加GJ功能的可能機制28-31
• 討論31-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻38-43
• 致謝43-44
• 附錄 A44-45
• 附錄 B45-48
• 附錄 C48-49
• 個人簡歷48
• 學(xué)位期間發(fā)表論文48-49
• 附錄 D49-57
• 參考文獻56-57

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本文編號：326322