本文關(guān)鍵詞：糖皮質(zhì)激素調(diào)控L02細(xì)胞P-gp表達(dá)的分子機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid,GC)普遍存在于人體,是腎上腺皮質(zhì)合成和分泌的類固醇激素。目前,人工合成的糖皮質(zhì)激素廣泛應(yīng)用于疾病的治療。我們的前期研究和日本學(xué)者的研究發(fā)現(xiàn),在乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)相關(guān)的病例中,糖皮質(zhì)激素能夠有效阻止急性肝衰竭的發(fā)生,但糖皮質(zhì)激素在治療此類疾病中的確切機(jī)制尚未完全闡明。而由多藥耐藥基因1(multi-drug resistance gene 1,MDR1)編碼的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)廣泛存在于人血腦屏障、血胎盤(pán)屏障、肝細(xì)胞、腸上皮組織等,是細(xì)胞膜上的多藥耐藥轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,能夠增強(qiáng)肝細(xì)胞的保護(hù)功能,而決定肝細(xì)胞存活與否的關(guān)鍵在于肝細(xì)胞損傷與肝細(xì)胞保護(hù)。有研究顯示,糖皮質(zhì)激素能夠誘導(dǎo)不同細(xì)胞的P-gp增強(qiáng)表達(dá),因此推測(cè)糖皮質(zhì)激素可能通過(guò)誘導(dǎo)肝細(xì)胞P-gp增強(qiáng)表達(dá),繼而增強(qiáng)肝細(xì)胞保護(hù)功能,阻止急性肝衰竭的發(fā)生。還有研究顯示,糖皮質(zhì)激素能激活磷酸肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)、NF-κB、人孕烷X受體(PXR)等細(xì)胞信號(hào)通路,而這些細(xì)胞信號(hào)通路在多種細(xì)胞中參與調(diào)控P-gp的表達(dá),因此推測(cè)糖皮質(zhì)激素能夠通過(guò)PI3K/Akt、NF-κB、PXR等細(xì)胞信號(hào)通路調(diào)控L02細(xì)胞P-gp的表達(dá)。在本研究中,我們體外培養(yǎng)人正常肝細(xì)胞L02細(xì)胞株,探討地塞米松對(duì)人正常肝細(xì)胞L02細(xì)胞株P(guān)-gp表達(dá)的影響,及細(xì)胞信號(hào)通路PI3K/Akt、NF-κB、PXR在其中所起的作用。運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量Real time q PCR(SYBR)、Western-blot、RNA干擾等技術(shù)進(jìn)行分析研究,從而闡明糖皮質(zhì)激素在調(diào)控L02細(xì)胞P-gp表達(dá)中的作用與初步分子機(jī)制。研究方法1.體外培養(yǎng)類人正常肝細(xì)胞株L02細(xì)胞,設(shè)立正常對(duì)照后,使用不同濃度的地塞米松處理24h,收集實(shí)驗(yàn)組和正常對(duì)照組細(xì)胞,并提取細(xì)胞總RNA、總蛋白。2.Real time q PCR(SYBR)檢測(cè)不同濃度地塞米松處理24h后的類人正常肝細(xì)胞株L02細(xì)胞、正常對(duì)照組細(xì)胞的MDR1 m RNA。3.Western-blot檢測(cè)不同濃度地塞米松處理24h后的類人正常肝細(xì)胞株L02細(xì)胞和正常對(duì)照組細(xì)胞的P-gp、Akt、NF-κB蛋白表達(dá)水平。4.體外培養(yǎng)類人正常肝細(xì)胞株L02細(xì)胞,設(shè)立正常對(duì)照,分別及聯(lián)合使用蛋白酶抑制劑ly294002、pdtc和地塞米松處理類人正常肝細(xì)胞株l02細(xì)胞24h,收集實(shí)驗(yàn)組和正常對(duì)照組細(xì)胞,用于總rna、總蛋白等提取。5.realtimeqpcr(sybr)檢測(cè)分別及聯(lián)合使用蛋白酶抑制劑ly294002、pdtc和地塞米松處理組、正常對(duì)照組細(xì)胞的mdr1mrna。6.western-blot檢測(cè)分別及聯(lián)合使用蛋白酶抑制劑ly294002、pdtc和地塞米松處理組、正常對(duì)照組細(xì)胞p-gp、akt和nf-κb蛋白表達(dá)水平。7.瞬時(shí)轉(zhuǎn)染針對(duì)人pxr的sirna和非針對(duì)人pxr的controlsirna至類人正常肝細(xì)胞株l02細(xì)胞,轉(zhuǎn)染24h后使用地塞米松處理24h,收集實(shí)驗(yàn)組和陰性對(duì)照組細(xì)胞,用于總rna、總蛋白等提取。8.realtimeqpcr(sybr)檢測(cè)針對(duì)人pxr的sirna和非針對(duì)人pxr的controlsirna轉(zhuǎn)染處理組、正常對(duì)照組細(xì)胞的mdr1mrna。9.western-blot檢測(cè)針對(duì)人pxr的sirna和非針對(duì)人pxr的controlsirna轉(zhuǎn)染處理組、正常對(duì)照組細(xì)胞的p-gp蛋白表達(dá)水平。結(jié)果1.10μm地塞米松刺激24h后類人正常肝細(xì)胞株l02細(xì)胞的mdr1mrna表達(dá)水平較刺激前顯著增加36.3%(p=0.0004)。2.10μm地塞米松刺激24h后類人正常肝細(xì)胞株l02細(xì)胞p-gp、akt、nf-κb表達(dá)水平較刺激前分別顯著增加60.8%(p=0.0267)、25.0%(p=0.0358)和24.1%(p=0.0026)。3.類人正常肝細(xì)胞株l02細(xì)胞中p-gp與akt的表達(dá)水平之間呈顯著正相關(guān)(pearson系數(shù)=0.87,p0.01);p-gp與nf-κb之間呈顯著正相關(guān)(pearson系數(shù)=0.722,p0.01)。4.ly294002(20μm)處理組p-gp表達(dá)水平較正常對(duì)照組顯著降低33.8%(p=0.0184),mdr1mrna表達(dá)水平較對(duì)照組顯著降低81.0%(p0.0001);pdtc(30μm)處理組p-gp表達(dá)水平較正常對(duì)照組顯著降低36.3%(p=0.0018),,mdr1mrna表達(dá)水平較對(duì)照組顯著降低69.0%(p0.0001)。5.單獨(dú)使用地塞米松處理組和聯(lián)合地塞米松與ly294002處理組的l02細(xì)胞p-gp表達(dá)水平分別是正常對(duì)照組的(163.5±18.4)%和(130.1±22.0)%,兩者間相差顯著(p=0.0313);單獨(dú)使用地塞米松處理組和聯(lián)合地塞米松與pdtc處理組的l02細(xì)胞p-gp表達(dá)水平分別是正常對(duì)照組的(150.7±9.8)%和(123.7±3.9)%,兩者間相差顯著(p=0.0423)。6.聯(lián)合地塞米松與LY294002處理組的L02細(xì)胞MDR1 m RNA表達(dá)水平較單獨(dú)使用地塞米松處理組顯著降低92.7%(P0.0001);聯(lián)合地塞米松與PDTC處理組的L02細(xì)胞MDR1 m RNA表達(dá)水平較單獨(dú)使用地塞米松處理組顯著降低59.0%(P0.0001)。7.使用針對(duì)人PXR的siRNA轉(zhuǎn)染處理組較使用非針對(duì)人PXR的Control si RNA轉(zhuǎn)染處理組的L02細(xì)胞P-gp表達(dá)水平顯著降低58.4%(P=0.0039)。8.使用針對(duì)人PXR的siRNA轉(zhuǎn)染處理組較使用非針對(duì)人PXR的Control si RNA轉(zhuǎn)染處理組的L02細(xì)胞MDR1 m RNA表達(dá)水平顯著降低86.0%(P0.0001)。結(jié)論糖皮質(zhì)激素能夠誘導(dǎo)類人正常肝細(xì)胞株L02細(xì)胞MDR1 mRNA與P-gp增強(qiáng)表達(dá),提示糖皮質(zhì)激素可能通過(guò)上調(diào)肝細(xì)胞的P-gp表達(dá)水平增強(qiáng)肝細(xì)胞的保護(hù)功能。糖皮質(zhì)激素能通過(guò)激活PXR、PI3K/Akt和NF-κB細(xì)胞信號(hào)途徑誘導(dǎo)L02細(xì)胞P-gp的增強(qiáng)表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：糖皮質(zhì)激素 P-糖蛋白 PI3K/Akt NF-κB PXR
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-7
• 英文摘要7-11
• 中文摘要11-14
• 第一章 前言14-18
• 1.1 選題緣由14
• 1.2 研究背景14-16
• 1.3 研究意義16
• 1.4 研究?jī)?nèi)容16
• 1.5 研究方法16-18
• 第二章 糖皮質(zhì)激素在調(diào)控L02細(xì)胞P-糖蛋白表達(dá)中的作用18-31
• 2.1 材料與方法18-26
• 2.2 結(jié)果26-30
• 2.3 討論30-31
• 第三章 糖皮質(zhì)激素在調(diào)控L02細(xì)胞P-糖蛋白表達(dá)中的分子機(jī)制31-43
• 3.1 材料與方法31-36
• 3.2 結(jié)果36-41
• 3.3 討論41-43
• 全文總結(jié)43-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 文獻(xiàn)綜述 糖皮質(zhì)激素調(diào)控P-糖蛋白表達(dá)的信號(hào)通路研究進(jìn)展48-56
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文56-57
• 致謝57

【相似文獻(xiàn)】

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