發(fā)布時間：2017-04-15 19:17

  本文關(guān)鍵詞：CRH家族肽對腫瘤細(xì)胞凋亡和遷移的影響及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(Corticotropin-Releasing Hormone,CRH)家族肽主要成員包括CRH,Urocortin1(Ucn1),Urocortin2(Ucn2)和Urocortin3(Ucn3),它們廣泛分布在機(jī)體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周系統(tǒng),并且通過細(xì)胞膜上CRH受體(CRH Receptors,CRHRs)發(fā)揮多種作用。CRH受體包括CRH 1型受體(CRHR type 1,CRHR1)和CRH 2型受體(CRHR type 2,CRHR2)。CRHRs屬于G蛋白偶聯(lián)受體,在不同的組織中發(fā)揮著不同的病理生理作用。本部分主要探討了CRHRs對前列腺癌細(xì)胞凋亡的影響,并揭示了這種作用是通過調(diào)節(jié)胞漿型磷脂酶A2(cytosolic phospholipase A2,c PLA2)的表達(dá)或活化水平實現(xiàn)的。實驗中采用小鼠前列腺癌細(xì)胞株RM-1細(xì)胞作為研究對象。Annexin V/PI雙染色后流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示:正常無處理組的細(xì)胞平均凋亡率為3.92%,并且CRH處理組的細(xì)胞平均凋亡率為9.76%,與對照組相比細(xì)胞平均凋亡率有所上升;而同時給予Ucn2和凋亡促進(jìn)劑TG處理后的細(xì)胞平均凋亡率(8.18%)與單獨(dú)給予TG處理(14.84%)相比明顯下降。近年來大量研究發(fā)現(xiàn)c PLA2的異常表達(dá)與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān),為了明確CRH家族肽對細(xì)胞凋亡的作用是否依賴于c PLA2,本實驗選擇將c PLA2干擾后繼續(xù)檢測細(xì)胞凋亡的情況,結(jié)果顯示:c PLA2干擾后給予CRH處理,細(xì)胞平均凋亡率從9.76%降至5.31%,有明顯統(tǒng)計學(xué)差異;而同時給予TG和Ucn2處理后,細(xì)胞平均凋亡率從8.18%降至4.59%,也有明顯統(tǒng)計學(xué)差異�？傊�,將c PLA2干擾后,CRH通過CRHR1誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力減弱,同時CRH升高凋亡促進(jìn)蛋白Bax和降低凋亡抑制蛋白Bcl-2表達(dá)的能力消除;但是將c PLA2干擾后,Ucn2通過CRHR2抑制細(xì)胞凋亡的能力增強(qiáng),同時Ucn2降低凋亡促進(jìn)蛋白Bax和升高凋亡抑制蛋白Bcl-2表達(dá)的能力明顯增強(qiáng)。有研究指出促炎因子IL1β、TNFα能促進(jìn)c PLA2的表達(dá),本部分實驗結(jié)果提示:CRH可以呈時間和濃度依賴性地增加c PLA2的表達(dá),在這一過程中IL1β參與其中的調(diào)控機(jī)制;而Ucn2卻減少c PLA2的表達(dá),意料之外的是在這一過程中TNFα、IL1β均未參與其中的調(diào)控機(jī)制。此外CRH也能抑制c PLA2 m RNA的分解,增加c PLA2的穩(wěn)定性,而Ucn2卻只能抑制c PLA2的產(chǎn)生,并不能促進(jìn)其分解。為了進(jìn)一步明確CRHRs的作用,在HEK293細(xì)胞中分別預(yù)先過表達(dá)CRHR1和CRHR2,再分別給予CRH或者Ucn2刺激,結(jié)果發(fā)現(xiàn)c PLA2的表達(dá)受到相應(yīng)地上調(diào)或者下調(diào)。綜上所述,本部分研究得出結(jié)論CRH和Ucn2能通過影響c PLA2的表達(dá)分別促進(jìn)和抑制前列腺癌細(xì)胞的凋亡。CRH家族肽是一類重要的內(nèi)分泌相關(guān)肽,主要包括CRH,Urocortin1(Ucn1),Urocortin2(Ucn2)和Urocortin3(Ucn3),通過兩種細(xì)胞膜受體CRH 1型受體(CRHR1)和CRH 2型受體(CRHR2)參與調(diào)節(jié)多種腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡和轉(zhuǎn)移能力等,其中CRH家族肽影響腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的機(jī)制尚不明確。有研究發(fā)現(xiàn)異常的轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factorβ1,TGFβ1)信號與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。在腫瘤發(fā)生初期,TGFβ1可以抑制細(xì)胞增殖、啟動細(xì)胞分化并誘導(dǎo)凋亡;但在腫瘤發(fā)生晚期,TGFβ1卻被認(rèn)為是上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)的誘導(dǎo)因子,并且通過誘導(dǎo)Snail1和Slug等轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)來抑制上皮鈣粘蛋白(E-cadherin),而E-cadherin是細(xì)胞與細(xì)胞間的聯(lián)接蛋白,其表達(dá)下調(diào)是EMT發(fā)生的標(biāo)志性變化。因此,TGFβ1信號通路的異常激活能促進(jìn)晚期腫瘤的轉(zhuǎn)移。同時流行病學(xué)調(diào)查顯示超過90%的乳腺癌患者最終死于腫瘤轉(zhuǎn)移。本部分研究主要探討了乳腺癌細(xì)胞中Ucn1對TGFβ1誘導(dǎo)下Snail1Slug的影響及其作用機(jī)制。實驗中采用兩種人乳腺癌細(xì)胞株(MCF-7細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞)作為研究對象。TGFβ1-Smad是經(jīng)典的TGFβ1信號傳導(dǎo)途徑,并且Smad2/3是TGFβ1經(jīng)典信號傳導(dǎo)通路中重要的信號傳導(dǎo)因子。實驗結(jié)果提示Ucn1能減少Smad2/3的磷酸化水平,但是將Smad7干擾后Ucn1的作用被消除。并且Ucn1能進(jìn)一步阻止磷酸化的Smad2/3轉(zhuǎn)入細(xì)胞核內(nèi)繼而下調(diào)E-cadherin抑制性轉(zhuǎn)錄因子如Snail1Slug,從而抑制EMT的發(fā)生�？紤]到Ucn1與兩種受體的親和力相當(dāng),為了明確兩種受體的作用,本實驗中分別使用了CRHR1選擇性阻斷劑Antalarmin、CRHR2選擇性阻斷劑Antisauvagine-30以及C RHRs非選擇性阻斷劑Astressin。結(jié)果發(fā)現(xiàn)這三種阻斷劑都能部分消除Ucn1對TGFβ1信號通路的影響,并提示兩種受體均能下調(diào)Ucn1抑制TGFβ1誘導(dǎo)的Snail1Slug表達(dá)。綜上所述,本部分指出Ucn1可能作為一種中間介質(zhì),抑制TGFβ1促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,并且在這一過程中CRHR1/CRHR2,Smad7,Smad2/3以及Snail1Slug等信號通路被激活。
【關(guān)鍵詞】：CRH 1型受體 CRH 2型受體 胞漿型磷脂酶A2(c PLA2) 凋亡 Urocortin1 轉(zhuǎn)化生長因子β1 Smad2/3 Smad7 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 英文縮寫詞表4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 第一部分CRH與Ucn2對前列腺癌細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制研究11-37
• 前言11-12
• 正文12-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-37
• 第二部分Ucn1對TGFβ1誘導(dǎo)下乳腺癌細(xì)胞Snail1&Slug的影響及其機(jī)制研究37-63
• 前言37-38
• 正文38-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-63
• 綜述63-74
• 參考文獻(xiàn)69-74
• 附錄74-75
• 碩士在讀期間發(fā)表論文75-76
• 致謝76

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2 江勝賢;黃大有;;CRH及CRH興奮試驗的臨床應(yīng)用[J];國外醫(yī)學(xué)(內(nèi)分泌學(xué)分冊);1992年01期

3 孟凡江;CRH和賴氨酸血管加壓素刺激試驗在診斷繼發(fā)于下丘腦或垂體疾病的腎上腺皮質(zhì)功能減退中的應(yīng)用[J];國外醫(yī)學(xué).內(nèi)分泌學(xué)分冊;1991年02期

4 黃堅;覃華麗;黃顯凱;周繼紅;;CRH對大鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響[J];創(chuàng)傷外科雜志;2006年01期

5 王華東 ,王彥平,屈洋,戚仁斌,陸大祥,李楚杰,顏亮;cAMP依賴性蛋白激酶信號傳導(dǎo)通路在大鼠CRH性發(fā)熱機(jī)制中的作用(英文)[J];Chinese Medical Journal;2001年10期

6 張載福;;抑郁癥認(rèn)知因素與CSF中CRH的關(guān)系[J];國外醫(yī)學(xué).精神病學(xué)分冊;1991年01期

7 張云東,朱佩芳,王正國,趙繼宗,周繼紅,許民輝,鄒詠文,黃顯凱,粟永萍;CRH對培養(yǎng)下丘腦神經(jīng)元胞漿cAMP作用的探討[J];腦與神經(jīng)疾病雜志;2003年03期

8 唐美儀，程麗仁，，張崇理;CRH樣肽對大鼠胚泡著床的影響[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;1996年01期

9 趙宏,張麗鳳;促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素與下丘腦-垂體-性腺軸[J];承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2001年03期

10 陳立朝,許民輝,周繼紅;CRH通過PKA途徑調(diào)節(jié)大鼠下丘腦CRH表達(dá)的研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2004年16期

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1 胡隨瑜;李云輝;張春虎;王素娥;肖桂林;邱娟;;柴胡疏肝散對慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠行為及血漿CRH、ACTH的影響[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會精神疾病專業(yè)委員會第十屆學(xué)術(shù)會議論文集[C];2010年

2 林潔;;淺談CRH_(5A)型動車組牽引電機(jī)的維護(hù)保養(yǎng)[A];2012年鐵路技師論文集（安全專輯）[C];2013年

3 王東琪;Bockmann,A;Dolenc,J;Meier,BH;van Gunsteren,WF;;Crh蛋白質(zhì)微晶中水分子運(yùn)動的計算機(jī)模擬[A];中國化學(xué)會第29屆學(xué)術(shù)年會摘要集——第15分會：理論化學(xué)方法和應(yīng)用[C];2014年

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1 白雪;世界水泥巨頭CRH看好中國市場[N];中國建材報;2009年

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本文編號：309075