本文關鍵詞：CRH家族肽對腫瘤細胞凋亡和遷移的影響及其機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：促腎上腺皮質激素釋放激素(Corticotropin-Releasing Hormone,CRH)家族肽主要成員包括CRH,Urocortin1(Ucn1),Urocortin2(Ucn2)和Urocortin3(Ucn3),它們廣泛分布在機體的中樞神經系統(tǒng)和外周系統(tǒng),并且通過細胞膜上CRH受體(CRH Receptors,CRHRs)發(fā)揮多種作用。CRH受體包括CRH 1型受體(CRHR type 1,CRHR1)和CRH 2型受體(CRHR type 2,CRHR2)。CRHRs屬于G蛋白偶聯受體,在不同的組織中發(fā)揮著不同的病理生理作用。本部分主要探討了CRHRs對前列腺癌細胞凋亡的影響,并揭示了這種作用是通過調節(jié)胞漿型磷脂酶A2(cytosolic phospholipase A2,c PLA2)的表達或活化水平實現的。實驗中采用小鼠前列腺癌細胞株RM-1細胞作為研究對象。Annexin V/PI雙染色后流式細胞儀檢測結果顯示:正常無處理組的細胞平均凋亡率為3.92%,并且CRH處理組的細胞平均凋亡率為9.76%,與對照組相比細胞平均凋亡率有所上升;而同時給予Ucn2和凋亡促進劑TG處理后的細胞平均凋亡率(8.18%)與單獨給予TG處理(14.84%)相比明顯下降。近年來大量研究發(fā)現c PLA2的異常表達與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關,為了明確CRH家族肽對細胞凋亡的作用是否依賴于c PLA2,本實驗選擇將c PLA2干擾后繼續(xù)檢測細胞凋亡的情況,結果顯示:c PLA2干擾后給予CRH處理,細胞平均凋亡率從9.76%降至5.31%,有明顯統(tǒng)計學差異;而同時給予TG和Ucn2處理后,細胞平均凋亡率從8.18%降至4.59%,也有明顯統(tǒng)計學差異。總之,將c PLA2干擾后,CRH通過CRHR1誘導細胞凋亡的能力減弱,同時CRH升高凋亡促進蛋白Bax和降低凋亡抑制蛋白Bcl-2表達的能力消除;但是將c PLA2干擾后,Ucn2通過CRHR2抑制細胞凋亡的能力增強,同時Ucn2降低凋亡促進蛋白Bax和升高凋亡抑制蛋白Bcl-2表達的能力明顯增強。有研究指出促炎因子IL1β、TNFα能促進c PLA2的表達,本部分實驗結果提示:CRH可以呈時間和濃度依賴性地增加c PLA2的表達,在這一過程中IL1β參與其中的調控機制;而Ucn2卻減少c PLA2的表達,意料之外的是在這一過程中TNFα、IL1β均未參與其中的調控機制。此外CRH也能抑制c PLA2 m RNA的分解,增加c PLA2的穩(wěn)定性,而Ucn2卻只能抑制c PLA2的產生,并不能促進其分解。為了進一步明確CRHRs的作用,在HEK293細胞中分別預先過表達CRHR1和CRHR2,再分別給予CRH或者Ucn2刺激,結果發(fā)現c PLA2的表達受到相應地上調或者下調。綜上所述,本部分研究得出結論CRH和Ucn2能通過影響c PLA2的表達分別促進和抑制前列腺癌細胞的凋亡。CRH家族肽是一類重要的內分泌相關肽,主要包括CRH,Urocortin1(Ucn1),Urocortin2(Ucn2)和Urocortin3(Ucn3),通過兩種細胞膜受體CRH 1型受體(CRHR1)和CRH 2型受體(CRHR2)參與調節(jié)多種腫瘤細胞的增殖、凋亡和轉移能力等,其中CRH家族肽影響腫瘤細胞轉移能力的機制尚不明確。有研究發(fā)現異常的轉化生長因子β1(transforming growth factorβ1,TGFβ1)信號與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關。在腫瘤發(fā)生初期,TGFβ1可以抑制細胞增殖、啟動細胞分化并誘導凋亡;但在腫瘤發(fā)生晚期,TGFβ1卻被認為是上皮間質轉化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)的誘導因子,并且通過誘導Snail1和Slug等轉錄因子的表達來抑制上皮鈣粘蛋白(E-cadherin),而E-cadherin是細胞與細胞間的聯接蛋白,其表達下調是EMT發(fā)生的標志性變化。因此,TGFβ1信號通路的異常激活能促進晚期腫瘤的轉移。同時流行病學調查顯示超過90%的乳腺癌患者最終死于腫瘤轉移。本部分研究主要探討了乳腺癌細胞中Ucn1對TGFβ1誘導下Snail1Slug的影響及其作用機制。實驗中采用兩種人乳腺癌細胞株(MCF-7細胞和MDA-MB-231細胞)作為研究對象。TGFβ1-Smad是經典的TGFβ1信號傳導途徑,并且Smad2/3是TGFβ1經典信號傳導通路中重要的信號傳導因子。實驗結果提示Ucn1能減少Smad2/3的磷酸化水平,但是將Smad7干擾后Ucn1的作用被消除。并且Ucn1能進一步阻止磷酸化的Smad2/3轉入細胞核內繼而下調E-cadherin抑制性轉錄因子如Snail1Slug,從而抑制EMT的發(fā)生�？紤]到Ucn1與兩種受體的親和力相當,為了明確兩種受體的作用,本實驗中分別使用了CRHR1選擇性阻斷劑Antalarmin、CRHR2選擇性阻斷劑Antisauvagine-30以及C RHRs非選擇性阻斷劑Astressin。結果發(fā)現這三種阻斷劑都能部分消除Ucn1對TGFβ1信號通路的影響,并提示兩種受體均能下調Ucn1抑制TGFβ1誘導的Snail1Slug表達。綜上所述,本部分指出Ucn1可能作為一種中間介質,抑制TGFβ1促進乳腺癌細胞的上皮間質轉化,并且在這一過程中CRHR1/CRHR2,Smad7,Smad2/3以及Snail1Slug等信號通路被激活。
【關鍵詞】：CRH 1型受體 CRH 2型受體 胞漿型磷脂酶A2(c PLA2) 凋亡 Urocortin1 轉化生長因子β1 Smad2/3 Smad7 上皮間質轉化
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 英文縮寫詞表4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 第一部分CRH與Ucn2對前列腺癌細胞凋亡的影響及其機制研究11-37
• 前言11-12
• 正文12-31
• 結論31-32
• 參考文獻32-37
• 第二部分Ucn1對TGFβ1誘導下乳腺癌細胞Snail1&Slug的影響及其機制研究37-63
• 前言37-38
• 正文38-57
• 結論57-58
• 參考文獻58-63
• 綜述63-74
• 參考文獻69-74
• 附錄74-75
• 碩士在讀期間發(fā)表論文75-76
• 致謝76

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1 王華東,王彥平,屈洋,戚仁斌,陸大祥,李楚杰,顏亮;cAMP依賴性蛋白激酶信號傳導通路在大鼠CRH性發(fā)熱機制中作用[J];中國病理生理雜志;2000年10期

2 江勝賢;黃大有;;CRH及CRH興奮試驗的臨床應用[J];國外醫(yī)學(內分泌學分冊);1992年01期

3 孟凡江;CRH和賴氨酸血管加壓素刺激試驗在診斷繼發(fā)于下丘腦或垂體疾病的腎上腺皮質功能減退中的應用[J];國外醫(yī)學.內分泌學分冊;1991年02期

4 黃堅;覃華麗;黃顯凱;周繼紅;;CRH對大鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響[J];創(chuàng)傷外科雜志;2006年01期

5 王華東 ,王彥平,屈洋,戚仁斌,陸大祥,李楚杰,顏亮;cAMP依賴性蛋白激酶信號傳導通路在大鼠CRH性發(fā)熱機制中的作用(英文)[J];Chinese Medical Journal;2001年10期

6 張載福;;抑郁癥認知因素與CSF中CRH的關系[J];國外醫(yī)學.精神病學分冊;1991年01期

7 張云東,朱佩芳,王正國,趙繼宗,周繼紅,許民輝,鄒詠文,黃顯凱,粟永萍;CRH對培養(yǎng)下丘腦神經元胞漿cAMP作用的探討[J];腦與神經疾病雜志;2003年03期

8 唐美儀，程麗仁，，張崇理;CRH樣肽對大鼠胚泡著床的影響[J];基礎醫(yī)學與臨床;1996年01期

9 趙宏,張麗鳳;促腎上腺皮質激素釋放激素與下丘腦-垂體-性腺軸[J];承德醫(yī)學院學報;2001年03期

10 陳立朝,許民輝,周繼紅;CRH通過PKA途徑調節(jié)大鼠下丘腦CRH表達的研究[J];第三軍醫(yī)大學學報;2004年16期

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1 胡隨瑜;李云輝;張春虎;王素娥;肖桂林;邱娟;;柴胡疏肝散對慢性應激抑郁模型大鼠行為及血漿CRH、ACTH的影響[A];中國中西醫(yī)結合學會精神疾病專業(yè)委員會第十屆學術會議論文集[C];2010年

2 林潔;;淺談CRH_(5A)型動車組牽引電機的維護保養(yǎng)[A];2012年鐵路技師論文集（安全專輯）[C];2013年

3 王東琪;Bockmann,A;Dolenc,J;Meier,BH;van Gunsteren,WF;;Crh蛋白質微晶中水分子運動的計算機模擬[A];中國化學會第29屆學術年會摘要集——第15分會：理論化學方法和應用[C];2014年

4 李金梁;龔忠鑫;古文超;;淺談CRH_(5A)型動車組空調壓縮機控制電路故障應急處理方法[A];2012年鐵路技師論文集（安全專輯）[C];2013年

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1 白雪;世界水泥巨頭CRH看好中國市場[N];中國建材報;2009年

2 吳文坤;欲購中條山水泥國際建材巨頭CRH進晉之謀[N];中華建筑報;2010年

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  本文關鍵詞：CRH家族肽對腫瘤細胞凋亡和遷移的影響及其機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：309075