本文關(guān)鍵詞：酶法高通量測(cè)定發(fā)酵液中代謝產(chǎn)物的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：腺苷和胞苷都是非常重要的醫(yī)藥原料,基于腺苷脫氨酶(ADA)和胞昔脫氨酶(CD)建立快速、高通量檢測(cè)發(fā)酵液腺苷和胞昔的方法,以及對(duì)于產(chǎn)胞苷的枯草芽孢桿菌進(jìn)行激光誘變育種的初步研究。方法：以碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液、亞硝基鐵氰化鈉、次氯酸鈉以及百里香酚為檢測(cè)試劑,采用響應(yīng)面方法優(yōu)化檢測(cè)試劑。在腺苷脫氨酶(ADA)的作用下,繪制腺苷檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線,確定腺苷檢測(cè)限。同樣,在胞苷脫氨酶(CD)的作用下,繪制胞苷檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線,確定胞苷檢測(cè)限。采用激光誘變育種,對(duì)產(chǎn)胞苷的枯草芽孢桿菌進(jìn)行篩選,初步確定優(yōu)化條件。結(jié)果：響應(yīng)面方法優(yōu)化檢測(cè)試劑濃度為碳酸鈉-碳酸氫鈉34.20 mmol/L-27.40 mmol/L,亞硝基鐵氰化鈉3.35 g/L,次氯酸鈉的有效氯為0.1725%,百里香酚6.64g/L。腺苷標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=0.3901x+0.01248,R2=0.9976,檢測(cè)范圍為0.025 mM-6 mM。胞苷標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=0.36045x+0.06313,R2=0.99702,檢測(cè)范圍為0.1 mM-6mM。對(duì)產(chǎn)胞苷枯草芽孢桿菌進(jìn)行初步激光誘變育種的結(jié)果為篩選劑濃度為1.2 g/L,激光誘變時(shí)間為1.5 min,枯草芽孢菌產(chǎn)生胞苷含量最大的濃度為74.04 mg/L。結(jié)論：該方法檢測(cè)靈敏,能夠滿足對(duì)腺苷和胞苷發(fā)酵檢測(cè)和高通量篩選的需要。我們的研究為進(jìn)一步提高激光誘變育種的胞苷產(chǎn)量進(jìn)行了初步探索。
【關(guān)鍵詞】：腺苷 胞苷 百里香酚 高通量檢測(cè) 響應(yīng)面 激光誘變育種
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 第一章 前言8-15
• 1.1 腺苷的研究的現(xiàn)狀8-10
• 1.2 胞苷的研究現(xiàn)狀10-11
• 1.3 百里香酚11
• 1.4 枯草芽孢桿菌11-12
• 1.5 激光誘變育種技術(shù)12-14
• 1.6 立題依據(jù)14-15
• 第二章 材料15-20
• 2.1 實(shí)驗(yàn)菌種15
• 2.2 實(shí)驗(yàn)儀器15-17
• 2.3 實(shí)驗(yàn)試劑17-19
• 2.4 實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基19
• 2.5 試劑的配制19-20
• 第三章 實(shí)驗(yàn)方法20-26
• 3.1 菌種培養(yǎng)方法20-21
• 3.1.1 菌種活化20
• 3.1.2 種子培養(yǎng)20
• 3.1.3 搖瓶發(fā)酵20-21
• 3.2 酶法高通量檢測(cè)發(fā)酵液中的腺苷含量21-24
• 3.2.1 腺苷脫氨酶快速檢測(cè)原理21
• 3.2.2 單因素優(yōu)化檢測(cè)試劑21-22
• 3.2.3 響應(yīng)面優(yōu)化檢測(cè)試劑22
• 3.2.4 驗(yàn)證試驗(yàn)22
• 3.2.5 腺苷脫氨酶快速檢測(cè)方法22
• 3.2.6 腺苷標(biāo)準(zhǔn)曲線制定22-23
• 3.2.7 腺苷加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)23
• 3.2.8 高效液相色譜檢測(cè)實(shí)驗(yàn)23-24
• 3.3 酶法高通量檢測(cè)發(fā)酵液中的胞苷含量24
• 3.3.1 胞苷脫氨酶快速檢測(cè)原理24
• 3.3.2 胞苷脫氨酶快速檢測(cè)方法24
• 3.3.3 胞苷標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定24
• 3.3.4 胞苷加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)24
• 3.4 對(duì)枯草芽孢桿菌進(jìn)行初步激光誘變篩選24-26
• 第四章 結(jié)果26-47
• 4.1 試劑濃度優(yōu)化26-33
• 4.1.1 單因素優(yōu)化26-28
• 4.1.2 響應(yīng)面優(yōu)化方法28-32
• 4.1.3 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)32-33
• 4.2 腺苷脫氨酶法高通量測(cè)定發(fā)酵液中的腺苷含量33-35
• 4.2.1 腺苷標(biāo)準(zhǔn)曲線33
• 4.2.2 腺苷加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)33-35
• 4.3 胞苷脫氨酶法高通量測(cè)定發(fā)酵液中的胞苷含量35-38
• 4.3.1 胞苷標(biāo)準(zhǔn)曲線35-36
• 4.3.2 胞苷加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)36-38
• 4.4 對(duì)枯草芽孢桿菌進(jìn)行初步激光誘變育種38-47
• 第五章 討論與結(jié)論47-49
• 5.1 實(shí)驗(yàn)討論47-48
• 5.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 在學(xué)期間的科研成果54
• 在學(xué)期間參與項(xiàng)目54-55
• 附錄一55-56
• 附錄二56-57
• 致謝57

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 肖創(chuàng)清,盧義欽;胞苷脫氨酶的檢測(cè)及其臨床意義[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè);2000年06期

2 楊革,陳堅(jiān),曲音波,倫世儀;聚γ-谷氨酸生產(chǎn)菌地衣芽孢桿菌的He-Ne激光輻射效應(yīng)[J];激光生物學(xué)報(bào);2001年04期

3 武順,孫中安,任冬梅;三磷酸胞苷治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的臨床觀察[J];臨床軍醫(yī)雜志;2003年06期

4 唐晉清;謝曉恬;李威;喬曉紅;石葦;周曉迅;邵越霞;;HL-60細(xì)胞內(nèi)阿糖胞苷活性成分動(dòng)態(tài)觀察[J];臨床兒科雜志;2013年06期

5 ;Optimization of a synthetic medium for ethanol production by xylose-fermenting Zymomonas mobilis using response surface methodology[J];Chinese Science Bulletin;2012年Z2期

6 郭懷忠,陳蓉,李芳,畢開順,孫毓慶;毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測(cè)定板藍(lán)根注射液中四種核苷的含量[J];色譜;2004年05期

7 林家仕;林子俺;劉英杰;;高效液相色譜分析不同低氧訓(xùn)練模式下大鼠心肌組織腺苷酸含量變化特征[J];體育科學(xué);2009年02期

8 黃蘭芳,郭方遒,梁逸曾,陳本美;HPLC-ESI-MS測(cè)定冬蟲夏草和蠶蛹蟲草中腺苷和蟲草素含量[J];中國(guó)中藥雜志;2004年08期

9 郝純毅,呂桂芝,蔡險(xiǎn)峰,林仲翔;三磷酸腺苷對(duì)人胃癌細(xì)胞惡性表型的去惡化作用[J];中華腫瘤雜志;1999年03期

10 金偉明;張秋;;血清腺苷脫氨酶測(cè)定在肝病診斷的意義及臨床評(píng)價(jià)[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2007年06期

  本文關(guān)鍵詞：酶法高通量測(cè)定發(fā)酵液中代謝產(chǎn)物的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：306420