本文關(guān)鍵詞：固相合成抗菌肽CGA-N46及其衍生物生物信息學(xué)分析和生物活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：隨著抗生素的廣泛使用,越來越多的細(xì)菌和真菌出現(xiàn)耐藥性。與傳統(tǒng)抗生素相比,抗菌肽具有抗菌譜廣,不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點,因此抗菌肽已成為生物醫(yī)藥的研究熱點。CGA-N46是一個含有46個氨基酸殘基的新型抗真菌肽,本實驗通過對CGA-N46的衍生多肽進(jìn)行生物信息學(xué)分析,利用固相合成法制備了幾個有研究價值的CGA-N46衍生多肽,并研究其體外和體內(nèi)的生物活性,為CGA-N46衍生物開發(fā)為新型抗真菌藥提供理論基礎(chǔ)。本文利用生物信息學(xué)軟件分析了CGA-N46及其衍生多肽的理化性質(zhì)及二級結(jié)構(gòu),設(shè)計了一系列具有較高穩(wěn)定性和半衰期較長的衍生片段,分別命名為CGA-N15、CGA-N16、CGA-N12和CGA-N8。NPS@軟件分析CGA-N46及其衍生多肽二級結(jié)構(gòu)均為α-螺旋結(jié)構(gòu);Helical Wheel分析CGA-N46及其衍生肽親、疏水氨基酸殘基分布無規(guī)律。利用固相合成技術(shù)合成上述衍生片段,圓二色譜法測定CGA-N46及其衍生物在不同溶液中的二級結(jié)構(gòu),顯示CGA-N46及其衍生物在PBS和SDS溶液中均為α-螺旋,在小單層脂質(zhì)體中α-螺旋含量降低。抑菌實驗證明CGA-N46衍生物具有較強(qiáng)的抑菌活性并且它們具有不同的敏感菌。CGA-N46的敏感菌是克柔念珠菌,最低抑菌濃度為0.37mmol·L-1;CGA-N15和CGA-N12的敏感菌是熱帶念珠菌,最低抑菌濃度僅為0.073mmol·L-1和0.075mmol·L-1;CGA-N16的敏感菌為光滑念珠菌,最低抑菌濃度為0.28mmol·L-1;CGA-N8的敏感菌是克柔念珠菌和白色念珠菌,最低抑菌濃度為0.24mmol·L-1。采用分光光度法研究CGA-N46衍生物的溶血性,發(fā)現(xiàn)CGA-N46衍生物溶血性由大到小依次為:CGA-N15、CGA-N16、CGA-N8和CGA-N12,它們的溶血濃度依次為:0.031mmol·L-1、0.056mmol·L-1、0.27mmol·L-1和0.39mmol·L-1。小鼠腎原代細(xì)胞毒性實驗顯示,CGA-N15有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性,當(dāng)濃度為2mg·mL-1時,小鼠腎原代細(xì)胞的存活率僅為7.8%,當(dāng)濃度為31.25μg·mL-1時,細(xì)胞毒性消失。CGA-N16、CGA-N12和CGA-N8在濃度為2mg·mL-1時,對正常生長的小鼠腎原代細(xì)胞存活率無影響。因此,CGA-N12是CGA-N46的一段抗念珠菌活性高、生物安全性好的衍生肽。利用圓二色譜法研究了CGA-N12和BSA的相互作用,實驗表明CGA-N12可以降低BSA的α-螺旋結(jié)構(gòu)的比例,說明CGA-N12可以和BSA相互作用,并影響其構(gòu)象,為探索其作用機(jī)制提供了方向。深部感染熱帶念珠菌小鼠治療結(jié)果表明,CGA-N12可顯著提高深部感染小鼠的存活率,減少體內(nèi)菌量,提高感病小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù),對熱帶念珠菌感染引起的組織病變有很好的治療作用。綜上所述,經(jīng)過生物信息學(xué)分析和固相合成,獲得了一段抗菌活性高、安全性好的CGA-N46衍生肽—CGA-N12。CGA-N12對念珠菌屬具有較強(qiáng)的抑制作用,無溶血性、無細(xì)胞毒性,對深部感染熱帶念珠菌小鼠具有治療作用,是一種安全有效的抗菌肽,具有開發(fā)為新型抗真菌藥物的潛力。
【關(guān)鍵詞】：抗真菌肽 CGA-N46衍生物 CGA-N12 生物信息學(xué)分析 固相合成 體外抗真菌活性 體內(nèi)抗真菌活性
【學(xué)位授予單位】：河南工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R915
【目錄】：

• 摘要5-7
• abstract7-12
• 第一章 前言12-23
• 1.1 念珠菌病12
• 1.1.1 念珠菌病的危害12
• 1.1.2 念珠菌病治療藥物12
• 1.2 抗菌肽12-20
• 1.2.1 抗菌肽的優(yōu)點及應(yīng)用前景13
• 1.2.2 抗菌肽的分類13-16
• 1.2.3 抗菌肽的制備方法16-18
• 1.2.4 抗菌肽研究中存在的問題18-19
• 1.2.5 抗菌肽的優(yōu)化策略19-20
• 1.3 生物信息學(xué)在多肽研究中的應(yīng)用20-21
• 1.4 CGA-N46的發(fā)現(xiàn)21-22
• 1.5 研究目的和內(nèi)容22-23
• 1.5.1 研究目的22
• 1.5.2 研究內(nèi)容22-23
• 第二章 實驗材料與方法23-36
• 2.1 實驗材料23-26
• 2.1.1 菌種23
• 2.1.2 實驗動物23
• 2.1.3 CGA-N4623
• 2.1.4 生物信息學(xué)軟件和工具23
• 2.1.5 實驗儀器23-24
• 2.1.6 實驗試劑24-25
• 2.1.7 主要溶液25-26
• 2.2 實驗方法26-36
• 2.2.1 CGA-N46及其衍生物的生物信息學(xué)分析26
• 2.2.2 CGA-N46衍生物的固相合成26-29
• 2.2.3 CGA-N46衍生物二級結(jié)構(gòu)的測定29
• 2.2.4 CGA-N46衍生物抗真菌活性測定29-30
• 2.2.5 CGA-N46及其衍生物溶血性的測定30-31
• 2.2.6 CGA-N46及其衍生多肽的細(xì)胞毒性測定31-32
• 2.2.7 CGA-N12與BSA相互作用的CD光譜測定32
• 2.2.8 深部熱帶念珠菌感染小鼠模型的建立和治療32-36
• 第三章 結(jié)果和分析36-55
• 3.1 CGA-N46衍生物的設(shè)計及其理化性質(zhì)36-37
• 3.2 CGA-N46及其衍生物的二級結(jié)構(gòu)預(yù)測37-39
• 3.3 CGA-N46及其衍生物氨基酸殘基分布39
• 3.4 CGA-N46衍生物的合成、純化與鑒定39-42
• 3.5 CGA-N46及其衍生物二級結(jié)構(gòu)分析42-44
• 3.6 CGA-N46及其衍生物的抗菌活性和溶血性44-45
• 3.7 CGA-N46及其衍生物細(xì)胞毒性45-47
• 3.8 CGA-N12對BSA結(jié)構(gòu)的影響47-49
• 3.9 CGA-N12對熱帶念珠菌深部感染小鼠的治療作用49-55
• 3.9.1 熱帶念珠菌深部感染小鼠模型的建立49-50
• 3.9.2 CGA-N12治療后感染小鼠腎臟載菌量50
• 3.9.3 CGA-N12對感染熱帶念珠菌小鼠存活率和體重的影響50-51
• 3.9.4 CGA-N12對感染熱帶念珠菌小鼠免疫器官指數(shù)的影響51-55
• 第四章 討論55-60
• 4.1 CGA-N46衍生物的設(shè)計和合成55-56
• 4.2 CGA-N46衍生物的二級結(jié)構(gòu)56
• 4.3 CGA-N46及其衍生物的抑菌活性56-57
• 4.4 CGA-N46及其衍生物的溶血性和細(xì)胞毒性57-58
• 4.5 CGA-N46衍生物與BSA的相互作用58
• 4.6 CGA-N12對熱帶念珠菌感染小鼠的治療作用58-60
• 結(jié)論60-62
• 參考文獻(xiàn)62-69
• 致謝69-70
• 個人簡歷70

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 陸志方;固相合成抗菌肽CGA-N46及其衍生物生物信息學(xué)分析和生物活性研究[D];河南工業(yè)大學(xué);2016年

2 薛雯雯;CGA-N46基因在枯草桿菌中的多順反子表達(dá)及表達(dá)條件優(yōu)化[D];河南工業(yè)大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：固相合成抗菌肽CGA-N46及其衍生物生物信息學(xué)分析和生物活性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：303791