發(fā)布時(shí)間：2017-04-12 19:13

  本文關(guān)鍵詞：EZH2通過(guò)抑制NKG2D的表達(dá)調(diào)控NK細(xì)胞的發(fā)育及功能，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討組蛋白甲基化酶EZH2調(diào)控NK細(xì)胞發(fā)育及功能的作用和作用機(jī)制。方法:第一部分:從C57BL6小鼠BM中分選出HSCs,體外誘導(dǎo)分化為NK細(xì)胞,加入抑制劑以抑制EZH2活性,western blotting檢測(cè)分化細(xì)胞中H3K27me3表達(dá)量,流式分析不同分化階段細(xì)胞免疫表型;從人臍帶血(umbilical cord blood,UCB)中分離出CD34+HSCs,體外誘導(dǎo)分化為NK細(xì)胞,加入抑制劑以抑制EZH2活性,western blotting檢測(cè)分化細(xì)胞中H3K27me3表達(dá)量,流式分析在不同分化階段細(xì)胞免疫表型。第二部分:流式分析C57BL6小鼠及人UCB CD34+HSCs在體外分化不同階段細(xì)胞表面NKG2D表達(dá)量;ChIP-qPCR檢測(cè)抑制EZH2活性前后,體外分化的NK細(xì)胞中NKG2D啟動(dòng)子區(qū)H3K27me3修飾水平變化;細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)檢測(cè)體外分化的NK細(xì)胞的殺傷能力。結(jié)果:第一部分:小鼠HSCs體外分化實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示,抑制EZH2活性后,NK細(xì)胞發(fā)育進(jìn)程加快;人UCB CD34+HSCs體外分化結(jié)果也顯示,抑制EZH2活性后NK細(xì)胞發(fā)育進(jìn)程加快。第二部分:小鼠和人HSCs在體外分化不同階段NKG2D表達(dá)量檢測(cè)結(jié)果顯示,抑制EZH2活性后,NKG2D的表達(dá)量明顯上升;ChIP-qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,抑制EZH2活性后,NKG2D基因H3K27me3修飾水平明顯下降;細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)顯示,抑制EZH2活性后,NK細(xì)胞的殺傷能力明顯下降,且殺傷能力同NKG2D密切相關(guān)。結(jié)論:1、EZH2可以調(diào)控小鼠NK細(xì)胞發(fā)育。抑制EZH2活性后,可以明顯促進(jìn)小鼠NK細(xì)胞發(fā)育。2、EZH2可以調(diào)控人NK細(xì)胞發(fā)育。抑制EZH2活性后,可以明顯促進(jìn)人NK細(xì)胞發(fā)育進(jìn)程。3、EZH2通過(guò)調(diào)控NKG2D基因H3K27me3修飾水平以調(diào)節(jié)其表達(dá),從而促進(jìn)NK細(xì)胞的發(fā)育及其功能。4、抑制EZH2活性后,小鼠或人NK細(xì)胞殺傷能力明顯增加,且同NKG2D密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：NK細(xì)胞 EZH2 NKG2D H3K27me3 NK細(xì)胞發(fā)育 NK細(xì)胞功能
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)10-15
• 前言15-18
• 研究現(xiàn)狀、成果15-17
• 研究目的、方法17-18
• 一、EZH2對(duì)NK細(xì)胞發(fā)育的影響18-36
• 1.1 對(duì)象和方法18-29
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料18
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物18-19
• 1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑19-21
• 1.1.4 主要溶液和緩沖液配制21-23
• 1.1.5 主要實(shí)驗(yàn)儀器23-24
• 1.1.6 實(shí)驗(yàn)方法24-29
• 1.1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析29
• 1.2 結(jié)果29-33
• 1.2.1 EZH2抑制劑對(duì)小鼠NK細(xì)胞體外發(fā)育的影響29-31
• 1.2.2 EZH2抑制劑對(duì)人NK細(xì)胞體外發(fā)育的影響31-33
• 1.3 討論33-35
• 1.4 小結(jié)35-36
• 二、EZH2影響NK細(xì)胞發(fā)育及功能作用機(jī)制研究36-60
• 2.1 對(duì)象和方法36-47
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物36
• 2.1.2 細(xì)胞株36
• 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑36-37
• 2.1.4 主要溶液和緩沖液配制37-39
• 2.1.5 主要實(shí)驗(yàn)儀器39-40
• 2.1.6 實(shí)驗(yàn)方法40-47
• 2.1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析47
• 2.2 結(jié)果47-54
• 2.2.1 定量PCR引物檢測(cè)結(jié)果47-49
• 2.2.2 小鼠HSC體外分化NK細(xì)胞表面NKG2D表達(dá)量檢測(cè)49-50
• 2.2.3 人臍帶血HSC體外分化NK細(xì)胞表面NKG2D表達(dá)量檢測(cè)50-51
• 2.2.4 體外分化NK細(xì)胞中NKG2D基因H3K27me3修飾水平檢測(cè)51-52
• 2.2.5 EZH2抑制活性后對(duì)NK細(xì)胞殺傷能力的檢測(cè)52-54
• 2.3 討論54-59
• 2.4 小結(jié)59-60
• 全文結(jié)論60-61
• 參考文獻(xiàn)61-70
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明70-71
• 綜述 NK細(xì)胞發(fā)育及功能的研究71-91
• 綜述參考文獻(xiàn)84-91
• 致謝91

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：301952