本文關(guān)鍵詞：肝素芐基酯制備及肝素廢水蛋白回收研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肝素具有良好的抗凝血作用,目前被普遍用于手術(shù)治療過(guò)程和抗靜脈血栓形成等臨床實(shí)踐中,其臨床應(yīng)用價(jià)值是至今任何一種藥物都無(wú)法替代的。其中伊諾肝素鈉是目前研究最廣、循證醫(yī)學(xué)最多、使用最多的肝素類藥品,占據(jù)肝素藥物市場(chǎng)份額的50%以上。依諾肝素鈉生產(chǎn)工藝中最關(guān)鍵的是肝素芐基酯制備,其酯化程度的不同,決定了分子量的大小,得率和效益。同時(shí),在肝素生產(chǎn)中,傳統(tǒng)抗凝血特性的效價(jià)測(cè)定主要依賴肉眼判斷,試驗(yàn)誤差大;采用國(guó)外試劑則價(jià)格昂貴。一種便于操作,成本較低且客觀,準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好的效價(jià)測(cè)定方法,對(duì)提升中小企業(yè)肝素品質(zhì)控制、降低生產(chǎn)成本、提高生產(chǎn)效益具有重要意義。此外,我國(guó)肝素加工廢水約6000t/d,肝素在動(dòng)物體內(nèi)多以糖蛋白復(fù)合物的形式存在,生產(chǎn)中要用酶將肝素和蛋白分離,所以廢水為富含氨基酸的高鹽度有機(jī)物,COD值高,味道難聞,對(duì)環(huán)境污染大。但如果能回收廢水中蛋白和有機(jī)物,不僅能減輕或清除環(huán)境污染,且能變廢為寶,具有較好的生態(tài)和經(jīng)濟(jì)效益。針對(duì)以上情況,本論文主要研究了肝素芐基酯超聲波輔助制備的優(yōu)化;單通道凝血儀和兔全血法測(cè)定肝素鈉效價(jià);肝素鈉廢水蛋白沉淀回收。1、在肝素芐基酯的制備中:首先利用甲醇純化原料,利用紫外分光度計(jì)和高效液相色譜進(jìn)行了蛋白質(zhì)、核酸和多硫酸軟骨素的檢測(cè);然后通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn),確定了超聲波功率、時(shí)間對(duì)酯化率的影響。最后在此基礎(chǔ)上利用design expert軟件優(yōu)化設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),得到最佳工藝參數(shù)為:溫度控制在35-40度,功率為400W,超聲反應(yīng)時(shí)間5.5h,處理酯化率優(yōu)于對(duì)照樣(反應(yīng)25小時(shí))的酯化率(4.65%),為5.35%,經(jīng)純化蛋白核酸含量明顯降低,原料不含多硫酸軟骨素。2、利用羊血漿活化凝血活酶時(shí)間來(lái)測(cè)定肝素鈉效價(jià)的同時(shí)引入單通道凝血儀,實(shí)現(xiàn)微量、自動(dòng)化操作。同時(shí)與中國(guó)藥典的兔全血法作對(duì)比。均采用中國(guó)藥典生物效價(jià)(3.3)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算,經(jīng)可行性檢測(cè)證明測(cè)定的樣品效價(jià)PT準(zhǔn)確可行,兩種方法的可行限率均符合藥典要求。單通道凝血儀APTT法測(cè)得效價(jià)為90.65 IU/mg,兔血法測(cè)得效價(jià)為92.96 IU/mg。3、肝素鈉廢水蛋白沉淀回收的試驗(yàn)中:先初篩蛋白絮凝劑,再通過(guò)單因素試驗(yàn),確定了絮凝劑FeCl3、膨潤(rùn)土、硅藻土的添加量,pH值對(duì)蛋白沉淀量的影響,在此基礎(chǔ)上,采用Box-Benhnken Design(Design expert.v8.0.6.1)設(shè)計(jì)響應(yīng)面試驗(yàn),得到的較佳工藝參數(shù)為:pH7.5、沉淀劑FeCl30.38%、膨潤(rùn)土1.9%、硅藻土4.25%時(shí),腸衣肝素廢水蛋白沉淀率達(dá)51.13%,廢水溶液變清澈,COD去除率達(dá)80.94%。
【關(guān)鍵詞】：依諾肝素芐基酯 效價(jià)測(cè)定 純化 酯化 超聲波 蛋白質(zhì)絮凝
【學(xué)位授予單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R943
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-9
• 1 文獻(xiàn)綜述9-20
• 1.1 肝素鈉的結(jié)構(gòu)及理化特性10-12
• 1.1.1 肝素鈉的結(jié)構(gòu)10-11
• 1.1.2 肝素鈉的理化特性11-12
• 1.2 低分子肝素鈉的結(jié)構(gòu)及理化特性12-14
• 1.2.1 低分子肝素鈉的結(jié)構(gòu)12-13
• 1.2.2 低分子肝素鈉的理化特性13-14
• 1.3 肝素鈉和低分子肝素鈉臨床應(yīng)用比較14-15
• 1.4 肝素鈉生產(chǎn)的研究進(jìn)展15-16
• 1.4.1 鹽析法提取15
• 1.4.2 酶解提取法15-16
• 1.4.3 超聲波提取16
• 1.5 低分子肝素鈉生產(chǎn)的研究進(jìn)展16-17
• 1.6 肝素鈉效價(jià)測(cè)定的研究進(jìn)展17-18
• 1.7 肝素鈉污水處理的研究進(jìn)展18-20
• 2 引言20-22
• 2.1 研究目的及意義20-21
• 2.1.1 肝素鈉效價(jià)測(cè)定的目的和意義20
• 2.1.2 超聲波法優(yōu)化伊諾肝素鈉酯化工藝研究的目的和意義20-21
• 2.1.3 肝素生產(chǎn)廢水處理和蛋白回收的目的和意義21
• 2.2 研究?jī)?nèi)容21-22
• 3 實(shí)驗(yàn)材料及方法22-31
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料22
• 3.2 試劑及儀器22-23
• 3.3 方法23-31
• 3.3.1 肝素鈉效價(jià)測(cè)定23-24
• 3.3.1.1 半自動(dòng)凝血儀羊血漿法測(cè)定肝素鈉效價(jià)23-24
• 3.3.1.2 兔血法測(cè)定肝素鈉效價(jià)24
• 3.3.2 低分子伊諾肝素鈉芐基酯的超聲波制備24-25
• 3.3.2.1 粗品肝素鈉的純化24
• 3.3.2.2 肝素季銨鹽的制備24
• 3.3.2.3 肝素芐基酯超聲輔助制備程序24-25
• 3.3.3 肝素鈉生產(chǎn)廢水蛋白沉淀回收研究25-27
• 3.3.3.1 不同蛋白絮凝沉淀劑試驗(yàn)26
• 3.3.3.2 蛋白絮凝沉淀單因素實(shí)驗(yàn)26
• 3.3.3.3 響應(yīng)曲面優(yōu)化試驗(yàn)26-27
• 3.3.4 實(shí)驗(yàn)測(cè)定指標(biāo)與檢測(cè)方法27-30
• 3.3.4.1 紫外分光光度計(jì)測(cè)定蛋白和核酸的紫外吸收值27-28
• 3.3.4.2 多硫酸軟骨素的測(cè)定28
• 3.3.4.3 酯化率的檢測(cè)28-29
• 3.3.4.4 廢水沉淀物中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定29
• 3.3.4.5 COD值的測(cè)定29-30
• 3.3.5 數(shù)據(jù)處理30-31
• 4 結(jié)果與分析31-46
• 4.1 效價(jià)測(cè)定31-33
• 4.1.1 APTT血凝儀效價(jià)測(cè)定31-33
• 4.1.2 兔血法和APTT測(cè)定測(cè)結(jié)果比較33
• 4.2 肝素鈉粗品純化后的雜質(zhì)分析33-36
• 4.2.1 純化后的得率33
• 4.2.2 肝素鈉紫外吸收值對(duì)比33-35
• 4.2.3 多硫酸軟骨素的檢測(cè)35-36
• 4.3 苯甲醇標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制36-37
• 4.4 超聲波輔助酯化的實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-40
• 4.4.1 超聲功率對(duì)肝素芐基酯的影響37
• 4.4.2 時(shí)間對(duì)酯化率的影響37-38
• 4.4.3 響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)38-40
• 4.4.3.1 模型的建立及其顯著性分析38-39
• 4.4.3.2 響應(yīng)面及等高線分析39
• 4.4.3.3 反應(yīng)條件的優(yōu)化及模型驗(yàn)證39-40
• 4.5 肝素鈉生產(chǎn)廢水蛋白沉淀回收研究40-46
• 4.5.0 原料液測(cè)定值40
• 4.5.1 不同蛋白絮凝沉淀劑試驗(yàn)40-41
• 4.5.2 蛋白絮凝沉淀單因素實(shí)驗(yàn)41-42
• 4.5.2.1 不同三氯化鐵的添加量對(duì)蛋白沉淀的影響41
• 4.5.2.2 不同膨潤(rùn)土的添加量對(duì)蛋白沉淀的影響41
• 4.5.2.3 不同硅藻土的添加量對(duì)蛋白沉淀的影響41-42
• 4.5.2.4 溶液不同p H值對(duì)蛋白沉淀的影響42
• 4.5.3 蛋白絮凝沉淀響應(yīng)曲面設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果42-46
• 4.5.3.1 模型建立及顯著性分析43-44
• 4.5.3.2 蛋白絮凝沉淀處理樣COD去除率44-45
• 4.5.3.3 最優(yōu)值預(yù)測(cè)與驗(yàn)證45-46
• 5 討論46-49
• 5.1 肝素鈉效價(jià)測(cè)定的影響46
• 5.2 肝素芐基酯制備的影響因素46-47
• 5.3 肝素廢水蛋白沉淀回收討論47-49
• 6 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 致謝55-56
• 作者簡(jiǎn)介56

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本文編號(hào)：301132