本文關(guān)鍵詞：肝素芐基酯制備及肝素廢水蛋白回收研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肝素具有良好的抗凝血作用,目前被普遍用于手術(shù)治療過程和抗靜脈血栓形成等臨床實踐中,其臨床應(yīng)用價值是至今任何一種藥物都無法替代的。其中伊諾肝素鈉是目前研究最廣、循證醫(yī)學(xué)最多、使用最多的肝素類藥品,占據(jù)肝素藥物市場份額的50%以上。依諾肝素鈉生產(chǎn)工藝中最關(guān)鍵的是肝素芐基酯制備,其酯化程度的不同,決定了分子量的大小,得率和效益。同時,在肝素生產(chǎn)中,傳統(tǒng)抗凝血特性的效價測定主要依賴肉眼判斷,試驗誤差大;采用國外試劑則價格昂貴。一種便于操作,成本較低且客觀,準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好的效價測定方法,對提升中小企業(yè)肝素品質(zhì)控制、降低生產(chǎn)成本、提高生產(chǎn)效益具有重要意義。此外,我國肝素加工廢水約6000t/d,肝素在動物體內(nèi)多以糖蛋白復(fù)合物的形式存在,生產(chǎn)中要用酶將肝素和蛋白分離,所以廢水為富含氨基酸的高鹽度有機(jī)物,COD值高,味道難聞,對環(huán)境污染大。但如果能回收廢水中蛋白和有機(jī)物,不僅能減輕或清除環(huán)境污染,且能變廢為寶,具有較好的生態(tài)和經(jīng)濟(jì)效益。針對以上情況,本論文主要研究了肝素芐基酯超聲波輔助制備的優(yōu)化;單通道凝血儀和兔全血法測定肝素鈉效價;肝素鈉廢水蛋白沉淀回收。1、在肝素芐基酯的制備中:首先利用甲醇純化原料,利用紫外分光度計和高效液相色譜進(jìn)行了蛋白質(zhì)、核酸和多硫酸軟骨素的檢測;然后通過單因素實驗,確定了超聲波功率、時間對酯化率的影響。最后在此基礎(chǔ)上利用design expert軟件優(yōu)化設(shè)計實驗,得到最佳工藝參數(shù)為:溫度控制在35-40度,功率為400W,超聲反應(yīng)時間5.5h,處理酯化率優(yōu)于對照樣(反應(yīng)25小時)的酯化率(4.65%),為5.35%,經(jīng)純化蛋白核酸含量明顯降低,原料不含多硫酸軟骨素。2、利用羊血漿活化凝血活酶時間來測定肝素鈉效價的同時引入單通道凝血儀,實現(xiàn)微量、自動化操作。同時與中國藥典的兔全血法作對比。均采用中國藥典生物效價(3.3)法進(jìn)行統(tǒng)計計算,經(jīng)可行性檢測證明測定的樣品效價PT準(zhǔn)確可行,兩種方法的可行限率均符合藥典要求。單通道凝血儀APTT法測得效價為90.65 IU/mg,兔血法測得效價為92.96 IU/mg。3、肝素鈉廢水蛋白沉淀回收的試驗中:先初篩蛋白絮凝劑,再通過單因素試驗,確定了絮凝劑FeCl3、膨潤土、硅藻土的添加量,pH值對蛋白沉淀量的影響,在此基礎(chǔ)上,采用Box-Benhnken Design(Design expert.v8.0.6.1)設(shè)計響應(yīng)面試驗,得到的較佳工藝參數(shù)為:pH7.5、沉淀劑FeCl30.38%、膨潤土1.9%、硅藻土4.25%時,腸衣肝素廢水蛋白沉淀率達(dá)51.13%,廢水溶液變清澈,COD去除率達(dá)80.94%。
【關(guān)鍵詞】：依諾肝素芐基酯 效價測定 純化 酯化 超聲波 蛋白質(zhì)絮凝
【學(xué)位授予單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R943
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-9
• 1 文獻(xiàn)綜述9-20
• 1.1 肝素鈉的結(jié)構(gòu)及理化特性10-12
• 1.1.1 肝素鈉的結(jié)構(gòu)10-11
• 1.1.2 肝素鈉的理化特性11-12
• 1.2 低分子肝素鈉的結(jié)構(gòu)及理化特性12-14
• 1.2.1 低分子肝素鈉的結(jié)構(gòu)12-13
• 1.2.2 低分子肝素鈉的理化特性13-14
• 1.3 肝素鈉和低分子肝素鈉臨床應(yīng)用比較14-15
• 1.4 肝素鈉生產(chǎn)的研究進(jìn)展15-16
• 1.4.1 鹽析法提取15
• 1.4.2 酶解提取法15-16
• 1.4.3 超聲波提取16
• 1.5 低分子肝素鈉生產(chǎn)的研究進(jìn)展16-17
• 1.6 肝素鈉效價測定的研究進(jìn)展17-18
• 1.7 肝素鈉污水處理的研究進(jìn)展18-20
• 2 引言20-22
• 2.1 研究目的及意義20-21
• 2.1.1 肝素鈉效價測定的目的和意義20
• 2.1.2 超聲波法優(yōu)化伊諾肝素鈉酯化工藝研究的目的和意義20-21
• 2.1.3 肝素生產(chǎn)廢水處理和蛋白回收的目的和意義21
• 2.2 研究內(nèi)容21-22
• 3 實驗材料及方法22-31
• 3.1 實驗材料22
• 3.2 試劑及儀器22-23
• 3.3 方法23-31
• 3.3.1 肝素鈉效價測定23-24
• 3.3.1.1 半自動凝血儀羊血漿法測定肝素鈉效價23-24
• 3.3.1.2 兔血法測定肝素鈉效價24
• 3.3.2 低分子伊諾肝素鈉芐基酯的超聲波制備24-25
• 3.3.2.1 粗品肝素鈉的純化24
• 3.3.2.2 肝素季銨鹽的制備24
• 3.3.2.3 肝素芐基酯超聲輔助制備程序24-25
• 3.3.3 肝素鈉生產(chǎn)廢水蛋白沉淀回收研究25-27
• 3.3.3.1 不同蛋白絮凝沉淀劑試驗26
• 3.3.3.2 蛋白絮凝沉淀單因素實驗26
• 3.3.3.3 響應(yīng)曲面優(yōu)化試驗26-27
• 3.3.4 實驗測定指標(biāo)與檢測方法27-30
• 3.3.4.1 紫外分光光度計測定蛋白和核酸的紫外吸收值27-28
• 3.3.4.2 多硫酸軟骨素的測定28
• 3.3.4.3 酯化率的檢測28-29
• 3.3.4.4 廢水沉淀物中蛋白質(zhì)含量的測定29
• 3.3.4.5 COD值的測定29-30
• 3.3.5 數(shù)據(jù)處理30-31
• 4 結(jié)果與分析31-46
• 4.1 效價測定31-33
• 4.1.1 APTT血凝儀效價測定31-33
• 4.1.2 兔血法和APTT測定測結(jié)果比較33
• 4.2 肝素鈉粗品純化后的雜質(zhì)分析33-36
• 4.2.1 純化后的得率33
• 4.2.2 肝素鈉紫外吸收值對比33-35
• 4.2.3 多硫酸軟骨素的檢測35-36
• 4.3 苯甲醇標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制36-37
• 4.4 超聲波輔助酯化的實驗結(jié)果37-40
• 4.4.1 超聲功率對肝素芐基酯的影響37
• 4.4.2 時間對酯化率的影響37-38
• 4.4.3 響應(yīng)面優(yōu)化實驗38-40
• 4.4.3.1 模型的建立及其顯著性分析38-39
• 4.4.3.2 響應(yīng)面及等高線分析39
• 4.4.3.3 反應(yīng)條件的優(yōu)化及模型驗證39-40
• 4.5 肝素鈉生產(chǎn)廢水蛋白沉淀回收研究40-46
• 4.5.0 原料液測定值40
• 4.5.1 不同蛋白絮凝沉淀劑試驗40-41
• 4.5.2 蛋白絮凝沉淀單因素實驗41-42
• 4.5.2.1 不同三氯化鐵的添加量對蛋白沉淀的影響41
• 4.5.2.2 不同膨潤土的添加量對蛋白沉淀的影響41
• 4.5.2.3 不同硅藻土的添加量對蛋白沉淀的影響41-42
• 4.5.2.4 溶液不同p H值對蛋白沉淀的影響42
• 4.5.3 蛋白絮凝沉淀響應(yīng)曲面設(shè)計試驗結(jié)果42-46
• 4.5.3.1 模型建立及顯著性分析43-44
• 4.5.3.2 蛋白絮凝沉淀處理樣COD去除率44-45
• 4.5.3.3 最優(yōu)值預(yù)測與驗證45-46
• 5 討論46-49
• 5.1 肝素鈉效價測定的影響46
• 5.2 肝素芐基酯制備的影響因素46-47
• 5.3 肝素廢水蛋白沉淀回收討論47-49
• 6 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 致謝55-56
• 作者簡介56

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本文編號：301132