發(fā)布時(shí)間：2017-04-11 17:03

  本文關(guān)鍵詞：金屬硫蛋白對(duì)環(huán)磷酰胺免疫毒性保護(hù)作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：環(huán)磷酰胺(Cyclophosphamide, CP)是臨床廣泛使用的抗腫瘤藥物,對(duì)多發(fā)性骨髓瘤、肺癌、宮頸癌、卵巢癌等惡性腫瘤均具有療效。但它對(duì)皮膚、呼吸系統(tǒng)、泌尿生殖系統(tǒng)以及免疫系統(tǒng)等造成的毒副作用嚴(yán)重限制了其在臨床上的使用。免疫系統(tǒng)作為機(jī)體的防御系統(tǒng),在抵抗外源性細(xì)菌、病毒的侵犯中起著關(guān)鍵的作用,對(duì)于腫瘤患者治療后的免疫重建也尤其重要。因此,尋找對(duì)抗CP免疫毒性的方法,擴(kuò)大其使用范圍、提高腫瘤治療效果是非常必要的。金屬硫蛋白(Metallothionein, MT)是一種能被多種外源性刺激誘導(dǎo)的小分子量蛋白,具有解毒重金屬、調(diào)控微量元素以及防輻射等多種生理功能。MT對(duì)外源因素產(chǎn)生的機(jī)體損傷有一定的保護(hù)效果,這可能是通過降低機(jī)體的氧化損傷程度,促進(jìn)DNA損傷修復(fù)實(shí)現(xiàn)的。鑒于CP主要是通過DNA烷基化產(chǎn)生細(xì)胞毒性,本研究旨在探討MT能否在一定程度上保護(hù)機(jī)體對(duì)CP產(chǎn)生的免疫毒性,為提高CP的臨床用藥效果提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。本研究用MT-/-和MT+/+小鼠進(jìn)行環(huán)磷酰胺染毒,通過觀察外周血、骨髓、胸腺以及脾臟等免疫器官的損傷情況,從氧化損傷和DNA損傷修復(fù)兩方面考查MT對(duì)CP所致免疫抑制毒性的保護(hù)作用及可能機(jī)制。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,小鼠給予CP后,外周血、骨髓、脾臟和胸腺等均發(fā)生不同程度的損傷。具體表現(xiàn)為：白細(xì)胞計(jì)數(shù)降低、微核率升高以及臟器、臟腦系數(shù)下降；且MT-/-小鼠對(duì)CP導(dǎo)致的以上指標(biāo)的變化更加敏感。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),脾臟和胸腺中MT-/-小鼠的MDA含量高于MT+/+小鼠；脾臟和胸腺中GSH-Px活力均呈降低趨勢(shì),且MT-/-小鼠該酶活力降低更加顯著；脾臟中MT-/-小鼠SOD活力升高顯著,而MT+/+小鼠胸腺中該酶活力在下降,在MT-/-小鼠中該酶活力降低。以上結(jié)果表明,與MT+/+小鼠相比,MT-/-小鼠發(fā)生更加嚴(yán)重的氧化損傷。Nrf2/ARE抗氧化通路是保護(hù)機(jī)體氧化損傷的重要通路,在本研究中,我們以脾臟和胸腺為研究對(duì)象,對(duì)該通路中Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白進(jìn)行了分子水平上的檢測(cè)。結(jié)果表明,染毒CP導(dǎo)致Nrf2蛋白表達(dá)量增加,MT-/-小鼠中該蛋白增加顯著,其下游蛋白HO-1和NQO-1也有類似的趨勢(shì)。這些結(jié)果提示,MT可能通過激活Nrf2信號(hào)通路改變氧化損傷相關(guān)酶的活性,從而對(duì)CP的免疫毒性產(chǎn)生保護(hù)作用。外周血彗星實(shí)驗(yàn)表明,染毒CP后DNA發(fā)生嚴(yán)重的損傷。磷酸化組蛋白(yH2AX)是DNA雙鏈斷裂的標(biāo)志之一,我們的結(jié)果表明,MT-/-小鼠該蛋白的表達(dá)量明顯高于MT+/+小鼠。進(jìn)一步檢測(cè)了DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白ATM、P53和P21的表達(dá)和磷酸化活化情況。結(jié)果顯示,給予CP引起ATM和P53活化形式增加,且MT-/-小鼠中該蛋白表達(dá)量更高。P53下游分子P21雖然在染毒后表達(dá)量增加,但MT-/-小鼠組與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。這些結(jié)果提示,MT能夠保護(hù)CP所致的DNA損傷,并且可能通過改變ATM、P53和P21等DNA損傷修復(fù)通路中相關(guān)蛋白的表達(dá),從而降低CP對(duì)機(jī)體的免疫抑制毒性。綜上結(jié)果表明,本研究中,CP能夠?qū)π∈螽a(chǎn)生免疫抑制毒性,而MT能夠減輕CP所致的免疫抑制毒性。通過實(shí)驗(yàn)研究可以推測(cè),MT可能通過兩種途徑發(fā)揮免疫抑制保護(hù)作用,一是MT能夠降低CP所致的氧化損傷,這可能是MT對(duì)抗氧化信號(hào)通路Nrf2/ARE中蛋白的表達(dá)及抗氧化相關(guān)酶的表達(dá)產(chǎn)生影響；二是MT對(duì)CP所致的DNA損傷具有修復(fù)作用,這可能是由于MT影響了DNA損傷修復(fù)通路中相關(guān)蛋白的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：金屬硫蛋白 環(huán)磷酰胺 免疫抑制 Nrf2/ARE信號(hào)通路 DNA損傷修復(fù)
【學(xué)位授予單位】：齊魯工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R965
【目錄】：

• 摘要9-11
• ABSTRACT11-13
• 縮略詞表13-15
• 第1章 緒論15-23
• 1.1 金屬硫蛋白概述15-17
• 1.1.1 金屬硫蛋白的定義及結(jié)構(gòu)15
• 1.1.2 金屬硫蛋白具有生物學(xué)功能多樣性15-16
• 1.1.3 金屬硫蛋白發(fā)揮生物學(xué)功能的分子機(jī)制16-17
• 1.1.4 金屬硫蛋白應(yīng)用研究進(jìn)展17
• 1.2 環(huán)磷酰胺概述17-21
• 1.2.1 環(huán)磷酰胺的定義及作用機(jī)理17-19
• 1.2.2 環(huán)磷酰胺的臨床應(yīng)用19
• 1.2.3 環(huán)磷酰胺免疫毒性表現(xiàn)19-21
• 1.3 基因敲除動(dòng)物模型的優(yōu)勢(shì)21-22
• 1.3.1 動(dòng)物模型在疾病研究和藥物安全評(píng)價(jià)中應(yīng)用21
• 1.3.2 基因敲除動(dòng)物模型的應(yīng)用與優(yōu)越性21-22
• 1.4 課題研究?jī)?nèi)容及總體思路22-23
• 1.4.1 課題研究的研究?jī)?nèi)容22
• 1.4.2 課題研究的總體思路22-23
• 第2章 環(huán)磷酰胺所致一般免疫毒性描述23-35
• 2.1 引言23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料23-25
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物23
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器23-24
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑24
• 2.2.4 給藥方式24
• 2.2.5 實(shí)驗(yàn)試劑制備24-25
• 2.2.6 實(shí)驗(yàn)組織標(biāo)本取材25
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法25-28
• 2.3.1 動(dòng)物日常觀察25
• 2.3.2 體重及臟器變化25
• 2.3.3 白細(xì)胞計(jì)數(shù)分析25
• 2.3.4 彗星實(shí)驗(yàn)測(cè)定外周血DNA損傷25-26
• 2.3.5 骨髓微核率測(cè)定26
• 2.3.6 病理切片制作26-27
• 2.3.7 病理切片HE染色27-28
• 2.3.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法28
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論28-34
• 2.4.1 動(dòng)物日常觀察28
• 2.4.2 體重臟器變化分析28-30
• 2.4.3 白細(xì)胞變化分析30-31
• 2.4.4 外周血DNA損傷分析31-32
• 2.4.5 骨髓微核率變化分析32
• 2.4.6 胸腺和脾臟的病理改變32-34
• 2.5 本章小結(jié)34-35
• 第3章 金屬硫蛋白對(duì)環(huán)磷酰胺所致氧化損傷的保護(hù)作用35-51
• 3.1 引言35
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料35-37
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物35
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器35-36
• 3.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑及材料36-37
• 3.2.4 給藥方式37
• 3.2.5 實(shí)驗(yàn)試劑配制37
• 3.2.6 實(shí)驗(yàn)組織標(biāo)本取材37
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法37-43
• 3.3.1 蛋白定量37-38
• 3.3.2 檢測(cè)脾臟和胸腺組織中脂質(zhì)過氧化水平38
• 3.3.3 檢測(cè)脾臟和胸腺組織中總超氧化物歧化酶水平38-39
• 3.3.4 檢測(cè)脾臟和胸腺組織中總谷胱甘肽過氧化物酶水平39-40
• 3.3.5 檢測(cè)脾臟和胸腺中抗氧化相關(guān)蛋白的表達(dá)40-42
• 3.3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法42-43
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論43-50
• 3.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定43-44
• 3.4.2 脾臟和胸腺中丙二醛含量變化分析44-45
• 3.4.3 脾臟和胸腺中超氧化物歧化酶活力變化分析45-46
• 3.4.4 脾臟和胸腺中谷胱甘肽過氧化物酶活力變化分析46-47
• 3.4.5 脾臟和胸腺中抗氧化通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平檢測(cè)47-50
• 3.5 本章小結(jié)50-51
• 第4章 金屬硫蛋白對(duì)環(huán)磷酰胺所致DNA損傷的影響51-59
• 4.1 引言51
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料51-52
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物51
• 4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器51-52
• 4.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑52
• 4.2.4 給藥方式52
• 4.2.5 實(shí)驗(yàn)試劑配制52
• 4.2.6 實(shí)驗(yàn)組織標(biāo)本取材52
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法52
• 4.3.1 檢測(cè)脾臟和胸腺中DNA損傷修復(fù)通過中蛋白的表達(dá)52
• 4.3.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法52
• 4.4 結(jié)果與討論52-57
• 4.4.1 胸腺和脾臟DNA損傷程度分析52-53
• 4.4.2 脾臟和胸腺DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白表達(dá)變化分析53-57
• 4.5 本章小結(jié)57-59
• 全文總結(jié)與展望59-61
• 參考文獻(xiàn)61-71
• 致謝71-73
• 在學(xué)期間主要科研成果73

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 陳春;周啟星;;金屬硫蛋白作為重金屬污染生物標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J];農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào);2009年03期

2 衣翠華;張昕;侯明;張文東;黎莉;郝靜;王秀問;;含奈達(dá)鉑與含順鉑聯(lián)合化療方案治療晚期卵巢癌的臨床對(duì)比研究[J];現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展;2006年05期

3 謝明仁;俞詩(shī)源;張t，

本文編號(hào)：299530