本文關(guān)鍵詞：不同來源的BLyS結(jié)合肽及其肽抗體在BLyS拮抗劑方面的應(yīng)用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：在有效治療自身免疫性疾病的探索中,B淋巴細胞刺激因子(BLyS)正成為引人注目的治療靶點。BLyS,作為腫瘤壞死因子(TNF)超家族的成員之一,在B淋巴細胞增殖、分化、成熟及穩(wěn)態(tài)平衡過程中扮演著至關(guān)重要的調(diào)控者。這依賴于BLyS與受體的相互作用及多種信號的傳遞。研究發(fā)現(xiàn),過表達的BLyS可導(dǎo)致系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、B細胞腫瘤等疾病的發(fā)生。因此,多種類型的BLyS拮抗劑已成為自身免疫性疾病臨床研究的熱點。據(jù)文獻報道,噬菌體展示肽庫技術(shù)篩選出的肽814、219具有BLyS親和性。我們依據(jù)BLyS-TACI作用復(fù)合物的空間結(jié)構(gòu),通過計算機輔助藥物設(shè)計獲得了肽3-TA、3-TC。為保持這些短肽的空間結(jié)構(gòu)及穩(wěn)定性,將人IgG1Fc片段與肽基因重組形成肽-Fc融合蛋白,即一種新型的肽抗體。對不同來源的肽及肽抗體進行活性分析,檢測其成為BLyS拮抗劑的可行性。具體結(jié)果如下:1.融合基因pET30a-814-Fc、pET30a-219-Fc被構(gòu)建并表達。肽抗體814-Fc能顯著抑制BLyS-TACI的相互作用,抑制活性與肽814相當。2.融合基因pET30a-3-TA-Fc、pET30a-3-TC-Fc被構(gòu)建并表達。相比于單拷貝肽的融合蛋白TA-Fc、TC-Fc,3-TA-Fc、3-TC-Fc對BLyS的親和性有所增強。3.融合蛋白814-Fc、TA-Fc是二聚體結(jié)構(gòu)。814、814-Fc的拮抗活性是TA、TA-Fc的兩倍。同時,814、TA與BLyS在不同的功能區(qū)結(jié)合。
【關(guān)鍵詞】：BLyS BLyS拮抗劑 肽抗體 噬菌體肽庫展示技術(shù) 計算機輔助藥物設(shè)計
【學(xué)位授予單位】：天津大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R915
【目錄】：

• 摘要4-5
• abstract5-9
• 第一章 文獻綜述9-21
• 1.1 BLyS的特征及分布9-10
• 1.2 BLyS受體10-12
• 1.2.1 TACI10-11
• 1.2.2 BCMA11-12
• 1.2.3 BAFF-R12
• 1.3 BLyS介導(dǎo)的信號傳遞12-13
• 1.4 BLyS的生物學(xué)效應(yīng)13-15
• 1.4.1 對B細胞的作用13-14
• 1.4.2 對T細胞的作用14-15
• 1.5 BLyS與疾病15-17
• 1.5.1 免疫缺陷病15
• 1.5.2 自身免疫疾病15-16
• 1.5.3 腫瘤16-17
• 1.6 BLyS相關(guān)疾病的治療17-19
• 1.6.1 抗BLyS抗體17-18
• 1.6.2 BLyS受體融合蛋白18-19
• 1.6.3 BLyS拮抗短肽19
• 1.7 總結(jié)與展望19-21
• 第二章 實驗材料和試劑配制21-29
• 2.1 實驗材料21-22
• 2.2 實驗試劑22-24
• 2.3 實驗儀器24-25
• 2.4 試劑配制25-29
• 第三章 來自噬菌體肽庫的BLyS結(jié)合肽 814、219的研究29-49
• 引言29
• 3.1 實驗方法29-41
• 3.1.1 肽 814、219的獲得29-30
• 3.1.2 肽 814、219的處理30
• 3.1.3 肽 814、219的競爭性ELISA試驗30-31
• 3.1.4 重組質(zhì)粒pET30a814Fc / pET30a219Fc的構(gòu)建31-37
• 3.1.5 高表達量菌株的篩選37-38
• 3.1.6 融合蛋白 814-Fc/219-Fc的表達與純化38-40
• 3.1.7 融合蛋白 814-Fc/219-Fc的活性分析40-41
• 3.2 實驗結(jié)果41-47
• 3.2.1 肽 814、219的溶解情況41
• 3.2.2 肽 814、219抑制BLyS-TACI的反應(yīng)41-42
• 3.2.3 重組質(zhì)粒pET30a814Fc / pET30a219Fc的獲得42-44
• 3.2.4 高表達菌株的的獲得44-45
• 3.2.5 融合蛋白 814-Fc/219-Fc的的獲得45
• 3.2.6 融合蛋白 814-Fc/219-Fc結(jié)合BLyS同時抑制BLyS-TACI的反應(yīng)45-47
• 3.3 結(jié)論與分析47-49
• 第四章 通過計算機輔助藥物設(shè)計獲得的BLyS結(jié)合肽 3-TA、3-TC的研究49-58
• 引言49
• 4.1 實驗方法49-52
• 4.1.1 3copyTA、3copyTC的設(shè)計49-50
• 4.1.2 重組質(zhì)粒pET30a3TA-Fc / pET30a3TC-Fc的構(gòu)建50-52
• 4.1.3 融合蛋白 3-TA-Fc/3-TC-Fc的誘導(dǎo)與純化52
• 4.1.4 融合蛋白 3-TA-Fc/3-TC-Fc的活性分析52
• 4.2 實驗結(jié)果52-56
• 4.2.1 重組質(zhì)粒pET30a3TA-Fc / pET30a3TC-Fc的獲得52-54
• 4.2.2 高表達菌株的的獲得54-55
• 4.2.3 融合蛋白 3-TA-Fc、3-TC-Fc的的獲得55
• 4.2.4 3-TA-Fc、3-TC-Fc對BLyS的親和力優(yōu)于TA-Fc、TC-Fc55-56
• 4.3 結(jié)論與分析56-58
• 第五章 比較不同來源的BLyS結(jié)合肽及其肽抗體58-64
• 引言58
• 5.1 實驗方法58-59
• 5.1.1 814-Fc、TA-Fc的還原型與非還原型SDS-PAGE電泳58
• 5.1.2 肽 814、TA的活性比較58-59
• 5.1.3 肽抗體 814-Fc、TA-Fc的活性比較59
• 5.1.4 814、TA與BLyS結(jié)合位點的分析59
• 5.2 實驗結(jié)果59-62
• 5.2.1 融合蛋白 814-Fc、TA-Fc均為二聚體結(jié)構(gòu)59-60
• 5.2.2 肽814的拮抗活性是肽TA的2倍60-61
• 5.2.3 814-Fc的拮抗活性是TA-Fc的2倍61
• 5.2.4 814、TA在不同的結(jié)合位點與BLyS相互作用61-62
• 5.3 結(jié)果與討論62-64
• 第六章 結(jié)論與展望64-66
• 參考文獻66-73
• 發(fā)表論文和參加科研情況73-74
• 致謝74-75

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 張志方;腫瘤壞死因子家族的新成員——BLyS[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);2002年02期

2 周琳;TNF家族新成員BLyS和其受體TACI[J];中國免疫學(xué)雜志;2001年12期

3 黃艷;黃剛;胡長江;曾益軍;許志臻;陳\宏

本文編號：298221