本文關(guān)鍵詞：長效靶向順鉑脂質(zhì)體的制備及其抗腫瘤作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：宮頸癌是最常見的原發(fā)性子宮陰道部位的惡性腫瘤,也是死亡率和發(fā)病率增長最快,對群眾健康和生命產(chǎn)生威脅最大的惡性腫瘤之一。絕大多數(shù)宮頸癌起源于人乳頭狀瘤病毒對宮頸細(xì)胞的持續(xù)感染。目前臨床上順鉑是治療晚期宮頸癌的一線藥物,但因其半衰期短,所以需持續(xù)大劑量給藥以維持體內(nèi)有效的藥用濃度。這種大劑量的給藥方式給患者帶來了很強的毒副作用,限制了其臨床效用。本課題旨在利用宮頸癌細(xì)胞表面過表達(dá)的雌激素受體(Estrogen receptors,ER)與配體雌酮(Estrogen,ES)間的特異性高親和力,研制出一種新型以雌酮修飾的長效順鉑脂質(zhì)體制劑,以提高藥物對腫瘤的靶向性同時能夠?qū)崿F(xiàn)在體內(nèi)達(dá)到長效循環(huán)的效果。此外,本論文對該新型脂質(zhì)體制劑進(jìn)行了表征、體外靶向性、體外細(xì)胞毒及體內(nèi)抗腫瘤的研究。首先采用硫酸銨梯度法制備4種不同的順鉑脂質(zhì)體制劑,即順鉑普通脂質(zhì)體(L-DDP)、順鉑靶向脂質(zhì)體(ES-L-DDP)、順鉑長效脂質(zhì)體(SSL-DDP)和順鉑長效靶向脂質(zhì)體(ES-SSL-DDP)。然后分別對這四種脂質(zhì)體制劑進(jìn)行表征研究,通過透射電鏡對脂質(zhì)體形態(tài)進(jìn)行觀察,采用動態(tài)光散射粒徑分析儀測定粒徑大小、粒徑分布、多分散系數(shù)和Zeta電位,借助高效液相色譜檢測順鉑脂質(zhì)體的包封率,并通過透析法檢測四種制劑在4℃和25℃條件下于不同時間段的穩(wěn)定性。之后在熒光顯微鏡下觀察宮頸癌細(xì)胞Hela對加載了羅丹明熒光染料(Rh B)的四種脂質(zhì)體制劑的攝取情況,以此驗證長效靶向脂質(zhì)體的體外靶向作用和長循環(huán)作用。為探究Hela細(xì)胞對長效靶向脂質(zhì)體的攝取機(jī)制,于長效靶向脂質(zhì)體與細(xì)胞孵育前加入內(nèi)吞抑制劑:蔗糖、染料木黃酮、鹽酸阿米洛利和雌酮,并于熒光顯微鏡下觀察內(nèi)吞結(jié)果。采用MTT比色法對順鉑及所制備的的4種脂質(zhì)體制劑分別進(jìn)行細(xì)胞毒實驗,以此觀察體外抗腫瘤作用。采用活體成像技術(shù),觀察長效靶向脂質(zhì)體能否特異性的在腫瘤部位進(jìn)行積累。采用體內(nèi)抗腫瘤實驗觀察不同順鉑制劑對荷瘤裸鼠的腫瘤殺傷性。我們成功制備出四種脂質(zhì)體制劑(L-DDP、ES-L-DDP、SSL-DDP、ES-SSL-DDP),粒徑均在100nm以內(nèi),粒徑較為均一,PDI在0.1~0.2范圍內(nèi),脂質(zhì)體并帶有一定負(fù)電荷。順鉑長效靶向脂質(zhì)體的穩(wěn)定性顯著優(yōu)于順鉑靶向脂質(zhì)體和普通脂質(zhì)體,并且在4°C下保存48h后順鉑長效靶向脂質(zhì)體制劑的滲漏率仍不超過10%。體外靶向性的研究結(jié)果證實ES-L-Rh B與ES-SSL-Rh B均對Hela細(xì)胞具有主動靶向作用,且ES-SSL-Rh B具有長效作用。此外,除受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用外,小窩蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用是長效靶向脂質(zhì)體進(jìn)入Hela細(xì)胞的主要途徑。順鉑及所制備的這四種脂質(zhì)體對Hela細(xì)胞的毒性作用由強到弱依次為:ES-SSL-DDP、SSL-DDP、ES-L-DDP、L-DDP、DDP,且ES-SSL-DDP的抗腫瘤效果顯著高于其他四種制劑。在荷瘤裸鼠體內(nèi),長效靶向脂質(zhì)體特異性的在腫瘤部位進(jìn)行積累。并且順鉑長效靶向脂質(zhì)體與其他制劑相比對荷瘤裸鼠具有最高的腫瘤殺傷性。本課題在常規(guī)脂質(zhì)體中載入能夠特異性識別雌激素受體的雌酮片段和長效片段PEG分子,成功研制出一種具有長循環(huán)和腫瘤特異靶向特性的高效低毒的脂質(zhì)體載藥系統(tǒng),將這種載藥系統(tǒng)攜帶臨床上的一線的抗宮頸癌用藥物順鉑,發(fā)現(xiàn)這種順鉑長效靶向脂質(zhì)體能夠延長藥物在體內(nèi)的作用時間,藥物對宮頸癌細(xì)胞的殺傷作用表現(xiàn)出明顯的濃度依賴性和時間依賴性,其靶向性也可顯著增強其對腫瘤的定位作用并降低了毒副作用,有較高的臨床價值。通過本論文的研究和論證,相信在不久的將來順鉑長效靶向脂質(zhì)體就可以應(yīng)用于宮頸癌的臨床治療。
【關(guān)鍵詞】：宮頸癌 順鉑 雌激素受體 長效靶向 抗腫瘤
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R943;R96
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略詞表10-11
• 第1章 緒論11-17
• 1.1 癌癥11
• 1.2 宮頸癌11-12
• 1.3 順鉑12-13
• 1.4 脂質(zhì)體13-15
• 1.4.1 脂質(zhì)體概述13-14
• 1.4.2 脂質(zhì)體特點14
• 1.4.3 配體選擇14-15
• 1.5 細(xì)胞表面受體選擇15-17
• 1.5.1 雌激素受體在腫瘤細(xì)胞表面分布情況概述15
• 1.5.2 宮頸癌細(xì)胞表面雌激素受體表達(dá)情況15-16
• 1.5.3 本課題立題依據(jù)16-17
• 第2章材料和方法17-29
• 2.1 實驗材料17-20
• 2.1.1 實驗動物17
• 2.1.2 實驗細(xì)胞株17
• 2.1.3 藥品和試劑17-19
• 2.1.4 實驗耗材19
• 2.1.5 儀器設(shè)備19-20
• 2.2 實驗方法20-29
• 2.2.1 實驗試劑配制20-22
• 2.2.2 脂質(zhì)體制備22-24
• 2.2.3 順鉑高效液相檢測方法（HPLC）建立24
• 2.2.4 順鉑脂質(zhì)體表征測定24-25
• 2.2.5 順鉑脂質(zhì)體對Hela細(xì)胞體外實驗25-28
• 2.2.6 統(tǒng)計學(xué)處理28-29
• 第3章 實驗結(jié)果29-55
• 3.1 順鉑標(biāo)準(zhǔn)曲線29-30
• 3.2 專屬性考察30-31
• 3.3 順鉑脂質(zhì)體表征31-35
• 3.4 順鉑脂質(zhì)體體外穩(wěn)定性35-37
• 3.5 體外細(xì)胞毒性實驗37-44
• 3.6 體外細(xì)胞攝入實驗44-47
• 3.7 競爭性抑制實驗47
• 3.8 細(xì)胞攝入機(jī)制實驗47-50
• 3.9 體內(nèi)靶向性實驗50-53
• 3.10 體內(nèi)抗腫瘤實驗53-55
• 第4章 結(jié)果分析與討論55-57
• 第5章 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-65
• 致謝65-66

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本文編號：282719