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２０９４

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?綜述與講座?

總黃酮類化合物含量測定方法和藥理作用研究進展
田永利 許志宇 葛林劉娜

【關(guān)鍵詞】 總黃酮；藥理作用；含量測定 【中圖分類號】 Ｒ ６５６．２ 【文獻標識碼】

Ａ

【文章編號】

１００２—７３８６（２０１０）１５—２０９４—０３

總黃酮類化合物是廣泛地存在于植物中的一類化合物，目 前已有近萬種總黃酮被鑒定，植物經(jīng)光合作用產(chǎn)生的一大類低
分子量天然物質(zhì)，在蔬菜、作物、水果等植物中均有分布，此類 化合物具有具有保護心腦血管、利膽保肝、清除自由基、抗氧 化、抗癌、抗菌、抗過敏、抗炎癥、抗病毒等多種生物活性及藥理

數(shù)分光光度法。 １．２色譜測定方法陳叢瑾等列綜述了黃酮類化合物含量的 色譜測定方法，包括薄層掃描法、高效液相色譜、超臨界流體色

譜等，旨在為黃酮類化合物的研究、開發(fā)、應用提供參考。
１．２．１

薄層掃描法（ＴＬＣＳ）：亦稱薄層光密度法（ＴＬＣ－Ｄｅｎｓｉ－

作用。不少總黃酮化合物同時還存在多種功效。
１

ｔｏｍｅｔｒｙ），是薄層色譜技術(shù)與光密度計和微型電子計算機結(jié)合 起來的一種新型儀器分析方法。樣品經(jīng)薄層分離后直接測定 或經(jīng)適當處理后使之顯色或產(chǎn)生熒光，在特定波長下用光度計

總黃酮含量測定

中藥成分復雜，總黃酮化合物生物活性及藥理作用顯著，
種類繁多，為了明確哪類中藥總黃酮含量較高，總黃酮含量測 定成為重要方法。選擇適當檢測方法測量總黃酮含量，有利于 提高藥物分析準確性。
１．１

測定其吸光度或熒光強度的方法。具有快速、簡便、專屬性好。
同時可測定多個樣品的特點，廣泛的應用在中藥及其制劑的 研究中，進行中藥的成分研究和含量測定。
１．２．２

紫外可見分光光度法嚴贊開…綜述了紫外分光光度法

高效液相色譜法（ＨＰｌ．Ｃ）：是在液相色譜的基礎上引入

測定植物中黃酮含量的方法．重點介紹了單波長法、差示法、雙

氣相色譜的理論和技術(shù)，并加以改進而發(fā)展起來的一種重要的 分離分析方法。具有分離效能高，分析速度快，靈敏度高等特 點。電化學檢測器提高了高效液相的檢測的靈敏度和準確度， 而且可以連續(xù)檢測中藥中的多種總黃酮成分。 １．２．３超臨界流體色譜法（ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ
ｆｌｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，

波長法、三波長法、導數(shù)法等紫外分光光度法測定黃酮類化合
物含量的原理及分析特性。
１．１．１

紫外可見分光光度法：是以分子吸收光譜為基礎的紫

外一可見分光光度法，利用某些物質(zhì)的分子在峰帶Ｉ（３００—
４００

ｎｍ）和峰帶ＩＩ（２２０—２８０ ｔｉｍ）光譜區(qū)的吸光度來進行分析

ＳＦＣ法）：近年來出現(xiàn)的一種新方法，在分析領(lǐng)域得到應用，該 法在國際上發(fā)展很快，但在我國還處于探索階段。 １．３毛細管電泳法是以電場驅(qū)動離子或荷電粒子，在毛細

測定的方法。具有簡便、適用性廣、準確度、精密度和重現(xiàn)性較 好等特點，在總黃酮含量分析中發(fā)揮著重要作用。

１．１．２比色法：是一些藥典最常用的總黃酮含量檢測方法，它
主要以Ａ１（Ｎ０３）３為顯色劑，在堿性條件下，利用其與總黃酮 形成紅色螯合物為特征。常用于總黃酮類化合物含量測定的 金屬鹽試劑有Ａ１（Ｎ０３）３、ＡＩＣｌ３等。

管中按其淌度或分配系數(shù)不同進行高效、快速的電泳分離新技
術(shù)。常用的方法主要有毛細管區(qū)帶電泳（ＣＺＥ）、膠束電動力學 毛細管色譜（ＭＥＫＣ）、毛細管凝膠電（ＣＧＥ）、毛細管等速電泳 （ＣＩＴＰ）等。操作模式中特別是ＣＺＥ和ＭＥＫＣ都能很好的用于 中藥成分含量分析。具有柱效高、分離速率快、樣品用量少，適 用于“臟樣品”分析等特點。

１．１．３差示分光光度法簡稱△Ａ法：使用稍高于樣品或稍低
于樣品的標準作參比，測量樣品和參比間的相對吸光度。而

此相對吸光度又與樣品和參比間的濃度差成比例關(guān)系。借差
示工作曲線而求出樣品的含量。

１．４熒光分光光度法利用黃酮類化合物與某些金屬離子的
絡合物在紫外線照射下可產(chǎn)生熒光，在一定條件下，熒光強度 與該物質(zhì)的濃度成正比的性質(zhì)可建立黃酮類化合物的熒光光 度法�？傸S酮化合物的熒光光度測定法尚不多見，桑色素用于 鈹?shù)臒晒夤舛葴y定有很高靈敏度，常被用作黃酮類化合物熒光

１．１．４雙波長和導數(shù)分光光度法：用于測定吸收光譜曲線重
達的混合物的含量而不須用解聯(lián)立方程，還可分析高濃度及混 濁樣品，其靈敏度和準確度比普通分光光度法好。在選擇波長 時，原則上除了要干擾物有相等吸光度外，還要求兩波長比較 接近，被測組分在該兩波長處的摩爾吸收系數(shù)相差大些，這樣 方法的靈敏度會更高。如果將上述雙波長分光光度計上兩個 波長盡可能指近，使只相差１～２ ｎｍ，并且同時進行掃瞄，能得 到試樣一階導數(shù)吸收光譜．吸光度對波長的變化率曲線，即導

光度測定法的標準∞Ｉ。隨著學科的深人發(fā)展，共振散射光譜
法、單掃示波極譜法也逐漸應用于總黃酮的含量測定。 ２藥理作用
２．１

鎮(zhèn)痛作用趙鐵華等Ｈ。研究結(jié)果顯示灌胃、腹腔注射、皮

下注射適宜劑量的黃芩莖葉總黃酮，對實驗動物經(jīng)化學和熱
刺激導致的疼痛反應皆有一定的抑制作用，其鎮(zhèn)痛作用機制 與中樞作用相關(guān)。銀杏總黃酮（ＴＦＧ）腹腔內(nèi)注射可顯著抑制

作者單位：０６３０００河北省唐山市中醫(yī)院骨科

萬方數(shù)據(jù)

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甲醛致小鼠疼痛反應，延長小鼠舔足潛伏期并減少小鼠扭體
反應數(shù)。 ２．２對心血管系統(tǒng)的作用 ２．２．１對抗心肌損傷的保護作用：李樂等ｐ１研究發(fā)現(xiàn)絞股藍 自由基和抑制脂質(zhì)過氧化過程¨“。苦菜總黃酮對四氯化碳、 乙醇所致肝損傷有明顯保護作用，提示可能與苦菜總黃酮減 少肝臟谷胱甘肽耗竭，抑制肝脂質(zhì)過氧化作用有關(guān)。 ２．５抗氧化、清除氧自由基作用

黃欣等¨２１研究發(fā)現(xiàn)枸杞總

總黃酮能減輕犬心肌梗死時的心肌缺血程度，降低缺血范圍和
心肌酶學指標的活性，可保護缺血心肌。廣棗總黃酮（ＴＦＣＡ） 對阿霉素（ＡＤＲ）引起大鼠心肌過氧化損傷具有保護作用。水 杉總黃酮可在不明顯降低血壓的情況下，防止腎性高血壓大鼠 左心室肥厚的發(fā)生。銀杏葉總黃酮對大鼠心肌缺血再灌注血 管內(nèi)皮損傷有保護作用，對抗心肌缺血所引起的心肌電生理的 變化，從而預防心肌缺血所致的心律失常的發(fā)生。蒲黃總黃酮

黃酮能明顯延長小鼠力竭游泳運動時間，抑制丙二醛的產(chǎn)生及 提高小鼠體內(nèi)抗氧化酶活性，說明枸杞總黃酮具有提高小鼠運 動耐力及清除活性氧的作用。苦養(yǎng)麥麩皮類黃酮與天然超氧 化物歧化酶在清除氧自由基方面有著相同的作用一枝蒿總黃 酮對的作用表現(xiàn)高濃度清除，低濃度增強的雙向作用；對（? ＯＨ）自由基的作用始終表現(xiàn)為濃度依賴性地清除作用，而且 清除作用很強１１“。另有研究發(fā)現(xiàn)竹葉的總黃酮含量及其清除 活性氧自由基的能力均與銀杏葉具有可比性。黃芪總黃酮在 實驗中對（?ＯＨ）及（０２）均有較強的清除作用，且清除能力 與濃度呈明顯的顯效關(guān)系。 ２．６抗腫瘤作用黃酮類化合物抗腫瘤作用的靶點包括細胞 周期蛋白依賴性激酶、硫氧還蛋白還原酶、基質(zhì)金屬蛋白酶、絲 裂原激活的蛋白激酶等。腫瘤細胞凋亡研究依據(jù)：（１）黃酮類 化合物抑制細胞增殖，主要是使細胞周期停止，對腫瘤細胞有 細胞毒作用，而對正常細胞無毒性和致突變作用，反而有抗氧 化和正向的免疫調(diào)節(jié)作用；（２）黃酮類化合物促迸腫瘤細胞凋 亡；（３）黃酮類化合物能抑制細胞信號轉(zhuǎn)導過程中的酪氨酸蛋 白激酶、蛋白激酶ｃ、磷脂酰肌醇３激酶活性；（４）黃酮類化合 物具有抗炎、抗氧化壓力和促進抑癌基因表達而抑制癌基因表 達的作用。漢黃芩素是從中藥黃芩中提取分離得到的一個化 合物，研究表明其能促進鬼臼毒甙誘導的ＨＩ上６０、Ｊｕｒｋａｔ和肺癌 細胞的凋亡。芫花根總黃酮對小鼠Ｓ１８０腫瘤生長有顯著的抑 制作用，其抗腫瘤活性是通過選擇性殺死腫瘤細胞和提高外周

對實驗性心肌缺血犬心肌具有保護作用Ｍ１。黃蜀葵花總黃酮
藥理性預適應可通過抑制心肌脂質(zhì)過氧化、抑制心肌炎癥反 應，對缺血；再灌注損傷的心肌具有保護作用；顯著降低心腦組 織中丙二醛和ＮＯ含量，提示黃蜀葵花總黃酮對心腦缺氧有顯 著保護作用；對小鼠急性心肌缺血、缺氧損傷具有保護作用¨』。

２．２．２抗心率失常作用：苦參總黃酮能明顯對抗烏頭堿、哇巴
因及氯仿誘發(fā)的心率失常。黃芩莖葉總黃酮對實驗性心率失 常有顯著拮抗作用。 ２．２．３降血脂：銀杏葉總黃酮具有降低甘油三酯和膽固醇，升 高高密度脂蛋白膽固醇和降低低密度膽固醇的作用。抗動脈 粥樣硬化作用實驗顯示麥胚總黃酮類提取物（ＦＥＷＧ）能顯著 提高實驗性高脂血癥大鼠血高密度脂蛋白膽固醇含量，同時顯 著降低血清總膽固醇和三酰甘油含量怕Ｊ。蕎麥種子總黃酮能 抑制喂飼固醇和高脂食物大鼠血清總膽固醇和三酰甘油的升 高，抑制肝臟脂質(zhì)過氧化。山楂總黃酮對氧化型低密度脂蛋白 （ｏｘＬＤＬ）誘導的人內(nèi)皮細胞損傷具有顯著的拮抗作用，對氧化 型低密度脂蛋白促ＭＣ．ＥＣ黏附作用有顯著的抑制性，降低動 脈粥樣硬化發(fā)生的危險性，起到預防動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的 作用。 ２．２．４抗高血壓、血管壁擴張作用：銀杏葉總黃酮其對血管緊 張素轉(zhuǎn)化酶活性具有明顯的抑制作用。并對輕、中、重度妊娠 高血壓患者的血壓均有下降，內(nèi)皮素活性及ＮＯ含量降低，尿 蛋白減少‘”。淫羊藿總黃酮對大鼠血清中內(nèi)皮素有抑制作用， 一氧化碳含量明顯降低，提示淫羊藿總黃酮擴張血管。 ２．３抗凝血作用銀杏黃酮、蚓激素酶均具有很好的抗凝作

血淋巴細胞數(shù)量、促進淋巴細胞的增殖和提高ＮＫ細胞的殺傷
活性來實現(xiàn)的¨“。木犀草素具有很強的誘導肝癌細胞凋亡 活性。 ２．７對腦血管疾病的作用 李曉紅等¨刮銀杏葉總黃酮對局

部缺血再灌注腦組織中ＮＲｌ ｍＲＮＡ的表達增強，與細胞凋亡密 切相關(guān)，銀杏葉制劑可以明顯抑制ＮＲｌｍＲＮＡ的表達，減輕細 胞凋亡。文繼月等¨刮黃蜀葵花總黃酮預處理對大鼠腦缺血再 灌注損傷具有缺血預適應樣的保護作用；其機制可能與促進 ＮＯ合成及抑制前列腺素Ｅ：產(chǎn)生有關(guān)。山楂葉總黃酮可抑制

用，但凝激酶溶栓效果優(yōu)于銀杏黃酮，兩者合用后溶血作用無
加強，但具有較好的抗凝效果一‘。水杉總黃酮有抗血小板聚集 活性，改善血液流變性的作用，穿心蓮黃酮可明顯抑制二磷酸

腦缺血再灌注后神經(jīng)細胞凋亡，其機制可能與抑制線粒體細胞
色素Ｃ通路的凋亡有關(guān)¨ｊ。 ２．８其他
２．８．１

腺苷，花生四烯酸和腎上腺素誘導的血小板聚集，明顯降低凝 血酶誘導的ＧＭＰ一１４０水平，抑制ＡＡ誘導的血小板ＴＸＢ２的釋
放，并可明顯升高血小板內(nèi)ｃＡＭＰ的含量。

對神經(jīng)系統(tǒng)的作用：黃酮對Ｍ一膽堿能抑制樟柳堿所致

小鼠腦記憶獲得障礙、蛋白生物合成抑制劑環(huán)己酰亞胺致小鼠 腦記憶鞏固障礙、中樞抑制劑乙醇致小鼠腦記憶再現(xiàn)障礙、小 鼠腦缺血再灌注致學習記憶功能障礙，均有明顯的改善作用， 能顯著提高小鼠的近期記憶和長期記憶功能。

２．４利膽及肝臟保護作用各種黃酮類化合物對化學性肝損 傷、藥物性肝損傷、免疫性肝損傷、酒精性肝損傷、缺血／再灌注 性肝損傷等實驗性肝損傷均有不同程度的保護作用¨…。知母
總黃酮對溴酸鉀誘發(fā)的小鼠肝損傷具有一定的保護作用，可

２．８．２延緩衰老作用：淫羊藿總黃酮對于皮質(zhì)酮大鼠Ｔ細胞
過度凋亡均有明顯下調(diào)作用，并能對促凋亡及抗凋亡基因群 進行適度地調(diào)控。蜂膠黃酮既能明顯提高腦組織抗氧化酶的 活性，又同時顯著降低腦組織ＮＯ含量，提示蜂膠黃酮可以抑

以明顯降低因溴酸鉀引起的小鼠血漿丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平，
保護因溴酸鉀誘發(fā)的肝損傷其作用機制可能部分來自于清除

萬方數(shù)據(jù)

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制ＮＯ的細胞毒作用，達到延緩衰老之目的。 ２．８．３對骨科方面的作用：淫羊藿總黃酮具有促進體外成骨 細胞增殖及分化成熟的作用，還可提高去勢大鼠骨密度，對骨 質(zhì)疏松起防治作用。杜仲總黃酮能直接促進體外成骨細胞的 增殖。野菊花總黃酮可恢復大鼠滑膜細胞具分泌功能細胞器 形態(tài)，降低滑膜細胞分泌炎性介質(zhì)的功能。 ２．８．４對免疫方面的作用：淫羊藿總黃酮對免疫功能低下小 鼠有良好免疫促進作用。黃芩莖葉總黃酮對小鼠的特異性和 非特異性免疫功能皆有一定的影響。 ２．８．５改善。腎功能作用：黃蜀葵花抑制腎內(nèi)髓ＡＴＰ酶活性，從 而減少腎小管對鈉的重吸收，發(fā)揮利鈉利水效應。 ２．８．６抗乙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂｖｉｒｕｓ，ＨＢＶ）作用：黃蜀葵 花總黃酮中提取的金絲桃苷在體內(nèi)外均有抗ＨＢＶ的作用，且 呈劑量依賴性。 ２．８．７修復口腔黏膜作用：黃蜀葵花中的多種黃酮類成分具 有抑菌、鎮(zhèn)痛及抗炎消腫的作用，能治療口腔潰瘍，對疼痛也有 較好的緩解作用。沙棘葉總黃酮對細菌有較強的抑制作用， 在相同時間內(nèi)，總黃酮提取液的濃度越大，抑菌率越大。同一 濃度的沙棘葉總黃酮的作用時間越長，其抑菌率也越大【１…。 參考文獻
Ｉ １

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３

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馬陶陶，張群林，李�。兴幙傸S酮的含量測定方法．安徽醫(yī)藥，
２００７．１１：１０３０—１０３２．

（收稿日期：２０１０—０３—１６）

?綜述與講座?

Ｔｈｌ ７細胞與肝臟疾病
宋勝斌魏峰周俊英
【關(guān)鍵詞】Ｔｈｌ７細胞；白介素．１７；白介素－２２；白介素一６；肝疾病 Ｒ ５７５ 【中圖分類號】 【文獻標識碼】Ａ 【文章編號】

１００２—７３８６（２０１０）１５—２０９６—０４

Ｔｈｌ７細胞是一類獨立于Ｔｈｌ（Ｔ

ｈｅｌｐｅｒ

ｔｙｐｅ

１）、Ｔｈ２的

中的作用作一綜述。
１

ｃＤ；Ｔｈ細胞亞群，在其分化過程中需要自細胞介素６（ｉｎｔｅｒｌｅｕ—
ｋｉｎ

Ｔｈｌ７細胞概述 ＣＤ；Ｔ細胞根據(jù)其產(chǎn)生的細胞因子及生物學功能分為兩

６，ＩＬ－６）和轉(zhuǎn)化生長因子１３（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ

ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ

Ｂ，
ｒｅ－

ＴＧＦ－Ｂ）、ＩＩ．－２３、轉(zhuǎn)錄因子ＲＯＲ一７ｔ（ｏｒｐｈａｎ ｃｅｐｔｏｒ?＿ｙｔ）及ＳＴＡ乃（ｓｉｇｎａｌ

ｎｕｃｌｅａｒ ｈｏｒｍｏｎｅ

種不同的細胞亞群，以分泌ＩＬ－２、干擾素１（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ＇ｙ．ＩＦＮ．．ｙ） 為特征的稱為１＇１１１細胞，以分泌ＩＬ－４、ＩＬ－５為特征的稱為Ｔｈ２ 細胞。Ｔｈｌ細胞主要產(chǎn)生Ｔｈｌ類細胞因子ＩＬ－２、腫瘤壞死因子． ｐ（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓ
ｆａｃｔｏｒ

ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ

３）參與。目前研究發(fā)現(xiàn)Ｔｈｌ７細胞分泌的ＩＬ．１７、ＩＬ－６、ＩＬ０２２等 細胞因子參與肝臟損傷及再生過程，在脂肪肝、自身免疫性肝 病及肝臟腫瘤中發(fā)揮重要作用，本文就Ｔｈｌ７細胞在肝臟疾病

ｐ，ＴＮＦ?Ｂ）、ＩＦＮ一１，可引起遲發(fā)型超敏反

應，活化巨噬細胞及有效的清除細胞內(nèi)的病原體。Ｔｈ２細胞主 要產(chǎn)生ＩＬ－４、１Ｌ－５、ＩＬ－６、ＩＬ一１０、ＩＬ一１３，對ＩｇＥ的產(chǎn)生、嗜酸性炎癥

作者單位：０６３１０２河北省唐山市，開灤醫(yī)療集團范各莊醫(yī)院神經(jīng) 內(nèi)科（宋勝斌）；河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院（魏峰、周俊英） 通訊作者：周俊英，０５００５１ 河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院感染科；

反應及寄生蟲感染的清除尤為重要。Ｔｈｌ７細胞的發(fā)現(xiàn)源于自 身免疫性疾病機制的研究。Ｔｈｌ細胞功能失調(diào)可引起嚴重的 炎癥反應并誘發(fā)多種自身免疫性疾病。但是，ＩＦＮ．．ｙ或１ＦＮ．．ｙ 受體缺乏小鼠雖然沒有ＩＦＮ－１信號，仍可發(fā)生自身免疫性疾

Ｅ—ｍａｉｌ：ｓａｒｓＩ ５６＠ｓｏｈｕ．ｃｏｒｎ

萬方數(shù)據(jù)



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