本文關鍵詞：胃漂浮海藻酸鈣緩釋微球體內外研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《西北農林科技大學》 2006年

提高破傷風類毒素免疫原性的初步研究

蔣會婷  

【摘要】： 破傷風梭菌產生的破傷風毒素,經0.4%甲醛滅活后,失去毒性而仍保留抗原性稱之為破傷風類毒素。類毒素精制后,可作為疫苗對人和動物進行免疫接種。但機體感染后不能獲得終身免疫力,且此免疫程序較長。為了減輕接種的副反應,提高免疫效果,減少注射次數,提高接種覆蓋率,本研究采用原核細胞表達具有高免疫原性的重組C蛋白,用于生產疫苗及免疫接種,以避免出現副作用;另外,用雙功能交聯劑戊二醛聚合破傷風毒素,使毒素分子之間進行交聯,從而產生分子量較大的,表面決定簇多的聚合類毒素。該類毒素作為免疫的抗原,可以誘發(fā)較高的抗體水平,加強免疫記憶,延長保護機體免受破傷風的侵害的時間。 1.利用PCR技術從破傷風梭菌基因組DNA中擴增出1 356 bp的破傷風毒素C基因,將該基因片段插入到表達載體pET32a(+)中,轉化宿主菌BL21(DE3)中,用IPTG誘導表達,觀察各種條件下對重組菌蛋白表達的影響。對重組后蛋白用Ni-NAT親和層析的技術純化C融合蛋白,然后進行小鼠免疫實驗并測定效價。研究顯示:經SDS-PAGE分析,重組破傷風毒素C蛋白(rTTC)的表達量占可溶性蛋白的28.19%,純化后得到蛋白純度為96.92%。免疫印跡證實該重組蛋白是破傷風毒素C蛋白抗原,對小鼠免疫,三免后14 d rTTC組小鼠抗體效價仍能達到1∶16 000。所獲得的重組蛋白具有良好的免疫原性。 2.經過厭氧培養(yǎng)的破傷風梭菌,產毒后進行脫毒、精制,在產毒期間進行毒力鑒定、解毒和毒性逆轉實驗。再由戊二醛聚合破傷風類毒素,經不同的聚合條件的優(yōu)化,進行分子量和Lf的測定,然后免疫小鼠和兔子,并測定其免疫效價。培養(yǎng)的毒素可以作為制備類毒素使用,脫毒精制后的類毒素,經毒力鑒定試驗、解毒試驗和毒性逆轉試驗檢測后均合格。用pH 7.2的PBS稀釋類毒素,終濃度為0.1%、0.3%戊二醛置于室溫中聚合稀釋后的類毒素12 h,聚合類毒素中聚合的類毒素分子量為600 ku,含量占聚合物的43.82%,經ELISA檢測抗原性,抗原與陽性血清呈陽性反應。免疫小鼠和兔子,平均效價在1∶2 0 000～1∶3 0 000。所得到的聚合類毒素具有抗原性及免疫原性。 3.最后將聚合類毒素和未聚合類毒素分別與重組抗原聯合免疫馬匹,未聚合類毒素的平均效價明顯低于聚合類毒素組別,說明在聯合免疫后,聚合類毒素可以提高馬匹的血清效價。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：西北農林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：S852.5
【目錄】：

摘要4-5

ABSTRACT5-9

文獻綜述9-17

第一章 破傷風類毒素的研究進展9-17

1.1 破傷風梭菌的生物學特性9

1.2 破傷風毒素的致病機理9-11

1.3 破傷風的危害與防控措施11

1.4 傳統破傷風疫苗的研究進展11-12

1.5 類毒素疫苗的應用現狀12-17

試驗研究17-58

第二章 破傷風毒素C 基因的克隆、表達和純化17-36

2.1 材料17-19

2.2 方法19-28

2.3 結果28-34

2.4 討論34-36

第三章 聚合破傷風類毒素的制備及免疫原性的初步研究36-54

3.1 材料36-37

3.2 方法37-45

3.3 結果45-52

3.4 討論52-54

第四章 重組蛋白與破傷風聚合類毒素聯合免疫54-58

4.1 材料54

4.2 方法54-55

4.3 結果55-56

4.4 討論56-58

結論58-59

參考文獻59-64

附錄64-65

致謝65-66

個人簡歷66

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