本文關(guān)鍵詞： 模擬微重力 lncRNA UVC 創(chuàng)傷修復(fù) 基因芯片　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景和目的隨著載人航天工程的飛速發(fā)展,越來越多的宇航員相繼進(jìn)入太空,并且在太空駐留時(shí)間不斷延長,艙外活動(dòng)日趨增多,宇航員發(fā)生意外創(chuàng)傷和應(yīng)激損傷的幾率相應(yīng)增多。據(jù)研究報(bào)道,長期航天飛行過程中最常見的創(chuàng)傷為皮膚軟組織傷。皮膚創(chuàng)傷的愈合過程是一個(gè)復(fù)雜而有序的生物學(xué)過程,涉及多種細(xì)胞、細(xì)胞因子和細(xì)胞外基質(zhì)等錯(cuò)綜復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)作用。長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA,lnc RNA)在表觀遺傳調(diào)控、轉(zhuǎn)錄調(diào)控以及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控等方面發(fā)揮重要作用。本實(shí)驗(yàn)研究RCCS模擬微重力對小鼠成纖維細(xì)胞lnc RNA表達(dá)的影響,并探討微重力條件下短波紫外線(ultraviolet C radiation,UVC)輻射對成纖維細(xì)胞創(chuàng)傷修復(fù)相關(guān)基因蛋白表達(dá)的作用特點(diǎn),為失重環(huán)境中宇航員皮膚軟組織創(chuàng)傷及愈合的處置提供理論依據(jù)。研究方法(1)采用RCCS技術(shù)建立模擬微重力培養(yǎng)體系,購置小鼠成纖維細(xì)胞L929細(xì)胞株,將其隨機(jī)分為模擬微重力組(microgravity group,MG)和正常重力對照組(normal gravity group,NG)。采用基因芯片(Agilent Mouse lnc RNA,4×180K,Design ID:049801)及高通量測序技術(shù),檢測小鼠成纖維細(xì)胞lnc RNA表達(dá)譜變化。將lnc RNA表達(dá)變化倍數(shù)與正常對照組比較在2倍以上并有顯著差異(P0.05)的lnc RNA確定為差異性表達(dá)lnc RNA。(2)針對課題第一部分獲取的238個(gè)模擬微重力環(huán)境中L929細(xì)胞差異性表達(dá)lnc RNA進(jìn)行Cis-/Trans-靶基因GO分析和Pathway分析、lnc RNAm RNA共表達(dá)分析、以及l(fā)nc RNA功能預(yù)測。(3)將L929細(xì)胞隨機(jī)分為模擬微重力組(microgravity group,MG)、正常重力對照組(normal gravity group,NG)、微重力+UVC組(microgravity group+UVC,MG+UVC)、正常重力+UVC組(normal gravity group+UVC,NG+UVC),分別培養(yǎng)4 d,照射組細(xì)胞用140μW/cm~2劑量UVC照射214 s,總劑量為30 m J,隨即置原培養(yǎng)器中培養(yǎng),24 h后收集細(xì)胞,應(yīng)用q RT-PCR和BCA蛋白定量法測定Caspase-3、Bcl-2、Col-I、Col-Ⅲ及TGF-β的基因和蛋白濃度。結(jié)果(1)研究發(fā)現(xiàn),小鼠成纖維細(xì)胞L929在RCCS模擬微重力環(huán)境下,共有238條差異表達(dá)的lnc RNA,其中134條表達(dá)上調(diào),104條表達(dá)下調(diào);差異表達(dá)的m RNA共有237條,其中53條表達(dá)上調(diào),184條表達(dá)下調(diào)。(2)對模擬微重力環(huán)境中L929細(xì)胞差異性表達(dá)lnc RNA進(jìn)行GO分析,顯示與巨噬細(xì)胞分化的負(fù)性調(diào)節(jié)、傷口愈合的負(fù)性調(diào)節(jié)、細(xì)胞連接形成、角質(zhì)細(xì)胞分化調(diào)節(jié)等生物學(xué)過程相關(guān);Pathway分析顯示與TGF-β信號通路、維生素消化與吸收、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等信號通路相關(guān);lnc RNA與轉(zhuǎn)錄因子關(guān)聯(lián)性分析發(fā)現(xiàn),lnc RNA FR382640與轉(zhuǎn)錄因子Smad4富集顯著性較高,其共表達(dá)的基因數(shù)目為1172個(gè),lnc RNA ENSMUST00000122952與轉(zhuǎn)錄因子MAF和MAFB的富集顯著性較高,共表達(dá)基因數(shù)目達(dá)859個(gè);功能預(yù)測分析結(jié)果表明,lnc RNA FR148417對細(xì)胞骨架中的微管組件形成、細(xì)胞內(nèi)吞作用、組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶結(jié)合、調(diào)節(jié)蛋白激酶B信號通路等生物學(xué)過程中發(fā)揮一定作用,lnc RNA FR318458與傷口愈合負(fù)性調(diào)節(jié)、皮脂腺發(fā)育、蛋白多糖結(jié)合等多種生物學(xué)過程相關(guān)。(3)在模擬微重力條件下受到UVC照射后,L929細(xì)胞的Caspase-3基因表達(dá)上調(diào),而Caspase-3蛋白表達(dá)明顯下調(diào);Bcl-2蛋白與Bcl-2基因則呈現(xiàn)同步上調(diào)現(xiàn)象;Col-I m RNA表達(dá)上調(diào),而Col-I蛋白表達(dá)有所下降,但依然明顯高于正常重力條件下無論是否受到UVC照射的Col-I蛋白表達(dá);Col-Ⅲ蛋白和基因總體上呈現(xiàn)受抑制狀態(tài);TGF-βm RNA和蛋白的表達(dá)情況與Col-Ⅲ極為類似。結(jié)論小鼠成纖維細(xì)胞的lnc RNA表達(dá)活躍,RCCS模擬微重力環(huán)境顯著影響L929細(xì)胞的lnc RNA表達(dá)譜;Agilent Mouse lnc RNA基因芯片技術(shù)對L929細(xì)胞差異表達(dá)基因具有良好的高通量篩選效率;L929細(xì)胞對RCCS模擬微重力環(huán)境產(chǎn)生明顯應(yīng)激反應(yīng),UVC照射對正常重力和模擬微重力條件下L929細(xì)胞的凋亡過程和細(xì)胞外基質(zhì)形成產(chǎn)生明顯不同的效應(yīng)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R85

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 趙磊;郭yNyN;宓東;孫野青;;模擬載人探月中航天員空間輻射風(fēng)險(xiǎn)評估[J];航天器環(huán)境工程;2016年06期

2 關(guān)陽陽;肖明揚(yáng);潘亮;薛萍;張國培;逯曉波;;應(yīng)用轉(zhuǎn)染細(xì)胞研究ERCC2/XPD基因多態(tài)與短波紫外線所致DNA損傷修復(fù)的關(guān)聯(lián)[J];中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2016年12期

3 施歌;王婷婷;張滿鳳;廖培羽;黎世杰;李文;蔡曉琳;朱坤舉;;短波紫外線照射對皮脂腺細(xì)胞皮脂分泌的影響[J];廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2016年04期

4 李雨霏;付曉艷;周立艷;徐冰心;司少艷;周金蓮;楊鶴鳴;李成林;崔彥;;模擬微重力環(huán)境對小鼠成纖維細(xì)胞增殖和創(chuàng)傷修復(fù)相關(guān)蛋白基因表達(dá)的影響[J];解放軍醫(yī)藥雜志;2016年07期

5 高景;焦虎;曹蕊;楊志崗;孫雪健;莊強(qiáng);肖苒;嚴(yán)笠;;雷帕霉素誘導(dǎo)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞自噬的作用及機(jī)制[J];中華整形外科雜志;2016年03期

6 崔宏偉;蘇秀蘭;;長鏈非編碼RNA在腫瘤中的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2016年04期

7 張飛飛;沈南;唐元家;;LncRNA NEAT1參與TLR2介導(dǎo)的炎癥因子的表達(dá)[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2015年04期

8 李雨霏;孫宏偉;崔彥;;失重環(huán)境中創(chuàng)傷和應(yīng)激損傷與修復(fù)的研究進(jìn)展[J];解放軍醫(yī)藥雜志;2015年06期

9 章杰;李文芳;王芳;楊紅華;萬蕓;劉偉;;長鏈非編碼RNA H19對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖的影響[J];實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床;2013年09期

10 李瑩輝;曲麗娜;陳海龍;;航天應(yīng)激損傷與防護(hù)措施[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2013年05期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 李燁;長鏈非編碼RNA CACNA1G-AS1在瘢痕疙瘩中的功能探究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 胡邇晗;let-7e影響內(nèi)皮細(xì)胞功能的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控分析[D];山東大學(xué);2016年

，

本文編號：1485575