發(fā)布時間：2017-11-03 02:10

  本文關鍵詞：芥子氣損傷體內診斷生物標志物檢測技術的研究芥子氣—谷胱甘肽加合物

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【摘要】： 芥子氣即二氯二乙基硫醚,被稱為“毒劑之王”,曾經在兩次世界大戰(zhàn)和兩伊戰(zhàn)爭中使用,同時也是化學恐怖活動的主要威脅手段之一。在應對芥子氣引起的化學恐怖襲擊和突發(fā)化學應急事件時,對其進行快速、準確可靠的偵檢是一切救援行動的關鍵。因此,芥子氣中毒人員體內診斷標志物分離檢測技術的研究一直是軍事分析化學家關注的熱點問題。 芥子氣屬于糜爛性毒劑,可通過皮膚、呼吸道、口腔和粘膜等多種途徑使人染毒,是一種細胞毒劑,其進入體內后,可與DNA、蛋白質等生物大分子結合。其中約有50%的芥子氣是與谷胱甘肽結合,生成無毒的代謝物后排出體外。因此,芥子氣-谷胱甘肽加合物的β裂解產物具有芥子氣中毒的特異性。對此類化合物進行的檢測技術的研究,將有助于對芥子氣暴露人員的診斷和治療工作的及時開展。 本論文采用GC-MS等現(xiàn)代儀器分析技術,建立了芥子氣-谷胱甘肽加合物的β裂解產物的分析檢測方法。全文共分為五章。 第一章是前言部分。簡要介紹了芥子氣的中毒機制和體內代謝特點;論述了關于芥子氣-谷胱甘肽加合物的各種產物的檢測在芥子氣核查中的重要意義,并在此基礎上提出論文的研究目的和內容。 第二章則是1,1’-二磺�；伊蛎�(SBMTE)標準品的制備及鑒定部分。通過對合成條件的優(yōu)化,合成了目標化合物。應用柱層析和重結晶法對粗產物進行純化,最終得到純度為98.9%的SBMTE。經質譜和核磁共振進行結構鑒定,確證化合物為SBMTE。 第三章應用GC-FPD和GC-FID對染毒尿樣中的SBMTE進行檢測,比較不同萃取方法的提取效率。尿樣濃縮后經GC-FPD檢測,檢出限為10ng/mL(尿樣50μL),可滿足芥子氣中度后1-3天患者尿樣的檢測。染毒尿樣經GC-FID檢測,SBMTE的線性范圍0.25-10μg/mL,r=0.9990。 在第四章中,我們建立了模擬尿樣中SBMTE的GC-MS定量分析方法。在比較液液萃取和固相萃取(SPE)法的提取效率后,選擇了能有效提取SBMTE的固相萃取法;然后考察了SPE柱類型、上樣溶液的pH和洗脫溶劑類型對回收率的影響,最終對HLB(親水親油型)SPE柱的提取條件進行了優(yōu)化。乙腈作為洗脫溶劑時,回收率較高。標準品SBMTE的線性范圍10-1000ng/mL,回歸方程為Y=0.0014X-0.02299,r=0.9993,檢出限為5ng/mL。 第五章則建立了染毒尿樣中SBMTE的GC-MS分析方法。針對實際生物樣品中大量蛋白對內標和目標化合物所產生的干擾,首先考慮了去除蛋白的操作步驟,但此過程復雜、費時,明顯降低了回收率。因此,我們對內標和質譜條件進行優(yōu)化,最終選取了適合的內標物,從而有效去除了空白尿樣的干擾。SBMTE的線性范圍為1-100ng/mL,r=0.9991,回收率為89.0%~92.6%,檢出限為0.5ng/mL(100μL尿樣)。
【關鍵詞】：芥子氣 谷胱甘肽 氣相色譜-質譜 固相萃取
【學位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R82
【目錄】：

• 英文縮寫7-8
• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 第一章 前言12-18
• 1.1 引言12-17
• 1.1.1 芥子氣中毒機制和代謝途徑12-13
• 1.1.2 芥子氣的檢測13-16
• 1.1.2.1 芥子氣原型13
• 1.1.2.2 芥子氣體內標志物13-16
• 1.1.3 芥子氣中毒的防治藥物16-17
• 1.2 本論文的研究目的和研究內容17-18
• 1.2.1 研究目的17
• 1.2.2 研究內容17-18
• 第二章 1,1’-磺酰基二(2-甲巰基)乙烷(SBMTE)標準品的制備18-24
• 2.1 引言18
• 2.2 實驗部分18-23
• 2.2.1 儀器和儀器條件18-19
• 2.2.2 試劑及溶液配制19
• 2.2.3 實驗方法19-20
• 2.2.3.1 芥子亞砜和芥子砜的合成[33]19
• 2.2.3.2 SBMTE 的合成19
• 2.2.3.3 SBMTE 的純化19-20
• 2.2.4 結果與討論20-23
• 2.2.4.1 SBMTE 標準品的合成與純化20-22
• 2.2.4.2 標準品的鑒定22-23
• 2.3 本章小結23-24
• 第三章 模擬尿樣和染毒尿樣中SBMTE 的GC-FPD、GC-FID 分析方法的建立24-30
• 3.1 引言24
• 3.2 實驗部分24-28
• 3.2.1 儀器和設備24-25
• 3.2.2 試劑及溶液配制25
• 3.2.3 實驗方法25-26
• 3.2.3.1 模擬尿樣和染毒尿樣的配制25
• 3.2.3.2 液液萃取法25
• 3.2.3.3 SPE 法25-26
• 3.2.3.4 SBMTE 標準曲線的制備26
• 3.2.3.5 染毒尿樣中SBMTE 標準曲線的制備26
• 3.2.4 結果與討論26-28
• 3.2.4.1 SBMTE 的標準曲線和檢出限26
• 3.2.4.2 液液萃取26-27
• 3.2.4.3 SPE 法27-28
• 3.2.4.4 染毒尿樣中SBMTE 的線性范圍和檢出限28
• 3.3 本章小結28-30
• 第四章 模擬尿樣中SBMTE 的GC-MS 分析方法的建立30-40
• 4.1 引言30-31
• 4.2 實驗部分31-38
• 4.2.1 儀器和設備31
• 4.2.2 試劑及溶液配制31
• 4.2.3 實驗方法31-33
• 4.2.3.1 內標物的選擇31
• 4.2.3.2 SBMTE 標準曲線的制備31-32
• 4.2.3.3 提取方法比較32-33
• 4.2.3.4 上樣pH 對不同提取方法回收率的影響33
• 4.2.4 結果與討論33-38
• 4.2.4.1 GC 條件的優(yōu)化33
• 4.2.4.2 SBMTE 穩(wěn)定性考察33-34
• 4.2.4.3 內標化合物的選擇34
• 4.2.4.4 提取方法的比較34-37
• 4.2.4.5 標準曲線和檢出限37-38
• 4.2.4.6 尿樣pH 值對提取效率的影響38
• 4.3 本章小結38-40
• 第五章 染毒尿樣中SBMTE 的GC-MS 分析方法的建立40-53
• 5.1 引言40
• 5.2 實驗部分40-52
• 5.2.1 儀器和設備40-41
• 5.2.2 試劑及溶液配制41
• 5.2.3 實驗方法41-42
• 5.2.3.1 內標物的選擇41
• 5.2.3.2 去除蛋白法41
• 5.2.3.3 提取方法的比較41-42
• 5.2.3.4 染毒尿樣SBMTE 標準曲線的制備42
• 5.2.3.5 SBMTE 的回收率和重現(xiàn)性42
• 5.2.3.6 中毒尿樣的處理方法42
• 5.2.4 結果與討論42-52
• 5.2.4.1 空白尿液的GC 分析42-43
• 5.2.4.2 去除蛋白對SBMTE 提取效率的影響43
• 5.2.4.3 內標物的選擇43-45
• 5.2.4.4 質譜條件的優(yōu)化45
• 5.2.4.5 提取方法的比較45-49
• 5.2.4.6 標準曲線和檢出限49
• 5.2.4.7 方法的回收率和精密度49-52
• 5.3 本章小結52-53
• 結語53-54
• 參考文獻54-56
• 碩士期間發(fā)表文章情況56-57
• 芥子氣損傷體內標志物及其檢測技術的研究進展57-72
• 個人簡歷72-73
• 致謝73

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