本文關(guān)鍵詞：Nrf2在大鼠肢體爆炸傷后短暫低溫肺保護(hù)中的作用及機(jī)制

  更多相關(guān)文章： Nrf2 全身短暫低溫 損傷局部短暫低溫 繼發(fā)肺損傷 內(nèi)源性保護(hù) 氧化損傷 炎癥反應(yīng) 肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞

【摘要】： 現(xiàn)代戰(zhàn)爭(zhēng)中肢體爆炸傷發(fā)生率高,且多存在血管、神經(jīng)和廣泛的軟組織損傷,是戰(zhàn)時(shí)創(chuàng)傷性截肢的主要原因。肢體爆炸傷由于其特殊的致傷機(jī)理,常導(dǎo)致全身免疫系統(tǒng)過度激活,進(jìn)而導(dǎo)致遠(yuǎn)隔器官損傷。其中,以肺損傷的發(fā)生率最高,且常常是多器官功能損害的先兆,因此減輕或預(yù)防肺損傷的發(fā)生成為改善肢體爆炸傷傷員預(yù)后的關(guān)鍵。 既往研究表明,控制性全身低溫可明顯減輕膿毒癥、內(nèi)毒素和缺血—再灌注等引起的肺損傷,但對(duì)于有活動(dòng)性出血的肢體爆炸傷而言,長(zhǎng)時(shí)間低溫可能導(dǎo)致致命性出血。近期研究發(fā)現(xiàn)對(duì)于急性肺損傷的救治,低溫維持時(shí)間并非越長(zhǎng)越好,相反短時(shí)間全身低溫(2h)肺保護(hù)作用優(yōu)于長(zhǎng)時(shí)間全身低溫(5h)。全身降溫30min也可明顯增強(qiáng)組織對(duì)缺血的耐受。另外,前期研究提示損傷局部短暫低溫可通過抑制全身失控性炎癥反應(yīng)和氧化損傷減輕肺和腸道屏障功能損害。因此,本研究擬通過制作肢體遠(yuǎn)端爆炸傷動(dòng)物模型,觀察全身短暫低溫和損傷局部短暫低溫對(duì)肺損傷的作用,并初步探討其機(jī)制。 內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制受損在創(chuàng)傷后臟器功能損害中的作用日益受到人們的關(guān)注。NF-E2相關(guān)因子(Nrf2)是決定細(xì)胞內(nèi)源性抗損傷能力的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子,具有抗氧化、抗炎等作用。最新研究發(fā)現(xiàn)Nrf2轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性增強(qiáng)在動(dòng)物冬眠時(shí)缺血缺氧的耐受過程中具有重要作用,提示控制性低溫可能是通過增強(qiáng)Nrf2轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性,進(jìn)而發(fā)揮保護(hù)效應(yīng)。但Nrf2在肢體爆炸傷后肺損傷及低溫臟器保護(hù)作用中的相關(guān)研究目前尚未見報(bào)道。 針對(duì)上述問題,本研究分為四個(gè)部分:①采用80mg DDNP紙質(zhì)點(diǎn)爆源緊貼大鼠左后肢下段引爆制作肢體爆炸傷動(dòng)物模型,觀察全身短暫低溫(30min)或損傷局部短暫低溫(30min)對(duì)肢體爆炸傷后肺損傷的作用。②全身短暫低溫或損傷局部短暫低溫對(duì)肢體爆炸傷后肺Nrf2轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性的影響。③培養(yǎng)肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞,通過給予肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞不同劑量的H2O2或TNFα,觀察Nrf2轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性的變化,初步探討全身短暫低溫和損傷局部短暫低溫是否通過減少肺自由基和炎癥因子的產(chǎn)生,進(jìn)而參與Nrf2轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性的調(diào)控。④采用RNAi技術(shù)阻斷肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞Nrf2表達(dá),研究Nrf2在抗炎癥損傷和抗氧化損傷中的作用;探討Nrf2在低溫肺保護(hù)中的作用。 主要結(jié)果結(jié)論如下: 1.大鼠肢體爆炸傷后早期可引起肺組織出現(xiàn)以炎癥損傷、氧化損傷、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和肺水腫為主要表現(xiàn)的繼發(fā)肺損傷早期改變;肺組織MDA含量和MPO活性明顯升高(p0.05),SOD活性明顯下降;肺組織TNFα、IL-6和IL-10水平均明顯升高(p0.01)。 2.全身短暫低溫或損傷局部短暫低溫可明顯減輕肢體爆炸傷后肺組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),肺水腫;降低肺組織MDA含量和MPO活性(p0.01),增高SOD活性;降低肺組織TNFα、IL-6和IL-10水平(p0.01)。說明全身短暫低溫或損傷局部短暫低溫可通過抑制氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng),減輕肢體爆炸傷后肺損傷。 3.肢體爆炸傷后肺Nrf2轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性增強(qiáng),全身短暫低溫或損傷局部短暫低溫可進(jìn)一步增強(qiáng)肺Nrf2的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性,但對(duì)肺Nrf2 mRNA表達(dá)水平?jīng)]有明顯影響,說明全身短暫低溫或損傷局部短暫低溫對(duì)肢體爆炸傷后肺Nrf2轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性的調(diào)控并非發(fā)生在基因轉(zhuǎn)錄水平。 4.采用不同劑量H2O2或TNFα處理肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞后,Nrf2轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性發(fā)生不同的改變:中、低劑量H2O2(0.125、0.25、0.5mM)或TNFα(2.5、5、10ng/ml)引起Nrf2轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性呈劑量依賴性升高,而高濃度H2O2(1、2mM)或TNFα(20、40ng/ml)引起Nrf2轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性下降。結(jié)合全身短暫低溫或損傷局部短暫低溫可明顯抑制肢體爆炸傷后肺組織氧化損傷和炎癥反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,我們認(rèn)為全身短暫低溫或損傷局部短暫低溫可能通過抑制肢體爆炸傷后肺自由基和炎癥因子的產(chǎn)生,從而增強(qiáng)Nrf2的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性。 5.采用RNAi技術(shù)阻斷肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞Nrf2的表達(dá)后,TNFα或H2O2引起肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞更為嚴(yán)重的炎癥損傷和氧化損傷:與野生對(duì)照細(xì)胞和轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的細(xì)胞比較,Nrf2表達(dá)下降的細(xì)胞凋亡率增高,LDH水平升高;MDA含量升高;IL-6水平升高,IL-10水平下降;GSH含量下降;且上述指標(biāo)的變化幅度與Nrf2表達(dá)受抑程度一致,說明Nrf2在細(xì)胞抗氧化損傷和炎癥損傷過程中具有重要作用,而氧化損傷和炎癥反應(yīng)恰好是引起肢體爆炸傷后肺損傷的重要原因,因此Nrf2轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性增強(qiáng)是全身短暫低溫或損傷局部短暫低溫減輕肢體爆炸傷后肺損傷的重要機(jī)制之一。全身短暫低溫或損傷局部短暫低溫通過增強(qiáng)肺Nrf2轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性,發(fā)揮長(zhǎng)時(shí)程保護(hù)作用,減輕肢體爆炸傷后肺損傷。
【關(guān)鍵詞】：Nrf2 全身短暫低溫 損傷局部短暫低溫 繼發(fā)肺損傷 內(nèi)源性保護(hù) 氧化損傷 炎癥反應(yīng) 肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R82
【目錄】：

• 英文縮略詞一覽表6-9
• 英文摘要9-12
• 中文摘要12-14
• 論文正文 Nrf2 在大鼠肢體爆炸傷后短暫低溫肺保護(hù)中的作用及機(jī)制14-117
• 前言14-16
• 第一部分 全身和損傷局部短暫低溫對(duì)肢體爆炸傷后肺損傷的保護(hù)作用16-38
• 實(shí)驗(yàn)一 大鼠肢體遠(yuǎn)端爆炸傷模型的建立16-28
• 材料和方法16-21
• 結(jié)果21-25
• 討論25-27
• 小結(jié)27-28
• 實(shí)驗(yàn)二全身短暫低溫和損傷局部短暫低溫對(duì)肢體爆炸傷后肺損傷的保護(hù)作用28-38
• 材料和方法28-31
• 結(jié)果31-34
• 討論34-36
• 小結(jié)36-38
• 第二部分 全身短暫低溫和損傷局部短暫低溫對(duì)肢體爆炸傷后肺Nrf2 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性的影響38-50
• 材料和方法38-45
• 結(jié)果45-47
• 討論47-49
• 小結(jié)49-50
• 第三部分 不同劑量H_2O_2 和TNFα對(duì)Nrf2 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性的影響50-75
• 實(shí)驗(yàn)一 肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)50-57
• 材料與方法51-53
• 結(jié)果53-54
• 討論54-56
• 小結(jié)56-57
• 實(shí)驗(yàn)二 不同劑量H_2O_2 和TNFα對(duì)Nrf2 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性的影響57-75
• 材料和方法57-60
• 結(jié)果60-71
• 討論71-74
• 小結(jié)74-75
• 第四部分 Nrf2 在炎癥反應(yīng)和氧化損傷中的作用75-101
• 實(shí)驗(yàn)一 Nrf2 siRNA 轉(zhuǎn)染肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞75-90
• 材料和方法76-84
• 結(jié)果84-86
• 討論86-89
• 小結(jié)89-90
• 實(shí)驗(yàn)二 Nrf2 在肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)和氧化損傷中的作用90-101
• 材料與方法90-93
• 結(jié)果93-97
• 討論97-100
• 小結(jié)100-101
• 全文結(jié)論101-103
• 致謝103-104
• 參考文獻(xiàn)104-117
• 文獻(xiàn)綜述 Nrf2 的激活機(jī)制及生理功能117-126
• 參考文獻(xiàn)123-126
• 研究生在讀期間發(fā)表論文情況126-127
• 英文論著127-141

【引證文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 崔俁;馬海英;孔力;;Nrf2/ARE通路與機(jī)體抗氧化機(jī)制的研究進(jìn)展[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年01期

2 姜敏;高振;李風(fēng)森;;Keap1-Nrf2-ARE通路與慢性阻塞性肺疾病氧化/抗氧化失衡關(guān)系[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2013年02期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王映珍;實(shí)驗(yàn)性急性胰腺炎肺損傷中Nrf2/ARE分子的作用及BML-111對(duì)肺損傷的影響[D];蘭州大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 孫宗建;單肺通氣誘發(fā)肺損傷時(shí)兔肺組織核因子NF-E2相關(guān)因子2表達(dá)的變化及姜黃素的干預(yù)效應(yīng)[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：1056697