本文關(guān)鍵詞：模擬微重力恢復(fù)培養(yǎng)對HUVEC-C細(xì)胞增殖抑制的研究

  更多相關(guān)文章： 模擬微重力 細(xì)胞骨架 細(xì)胞周期 細(xì)胞粘附 細(xì)胞凋亡 miRNAs

【摘要】：空間微重力導(dǎo)致宇航員發(fā)生心血管功能障礙,可能與血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能紊亂有關(guān)。但宇航員返回到地面1g后,微重力產(chǎn)生的損傷效應(yīng)如何調(diào)整,哪些效應(yīng)能夠恢復(fù)、哪些機(jī)制參與其中仍不清楚。本研究利用旋轉(zhuǎn)式細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)(RCCS-1)對臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC-C)進(jìn)行模擬微重力處理,比較分析模擬微重力處理和恢復(fù)培養(yǎng)對HUVEC-C產(chǎn)生細(xì)胞生物學(xué)變化的特點(diǎn),分析了相關(guān)的miRNA及其靶基因,以解析這些miRNA參與微重力誘導(dǎo)細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的可能機(jī)制。本研究利用細(xì)胞與微載體共培養(yǎng)的方法,使HUVEC-C細(xì)胞完全貼附于微載體上。在模擬微重力處理貼附微載體上的HUVEC-C到6h時,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞骨架微絲解聚,但繼續(xù)處理24h和48h微絲又恢復(fù)正常,提示微重力能引起細(xì)胞骨架發(fā)生重構(gòu)�；謴�(fù)培養(yǎng)后,在24h細(xì)胞骨架再次發(fā)生變化,微絲解聚,當(dāng)繼續(xù)培養(yǎng)48h后細(xì)胞骨架恢復(fù)正常。模擬微重力48h后,細(xì)胞發(fā)生了細(xì)胞周期G2期阻滯,但恢復(fù)培養(yǎng)48h,周期阻滯現(xiàn)象消失。使用SA-β-gal染色法,對細(xì)胞老化情況進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)模擬微重力48h促進(jìn)了細(xì)胞的老化。模擬微重力48h恢復(fù)培養(yǎng)48-96h細(xì)胞增殖明顯受到抑制,細(xì)胞的粘附能力在恢復(fù)培養(yǎng)早期(2h,4h)受到影響降低,逐漸恢復(fù)正常；恢復(fù)培養(yǎng)晚期(72h、96h),細(xì)胞凋亡率升高,說明模擬微重力恢復(fù)重力后HUVEC-C細(xì)胞增殖抑制可能是早期細(xì)胞粘附能力降低、細(xì)胞骨架重構(gòu)和晚期細(xì)胞凋亡綜合作用的結(jié)果。為進(jìn)一步分析miRNA是否參與微重力恢復(fù)培養(yǎng)后發(fā)生的細(xì)胞生物學(xué)變化,本研究測定了三種miRNA(miR-1, miR-22和miR-34a)在模擬微重力處理和恢復(fù)培養(yǎng)后的表達(dá)變化。研究發(fā)現(xiàn)模擬微重力處理可以導(dǎo)致miR-1, miR-22和miR-34a表達(dá)上調(diào),而在模擬微重力后不同時間點(diǎn)這三種miRNA表達(dá)趨勢明顯不同,通過Q-PCR和Western Blot進(jìn)行驗(yàn)證,證明miR-22和miR-34a分別通過靶基因SIRT1和BCL2發(fā)揮作用。此外,細(xì)胞凋亡過程有PTEN, Apaf-1參與,提示可能通過PTEN-PI3K-Akt和p53-Apaf-1信號通路介導(dǎo)。本研究對評價宇航員返回地球后的身體狀態(tài)有重要的意義,并對于太空飛行的風(fēng)險(xiǎn)評估有一定的參考價值。
【關(guān)鍵詞】：模擬微重力 細(xì)胞骨架 細(xì)胞周期 細(xì)胞粘附 細(xì)胞凋亡 miRNAs
【學(xué)位授予單位】：大連海事大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R852.22
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 第1章 緒論10-23
• 1.1 微重力環(huán)境及其對人體的影響10-12
• 1.1.1 微重力環(huán)境10
• 1.1.2 微重力環(huán)境對人體的影響10-12
• 1.2 模擬微重力的實(shí)驗(yàn)方法12-13
• 1.3 微重力對細(xì)胞的影響及機(jī)制研究13-18
• 1.3.1 微重力對細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響14-15
• 1.3.2 微重力對細(xì)胞增殖的影響15
• 1.3.3 微重力對細(xì)胞周期的影響15-16
• 1.3.4 微重力對細(xì)胞凋亡的影響16
• 1.3.5 微重力對細(xì)胞老化的影響16-17
• 1.3.6 微重力對細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞功能的影響17-18
• 1.4 微重力對血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響18
• 1.5 微重力后恢復(fù)培養(yǎng)的研究18-19
• 1.6 微重力環(huán)境影響miRNA表達(dá)水平變化研究現(xiàn)狀19-22
• 1.6.1 miRNA的簡介及其生物合成19-20
• 1.6.2 miRNA對基因表達(dá)的調(diào)控作用及其功能20-21
• 1.6.3 miRNA受微重力環(huán)境影響表達(dá)水平的變化21-22
• 1.7 本研究的目的及意義22-23
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料和方法23-43
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料23-27
• 2.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)23
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備及儀器23-24
• 2.1.3 主要試劑24-25
• 2.1.4 試劑配制25-27
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法27-43
• 2.2.1 模擬微重力處理27-28
• 2.2.2 模擬微重力后恢復(fù)重力處理28-29
• 2.2.3 細(xì)胞增殖曲線測定29
• 2.2.4 細(xì)胞粘附能力檢測29
• 2.2.5 細(xì)胞骨架免疫染色29-30
• 2.2.6 細(xì)胞周期測定30-31
• 2.2.7 細(xì)胞老化染色31
• 2.2.8 細(xì)胞凋亡率檢測31
• 2.2.9 RNA提取31-32
• 2.2.10 qRT-PCR檢測miRNA表達(dá)水平32-34
• 2.2.11 qRT-PCR檢測基因表達(dá)水平34-37
• 2.2.12 Western Blot檢測蛋白表達(dá)水平37-42
• 2.2.13 數(shù)據(jù)分析處理方法42-43
• 第3章 結(jié)果與討論43-64
• 3.1 模擬微重力實(shí)驗(yàn)方法確立43-45
• 3.1.1 貼壁細(xì)胞HUVEC-C進(jìn)行模擬微重力實(shí)驗(yàn)方法的確定43-44
• 3.1.2 微載體對細(xì)胞粘附能力影響的測定44-45
• 3.2 模擬微重力對HUVEC-C的影響45-50
• 3.2.1 模擬微重力對HUVEC-C細(xì)胞骨架的影響45-46
• 3.2.2 模擬微重力對HUVEC-C細(xì)胞周期的影響46-48
• 3.2.3 模擬微重力對HUVEC-C細(xì)胞老化的影響48-49
• 3.2.4 模擬微重力對HUVEC-C細(xì)胞相關(guān)miRNA表達(dá)的影響49-50
• 3.3 模擬微重力后恢復(fù)培養(yǎng)對HUVEC-C的影響50-64
• 3.3.1 模擬微重力后恢復(fù)培養(yǎng)對HUVEC-C細(xì)胞增殖的影響50-52
• 3.3.2 模擬微重力后恢復(fù)培養(yǎng)對HUVEC-C細(xì)胞粘附能力的影響52
• 3.3.3 模擬微重力后恢復(fù)培養(yǎng)對HUVEC-C細(xì)胞骨架的影響52-54
• 3.3.4 模擬微重力后恢復(fù)培養(yǎng)對HUVEC-C細(xì)胞周期的影響54-56
• 3.3.5 模擬微重力后恢復(fù)培養(yǎng)對HUVEC-C細(xì)胞凋亡的影響56
• 3.3.6 模擬微重力后恢復(fù)培養(yǎng)對miRNA表達(dá)的影響56-58
• 3.3.7 小結(jié)58-60
• 3.3.8 miRNA靶基因的預(yù)測及篩選60
• 3.3.9 模擬微重力后恢復(fù)培養(yǎng)對增殖相關(guān)基因的影響60-61
• 3.3.10 模擬微重力后恢復(fù)培養(yǎng)對調(diào)亡相關(guān)基因的影響61-64
• 第4章 結(jié)論與展望64-66
• 參考文獻(xiàn)66-72
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表論文72-73
• 致謝73-74
• 作者簡介74

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7 趙琦,李軍 ,劉敏;模擬微重力對植物幼苗光合特性的影響(英文)[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2002年02期

8 姚宇華,嚴(yán)洪,熊江輝,李瑩輝,馬永生;模擬微重力條件下心肌細(xì)胞骨架的灰度統(tǒng)計(jì)特征分析[J];中國生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報(bào);2005年03期

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1 陳海龍;曲麗娜;李瑩輝;;模擬微重力下黃酮類化合物對神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用[A];中國空間科學(xué)學(xué)會第七次學(xué)術(shù)年會會議手冊及文集[C];2009年

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本文編號：900795