本文關鍵詞：鼻咽癌放療抵抗相關microRNA差異表達譜的建立

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【摘要】：背景： 鼻咽癌系我國南部及東南亞地區(qū)常見頭頸部惡性腫瘤之一,放射治療為其首選治療手段,但放療抗拒的存在限制了其療效。腫瘤放療抗拒的產生是一個多基因、多因子和多機制共同作用的復雜過程,細胞內或者放療過程中細胞出現(xiàn)對放射線抗拒的細胞成分是腫瘤放療抵抗產生的重要原因。已有的研究顯示DNA修復基因蛋白表達量增高、細胞乏氧效應、放療后促血管生成效應以及自噬性調節(jié)是腫瘤細胞對抗放射線的主要途徑。但放療抗拒的具體分子機制目前仍不清楚。 microRNA (miRNA)是一種內源性非編碼RNA,通過結合到靶基因mRNA3'非翻譯區(qū)(3’UTR)抑制其翻譯等機制,調控靶基因mRNA的轉錄進而影響靶蛋白質的表達。miRNA參與到腫瘤細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲等多種惡性生物學行為的調控中。已有研究證實miRNA參與腫瘤放療敏感性的調控。對放療抵抗細胞或組織表達改變的miRNA的篩選,將對鼻咽癌放療抵抗性的逆轉、放療效果的提高提供新的啟示和依據。 目的： (1)利用X線梯度照射法建立人鼻咽癌放射抗拒細胞(CNE-2-Rs),為研究放射抗拒機理提供可比性的成對細胞株。 (2)Illumina Hiseq2000測序系統(tǒng)檢測,與已知數據庫進行比對,從兩樣本RNA中篩選出差異表達miRNA,構建放療抵抗microRNA表達譜。通過生物信息學分析差異表達miRNA與及其靶基因,研究可能的生物學功能和機制通路,為放療抵抗相關基因表達及其轉錄后調節(jié)提供更直接的科學線索。 方法： (1)建立鼻咽癌放療抵抗細胞株：應用X射線梯度照射的鼻咽癌CNE-2細胞系篩選出放療抵抗細胞株CNE-2-Rs;CCK-8法檢測放射后細胞生存率差異；應用細胞克隆形成試驗檢測細胞的放療敏感性；細胞增殖試驗檢測細胞放射后增殖能力差異。 (2)鼻咽癌放療抵抗相關miRNA差異表達譜的建立：將建立的放療抵抗細胞株與其親代細胞株提取RNA,通過Illumina Hiseq2000測序系統(tǒng)檢測,與已知數據庫進行比對,從兩樣本RNA中篩選出差異表達miRNA。將差異表達的miRNA分為上調組和下調組,分別利用Target-Scan5.1與PicTar2種計算方法對選定的miRNA進行靶基因預測,交集的基因集合分別進行GO富集分析和KEGG分析,預測可能的靶基因和信號通路。 結果： (1)X線梯度照射可誘導建立鼻咽癌抵抗細胞：①不同放療劑量下,CCK-8法檢測細胞株CNE-2-Rs的生存率高于CNE-2；②CNE-2-Rs放療后的增殖能力高于CNE-2,放療抑制率低于CNE-2；③細胞株CNE-2-Rs集落形成能力強于CNE-2細胞,多靶單擊模型和線性二次模型擬合細胞存活曲線,相關指標均提示CNE-2-Rs較CNE-2具有放療抵抗性,并具有統(tǒng)計學差異(p0.05)。 (2)建立鼻咽癌放療抵抗相關miRNA差異表達譜。①篩選出具有差異表達已知miRNA192個(上調107個,下調85個,p0.05),其中具有顯著差異的miRNA50個(Fold-change1.00或Fold-change-1.00,p0.05；上調36個,下調14個)。②21個miRNA簇(cluster)和miRNA家族(family)都存2個以上miRNA表達的差異。 信息分析結果：①GO分析提示：下調的14個miRNA對應的靶基因為富集于“生物高聚物修飾(biopolymer modification)"、“蛋白修飾過程(protein modification process)”等28個生物過程(p0.05)。上調的36個miRNA未發(fā)現(xiàn)明顯富集的生物過程。②KEGG分析提示：下調的14個miRNA對應的靶基因富集于4條通路“腫瘤相關通路(Pathways in cancer)"、“嘌呤代謝途徑(Purine metabolism)"、"Wnt信號通路(Wnt signaling pathway)”和“軸突導向通路(Axon guidance)"信號通路(q0.05)；上調的miRNA未有明顯的富集通路。 結論： (1)本實驗通過梯度照射模式證實其可以增加細胞的放療抵抗性。結果提示,在體外條件下這種篩選模式也可能篩選或誘導出放射抗拒的細胞,為放療篩選放療抵抗細胞株提供了一個新的放療篩選方案。 (2)鼻咽癌放療抵抗相關miRNA差異表達譜的建立,綜合信息學分析提供了數個可能的富集生物過程和富集通路,如Wnt通路和相關microRNA,為我們后續(xù)的研究提供了研究的方向和依據。
【關鍵詞】：鼻咽癌 放療抵抗 microRNA KEGG分析
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R739.63
【目錄】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 專業(yè)名詞縮寫中英文對照表12-13
• 前言13-15
• 第一章 X線梯度照射誘導建立鼻咽癌抵抗細胞株15-22
• 1. 引言15
• 2. 材料與方法15-18
• 3. 結果18-20
• 4. 討論20-21
• 5. 小結21-22
• 第二章 鼻咽癌放療抵抗相關miRNA差異表達譜的建立22-34
• 1. 引言22
• 2. 材料與方法22-26
• 3. 結果26-30
• 4. 討論30-33
• 5. 結論33-34
• 總結論34-35
• 參考文獻35-42
• 綜述42-61
• 參考文獻50-61
• 致謝61-62
• 研究生期間所發(fā)表學術論文、參與課題和所獲獎勵62

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

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本文編號：887535