本文關(guān)鍵詞：丹參酮ⅡA磺酸鈉對(duì)放射性心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： X射線 放射性心臟損傷 丹參酮ⅡA磺酸鈉 氧化應(yīng)激 凋亡

【摘要】：目的:氧化應(yīng)激誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡是放射性心臟病(RIHD)主要的發(fā)病機(jī)制,最終會(huì)導(dǎo)致心力衰竭,但目前,針對(duì)RIHD的治療,并無特效藥物,多是對(duì)癥治療,當(dāng)出現(xiàn)心力衰竭時(shí),有效的治療方法就是心臟移植。抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)可以防止心肌細(xì)胞凋亡,對(duì)RIHD起到保護(hù)作用。丹參酮ⅡA磺酸鈉(STS)具有抗氧化應(yīng)激的作用,因此,培養(yǎng)H9c2心肌細(xì)胞,建立X射線損傷模型,從細(xì)胞水平探討STS對(duì)H9c2心肌細(xì)胞輻射損傷的保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制,為RIHD的防治提供新的途徑。方法:(1)X射線誘導(dǎo)H9c2細(xì)胞凋亡用含10%FBS的DMEM F12培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,將細(xì)胞分為5組:1空白對(duì)照組(Con)22Gy組34Gy組46Gy組58Gy組,分別照射相應(yīng)劑量的X射線。MTT法測定細(xì)胞存活率,比色法測定乳酸脫氫酶(LDH)漏出量、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)水平,細(xì)胞平板克隆,Hochest33258熒光染色,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期分布,Western blot檢測細(xì)胞中凋亡蛋白及p38MAPK信號(hào)通路蛋白表達(dá)水平。(2)STS對(duì)放射性心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用用含10%FBS的DMEM F12培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,MTT法測定STS作用濃度,然后將細(xì)胞分為5組:1空白對(duì)照組(Con):無X射線照射,無STS22Gy+STS(2STS)組:用10μg/m L的STS預(yù)先處理細(xì)胞,然后照射2Gy的X射線34Gy+STS(4STS)組:用10μg/m L的STS預(yù)先處理細(xì)胞,然后照射4Gy的X射線46Gy+STS(6STS)組:用10μg/m L的STS預(yù)先處理細(xì)胞,然后照射6Gy的X射線58Gy+STS(8STS)組:用10μg/m L的STS預(yù)先處理細(xì)胞,然后照射8Gy的X射線。MTT法測定細(xì)胞存活率,比色法測定LDH、SOD以及MDA含量,細(xì)胞平板克隆,Hochest33258染色,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期,Western blot檢測細(xì)胞中的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:(1)倒置相差顯微鏡細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察:與空白對(duì)照組相比,單純照射各組內(nèi)細(xì)胞變圓或呈畸形,細(xì)胞數(shù)目明顯減少;與相應(yīng)劑量單純照射組相比,STS預(yù)處理后細(xì)胞數(shù)目明顯增多;與空白對(duì)照組相比,STS預(yù)處理各組細(xì)胞數(shù)目均減少,其中6STS、8STS組細(xì)胞數(shù)目減少明顯。(2)MTT、LDH細(xì)胞活力檢測:與Con相比,單純照射組(4Gy、6Gy、8Gy)細(xì)胞存活率明顯降低(P㩳0.05),LDH含量明顯增高(P㩳0.05);與相應(yīng)劑量單純照射組相比,STS預(yù)處理組(4STS、6STS、8STS)細(xì)胞存活率增高(P㩳0.05),LDH含量明顯降低(P㩳0.05);與Con組相比,STS預(yù)處理各組細(xì)胞存活率降低,其中8STS組細(xì)胞數(shù)目明顯減少,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㩳0.05),LDH含量均增高,其中6STS、8STS組LDH含量增加具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㩳0.05)。(3)氧化損傷相關(guān)酶檢測:與Con相比,單純照射各組SOD含量明顯降低,MDA明顯升高(P㩳0.05);與相應(yīng)劑量單純照射組相比,STS預(yù)處理各組SOD升高,MDA降低(P㩳0.05);與Con相比,STS預(yù)處理組(4STS、6STS、8STS)SOD含量降低,MDA含量升高(P㩳0.05)。(4)細(xì)胞平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測:與Con組相比,單純照射各組克隆形成率均明顯降低,且呈劑量依賴性(P0.05);與相應(yīng)劑量單純照射組相比,STS預(yù)處理各組克隆形成率均明顯增高(P0.05),其中2STS組克隆形成率幾乎恢復(fù)到空白組水平;與Con相比,除了2STS組,其它STS預(yù)處理組克隆形成率降低,差異具有顯著性(P0.05)。(5)Hochest33258細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測:與Con組相比,單純照射組細(xì)胞核凝聚顯著增強(qiáng),凋亡小體數(shù)目明顯增多,尤其是8Gy組;與相應(yīng)劑量單純照射組相比,STS預(yù)處理組細(xì)胞核凝聚減輕,凋亡小體數(shù)目減少;與Con相比,STS預(yù)處理組細(xì)胞核凝聚增強(qiáng),凋亡小體數(shù)目增多。(6)流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期:與Con組相比,單純照射組(4Gy、6Gy、8Gy)細(xì)胞凋亡數(shù)目明顯增多,G1期細(xì)胞比例逐漸增加,S期細(xì)胞比例顯著降低(P0.05);與相應(yīng)劑量單純照射組相比,STS預(yù)處理組細(xì)胞凋亡數(shù)目明顯減少,G1期細(xì)胞比例降低,S期細(xì)胞比例增加(P0.05);與Con相比,STS預(yù)處理組(6STS、8STS)細(xì)胞凋亡增加,G1期細(xì)胞比例增加,S期細(xì)胞比例降低(P0.05)。(7)Western blot檢測凋亡蛋白及P38-MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)蛋白表達(dá)量:與Con組相比,單純照射組(4Gy、6Gy、8Gy)Caspase-3、Bax/Bcl-2蛋白表達(dá)顯著上調(diào)(P0.05),P-P38、P-ERK蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(P0.05);與相應(yīng)劑量單純照射組相比,STS預(yù)處理組Caspase-3、Bax/Bcl-2蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著下調(diào)(P0.05),P-P38蛋白表達(dá)顯著上調(diào)(P0.05)。結(jié)論:X射線通過氧化應(yīng)激反應(yīng)損傷H9c2心肌細(xì)胞,抑制其增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。STS能夠減弱氧化應(yīng)激反應(yīng),調(diào)節(jié)細(xì)胞周期分布,從而抑制心肌細(xì)胞凋亡。因此,STS可用于防治RIHD。
【關(guān)鍵詞】：X射線 放射性心臟損傷 丹參酮ⅡA磺酸鈉 氧化應(yīng)激 凋亡
【學(xué)位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R730.55
【目錄】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 縮略詞表12-13
• 前言13-15
• 實(shí)驗(yàn)研究15-41
• 技術(shù)路線圖15-16
• 第一章 X射線對(duì)H9c2心肌細(xì)胞損傷的實(shí)驗(yàn)研究16-37
• 引言16
• 1 材料與方法16-19
• 1.1 主要儀器與試劑16-18
• 1.2 細(xì)胞培養(yǎng)基本設(shè)備和試劑配置18-19
• 2 方法19-28
• 2.1 H9c2大鼠心肌細(xì)胞株培養(yǎng)19
• 2.2 放射性心肌細(xì)胞損傷模型的建立及分組19
• 2.3 MTT檢測細(xì)胞存活率19-20
• 2.4 標(biāo)本檢測方法20-22
• 2.5 細(xì)胞平板克隆形成實(shí)驗(yàn)22-23
• 2.6 Annexin-V/PI染色，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡23
• 2.7 細(xì)胞周期阻滯23-24
• 2.8 Hochest 33258染色檢測細(xì)胞凋亡24
• 2.9 Western blot蛋白表達(dá)量檢測24-28
• 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理28
• 4 結(jié)果28-37
• 4.1 X射線損傷對(duì)H9c2細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變28
• 4.2 X射線對(duì)H9c2細(xì)胞存活率的影響28-29
• 4.3 X射線對(duì)H9c2細(xì)胞損傷的影響29-30
• 4.4 X射線對(duì)H9c2細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響30-32
• 4.5 X射線對(duì)H9c2細(xì)胞增殖能力的影響32-33
• 4.6 Hochest33258染色法觀察X射線誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞凋亡33
• 4.7X射線損傷對(duì)H9c2細(xì)胞凋亡率的改變33-35
• 4.8 X射線對(duì)H9c2細(xì)胞周期的影響35-36
• 4.9 Western blot蛋白表達(dá)量檢測結(jié)果36-37
• 第二章 丹參酮ⅡA磺酸鈉對(duì)放射性心肌細(xì)胞損傷保護(hù)作用的研究37-41
• 引言37-38
• 1 實(shí)驗(yàn)方法同上38
• 2 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理38
• 3 結(jié)果38-41
• 討論41-44
• 結(jié)論44-45
• 創(chuàng)新點(diǎn)45-46
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 附錄50-51
• 文獻(xiàn)綜述51-72
• 參考文獻(xiàn)63-72
• 致謝72-73
• 在校期間主要研究成果73

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：823957