本文關(guān)鍵詞：黃芪甲苷對(duì)肝細(xì)胞放射損傷的防護(hù)作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 黃芪甲苷 電離輻射 輻射防護(hù) 活性氧 Nrf2 L-02

【摘要】：目的:觀察黃芪甲苷對(duì)肝細(xì)胞L-02的輻射防護(hù)作用,并對(duì)其相關(guān)機(jī)制進(jìn)行研究,為開(kāi)發(fā)新輻射防護(hù)藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、黃芪甲苷組、輻照組、黃芪甲苷+輻照組。采用MTT法檢測(cè)黃芪甲苷對(duì)肝細(xì)胞L-02在不同時(shí)間的毒性作用,選出合適的黃芪甲苷濃度;給予0、0.5、1、2、4、6、8 Gy的137Cs-γ射線照射后24、48、72 h采用MTT法檢測(cè)電離輻射對(duì)細(xì)胞存活率的影響,選出合適的輻照劑量;通過(guò)MTT法檢測(cè)黃芪甲苷對(duì)輻照后細(xì)胞存活率的影響;克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察黃芪甲苷對(duì)輻照后L-02細(xì)胞克隆形成的影響;生長(zhǎng)曲線法觀察黃芪甲苷對(duì)L-02細(xì)胞的增殖能力的影響;DCFH-DA法檢測(cè)活性氧(ROS)含量;微板法檢測(cè)丙二醛(MDA)含量及還原型谷胱甘肽(GSH)活力;WST-1法檢測(cè)總超氧化物歧化酶(SOD)活力;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)黃芪甲苷對(duì)輻照后L-02細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期的影響;羅丹明123熒光探針檢測(cè)黃芪甲苷對(duì)輻照后L-02細(xì)胞線粒體膜電位的改變的影響;免疫熒光共聚焦顯微鏡觀察γH2AX焦點(diǎn)數(shù);Western Blot檢測(cè)各組Nrf2、HO-1、NQO1的蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.MTT結(jié)果顯示不同濃度的黃芪甲苷作用L-02細(xì)胞不同時(shí)間后,細(xì)胞存活率無(wú)顯著差異;輻照后細(xì)胞存活率隨受照劑量增大而降低,隨輻照后時(shí)間增長(zhǎng)而降低。黃芪甲苷能夠恢復(fù)輻射損傷后L-02細(xì)胞的增殖能力,抑制輻射所致的胞內(nèi)ROS和MDA含量升高,同時(shí)使胞內(nèi)SOD和GSH活力有所恢復(fù)。2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示輻照后細(xì)胞凋亡率隨著藥物濃度的增加而降低;細(xì)胞周期結(jié)果顯示黃芪甲苷能有效的緩解電離輻射引起的細(xì)胞G2期阻滯;羅丹明123染色結(jié)果顯示,黃芪甲苷+輻照組細(xì)胞線粒體膜電位均高于輻照組。3.激光共聚焦顯微鏡結(jié)果顯示黃芪甲苷+輻照組γH2AX焦點(diǎn)數(shù)明顯少于輻照組。4.Western Blot結(jié)果顯示:輻照組細(xì)胞內(nèi)Nrf2、HO-1及NQO1表達(dá)升高,黃芪甲苷+輻照組Nrf2、HO-1及NQO1表達(dá)則是隨著藥物濃度增加而降低。結(jié)論:1.電離輻射誘導(dǎo)L-02細(xì)胞DNA損傷、G2期阻滯,細(xì)胞存活率降低。2.終濃度為20-80μg/mL的黃芪甲苷對(duì)L-02細(xì)胞沒(méi)有明顯的細(xì)胞毒性,并且具有較好的輻射防護(hù)效果。3.黃芪甲苷可能是通過(guò)清除輻照后L-02細(xì)胞內(nèi)升高的自由基、增高細(xì)胞線粒體膜電位、恢復(fù)抗氧化酶活力、減少G2/M期阻滯比例降低γ射線誘發(fā)的氧化損傷發(fā)揮輻射防護(hù)作用。4.黃芪甲苷可通過(guò)Nrf2途徑來(lái)減輕電離輻射所致的損傷。
【關(guān)鍵詞】：黃芪甲苷 電離輻射 輻射防護(hù) 活性氧 Nrf2 L-02
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R730.55
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-13
• 第1章 前言13-19
• 第2章 材料與方法19-33
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料19-23
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及其培養(yǎng)19
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物的配制及其分組19-20
• 2.1.3 輻照參數(shù)20
• 2.1.4 主要試劑20-21
• 2.1.5 主要儀器21
• 2.1.6 主要試劑的配制21-23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法23-31
• 2.2.1 MTT檢測(cè)細(xì)胞存活率23-24
• 2.2.2 生長(zhǎng)曲線法觀察黃芪甲苷對(duì)L-02細(xì)胞增殖能力的影響24
• 2.2.3 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)黃芪甲苷對(duì)L-02細(xì)胞的輻射防護(hù)作用24-25
• 2.2.4 檢測(cè)L-02細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）含量的改變25
• 2.2.5 檢測(cè)L-02細(xì)胞中的超氧化物歧化酶（SOD）活力改變25-27
• 2.2.6 檢測(cè)L-02細(xì)胞中的還原型谷胱甘肽（GSH）活性的改變27
• 2.2.7 檢測(cè)L-02細(xì)胞中的丙二醛（MDA）含量的改變27-28
• 2.2.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)L-02細(xì)胞凋亡28
• 2.2.9 熒光分光光度法檢測(cè)線粒體膜電位（MMP）28-29
• 2.2.10 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)L-02細(xì)胞的周期分布29
• 2.2.11 免疫熒光法觀察γH2AX29-30
• 2.2.12 Western Blot法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Nrf2、HO-1、NQO1蛋白的表達(dá)30-31
• 2.3 統(tǒng)計(jì)分析31-33
• 第3章 結(jié)果33-47
• 3.1 黃芪甲苷與電離輻射對(duì)L-02細(xì)胞存活率的影響33-35
• 3.2 黃芪甲苷對(duì)L-02細(xì)胞增殖能力的影響35
• 3.3 克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)黃芪甲苷對(duì)L-02細(xì)胞的輻射防護(hù)作用35-36
• 3.4 L-02細(xì)胞的ROS含量改變36-37
• 3.5 L-02細(xì)胞的GSH和SOD活力及MDA含量的改變37-38
• 3.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)黃芪甲苷對(duì)輻照后L-02細(xì)胞凋亡的影響38-39
• 3.7 黃芪甲苷對(duì)輻照后L-02細(xì)胞線粒體膜電位的影響39
• 3.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)黃芪甲苷對(duì)輻照后L-02細(xì)胞周期的影響39-41
• 3.9 黃芪甲苷對(duì)輻照后L-02細(xì)胞γH2AX免疫熒光foci的影響41-42
• 3.10 Western Blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)蛋白的表達(dá)42-47
• 3.10.1 黃芪甲苷對(duì)輻照后L-02細(xì)胞Nrf2表達(dá)的影響42-43
• 3.10.2 黃芪甲苷對(duì)輻照后L-02細(xì)胞HO-1 表達(dá)的影響43
• 3.10.3 黃芪甲苷對(duì)輻照后L-02細(xì)胞NQO1表達(dá)的影響43-47
• 第4章 討論47-55
• 4.1 黃芪甲苷與電離輻射對(duì)L-02細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響48
• 4.2 黃芪甲苷對(duì)輻射后L-02細(xì)胞抗氧化能力的影響48-49
• 4.3 黃芪甲苷對(duì)L-02細(xì)胞凋亡及線粒體膜電位的影響49-51
• 4.4 黃芪甲苷對(duì)輻照后L-02細(xì)胞周期改變的影響51-52
• 4.5 黃芪甲苷對(duì)L-02細(xì)胞DNA損傷后γH2AX foci形成的影響52
• 4.6 黃芪甲苷對(duì)L-02細(xì)胞Nrf2相關(guān)蛋白表達(dá)的影響52-55
• 第5章 結(jié)論55-57
• 參考文獻(xiàn)57-65
• 綜述65-73
• 參考文獻(xiàn)70-73
• 附錄73-75
• 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果75-77
• 致謝77

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1 賈永峰;王德文;;電離輻射和非電離輻射復(fù)合作用的生物學(xué)效應(yīng)[J];中華勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病雜志;2006年12期

2 王小玲;;術(shù)中使用C型臂X線機(jī)電離輻射的防護(hù)[J];河南外科學(xué)雜志;2008年06期

3 王家富;;醫(yī)學(xué)中電離輻射對(duì)人體的危害[J];吉林醫(yī)學(xué);2010年12期

4 于雯淼;李t煴，

本文編號(hào)：725588