本文關鍵詞：miR-34a高表達引發(fā)輻射誘導的γH2AX生成滯后機制研究

  更多相關文章： miR-34a 電離輻射 γH12AX G0/G1阻滯 Ro60 電離輻射 肺癌 細胞增殖

【摘要】：目的：通過研究電離輻射誘導微小RNA分子miR-34a對輻射損傷反應分子H2AX磷酸化激活以及DNA雙鏈斷裂損傷修復的影響,探討miR-34a調控腫瘤細胞輻射敏感性的作用機制。方法：在非小細胞肺癌A549細胞中過表達miR-34a,利用微核實驗、彗星實驗檢測輻照后細胞的DNA雙鏈斷裂損傷及修復情況；通過免疫印跡、免疫熒光等方法檢測輻照后細胞中H2AX的磷酸化(?)γH2AX的生成情況；利用流式細胞術、CCK-8試劑盒檢測細胞周期及細胞增殖情況。結果：過表達miR-34a的人非小細胞肺癌A549細胞經60Co10Gy輻照后,DNA雙鏈斷裂損傷修復延緩,細胞微核形成率增高；過表達miR-34a誘導A549細胞出現CCND1表達下調和G0/G1期阻滯現象,并導致輻照誘導的H2AX磷酸化激活延遲；A549細胞同步化于G0/G1期時,同樣出現H2AX磷酸化延遲現象。結論：肺癌細胞A549中過表達miR-34a可通過調控細胞周期素分子CCND1等的表達誘導細胞G0/G1阻滯,進而延遲輻射損傷反應分子H2AX的磷酸化激活,影響DNA雙鏈斷裂損傷修復,調節(jié)腫瘤細胞輻射敏感性。 目的：研究腫瘤細胞中RNA結合蛋白Ro60的表達情況及Ro60對腫瘤細胞增殖及輻射誘導增殖抑制等的影響。方法：利用腫瘤組織芯片檢測不同類型的腫瘤組織及其癌旁組織中Ro60的表達情況；免疫組化檢測肺癌臨床樣本中Ro60的表達情況；CCK8試劑盒檢測細胞增殖及電離輻射反應中Ro60對細胞增殖的影響。結果：多種腫瘤組織中自身抗原Ro60的蛋白表達較癌旁組織異常增高或發(fā)生亞細胞分布改變。在肺癌、直腸癌、乳腺癌、胰腺癌等腫瘤組織中Ro60的胞漿/胞核表達異常增高；在食管癌、結腸癌腫瘤組織中Ro60的胞漿/胞核分布異常,胞漿中Ro60蛋白顯著增加；而胃癌、肝臟癌、腎癌等腫瘤組織中Ro60的表達與癌旁對照無顯著差異。在肺癌臨床樣本中Ro60在腫瘤組織中的表達明顯高于癌旁組織；敲低表達Ro60的肺癌細胞系801C、801D增殖減慢。下調肺癌細胞中Ro60表達能夠增進電離輻射引發(fā)的腫瘤細胞增殖抑制。結論：腫瘤組織中Ro60的異常高表達與腫瘤細胞的惡性增殖及放療抗性相關。
【關鍵詞】：miR-34a 電離輻射 γH12AX G0/G1阻滯 Ro60 電離輻射 肺癌 細胞增殖
【學位授予單位】：昆明理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R730.55;R734.2
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-11
• 插圖和附表清單11-12
• 縮略語12-14
• 前言14-18
• 材料與方法18-30
• 1. 實驗材料18-20
• 1.1 細胞系18
• 1.2 主要實驗試劑與材料18
• 1.3 主要儀器18-19
• 1.4 miRNA mimics19
• 1.5 引物19-20
• 2. 主要試劑的配制方法20-22
• 2.1 細胞培養(yǎng)20
• 2.2 免疫印跡20-21
• 2.3 免疫熒光21
• 2.4 彗星實驗21-22
• 2.5 細胞周期檢測22
• 3. 實驗方法22-30
• 3.1 細胞培養(yǎng)22-23
• 3.2 實時定量PCR檢測23-25
• 3.3 免疫印跡分析25-27
• 3.4 免疫熒光27-28
• 3.5 彗星實驗28
• 3.6 微核檢測28-29
• 3.7 細胞增殖檢測29
• 3.8 細胞周期檢測29
• 3.9 統(tǒng)計學處理29-30
• 實驗結果30-36
• 1. miR34a調控A549細胞的DSBs損傷修復30
• 2. miR34a調控電離輻射誘導的DSBs損傷修復30-31
• 3. 肺癌細胞株A549中過表達miR-34a導致IR誘導的H2AX磷酸化修飾滯后31-33
• 4. miR-34a過表達導致肺癌細胞A549中CCND1表達下調和G0/G1阻滯33-34
• 5. G0/G1阻滯導致肺癌細胞A549輻射后H2AX磷酸化修飾延遲34-36
• 結論36
• 討論36-39
• 參考文獻39-42
• 腫瘤細胞中Ro60的表達及其功能初探42-65
• 摘要42-43
• ABSTRACT43-44
• 插圖和附表清單44-45
• 縮略語45-46
• 前言46-48
• 材料與方法48-54
• 1. 實驗材料48-50
• 1.1 細胞系及臨床樣本48
• 1.2 Ro60過表達質粒及干涉序列48
• 1.3 主要試劑和材料48-49
• 1.4 主要實驗儀器49
• 1.5 引物49-50
• 2. 主要試劑的配制方法50
• 3. 實驗方法50-54
• 3.1 免疫組化50-51
• 3.2 轉化及質粒提取51-52
• 3.3 細胞培養(yǎng)52
• 3.4 轉染52
• 3.5 免疫印跡分析52-53
• 3.6 實時定量PCR檢測53
• 3.7 細胞增殖檢測53
• 3.8 統(tǒng)計學處理53-54
• 實驗結果54-61
• 1. 多種腫瘤組織中Ro60蛋白表達增高54-55
• 2. 多種腫瘤組織中自身抗原Ro60的蛋白亞細胞分布改變55-56
• 3. Ro60在肺癌中高表達56-57
• 4. Ro60調控腫瘤細胞增殖57-59
• 5. Ro60調控腫瘤細胞對輻射的反應性59-61
• 結論61-62
• 討論62-64
• 參考文獻64-65
• 致謝65-66
• 附表66-72
• 附錄A 攻讀碩士期間發(fā)表論文目錄72-73
• 附錄B 其他需要說明的內容73

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前1條

1 樓敏銘;張興;田寶磊;劉繼來;劉斌;張令強;鄭曉飛;宋宜;孫志賢;;腫瘤細胞中Ro60的表達及其對腫瘤細胞輻射敏感性的影響[J];軍事醫(yī)學;2013年04期

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本文編號：516639