本文關鍵詞：過度運動誘發(fā)大鼠急性心肌損傷p38MAPK和HSP70表達及諾迪康膠囊的干預作用

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【摘要】：研究目的隨著競技體育比賽的日益激烈,過度運動逐漸成為運動醫(yī)學、臨床醫(yī)學的研究熱點。過度訓練致急性心肌損傷(overtraining-induced acute myocadial injury,OTIAMI)對運動員心臟造成很大傷害,甚至引起運動員猝死,目前臨床上尚缺乏有效的防治措施。因此,進一步認識OTIAMI的發(fā)病機制,探索其防治措施是目前運動醫(yī)學、軍事醫(yī)學和臨床醫(yī)學面臨的重大課題。本研究擬觀察單次力竭運動后恢復期不同時間點(運動后0h、3h、6h、12h和24h)大鼠心肌組織病理學變化以及大鼠血清和心肌組織中p38MAPK、p-p38MAPK、COX-2、HSP70的動態(tài)變化規(guī)律;同時研究諾迪康膠囊0.90g/kg和0.45g/kg大小兩個劑量干預給藥對大鼠力竭性游泳運動后3h、6h和24h心肌組織病理學變化以及血清和心肌組織中p38MAPK、p-p38MAPK、COX-2和HSP70的影響,以探討p38MAPK、COX-2和HSP70在過度運動誘發(fā)大鼠急性心肌損傷中的作用及諾迪康膠囊的干預作用,為過度訓練誘發(fā)急性心肌損傷的發(fā)生和康復治療提供實驗理論依據。研究方法1.模型建立和動物分組利用大鼠尾部負重進行力竭性游泳運動建立過度運動誘發(fā)急性心肌損傷實驗動物模型。160只Wistar雄性大鼠隨機分為安靜對照組(n=20)、力竭運動組(n=80)、諾迪康膠囊大劑量組(0.90g/kg,n=30)、諾迪康膠囊小劑量組(0.45g/kg,n=30)。安靜對照組不進行任何運動直接取材;力竭運動組大鼠進行力竭游泳運動,根據運動后恢復期時間不同分為0h、3h、6h、12h和24h組(每組分別為10、20、20、10、20只),運動結束后按不同時間點取材;諾迪康大、小劑量組又各自分為給藥后3h、6h和24h組3個亞組(每組10只),諾迪康膠囊大、小劑量組在力竭游泳運動前,連續(xù)給藥10天。2.觀察指標檢測于末次給藥后1h進行力竭性運動,記錄各組大鼠力竭游泳時間;腹腔靜脈取血2ml,離心取上清液,-20℃保存?zhèn)溆?迅速取出心臟,剝離出左心室,切取左心室心尖部位心肌組織,放入福爾馬林中固定三天,常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片,備HE染色和免疫組化用;剩余的大鼠心肌組織,縱切一分為三:取第一部分心肌組織約100mg,制備10%心肌組織勻漿,離心取上清液,-20℃保存?zhèn)溆?第二部分用液氮迅速制備心肌冰凍標本,-80℃保存?zhèn)溆?第三部分同樣用液氮迅速制備心肌冰凍標本,-80℃保存?zhèn)溆�。蘇木精-伊紅染色法(hematoxylin-eosin,HE)觀察各組大鼠心肌組織病理改變;酶聯免疫吸附試驗法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測各組大鼠血清和組織勻漿中p38MAPK、HSP70和COX-2的表達變化;免疫組織化學法(immunohistochemical,IHC)和Western blotting(WB)檢測各組大鼠心肌p-p38MAPK、HSP70和COX-2的蛋白表達變化;利用熒光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative RCR,RT-PCR)法檢測心肌組織中p38MAPK m RNA、HSP70 m RNA和COX-2 m RNA的表達。實驗結果1.力竭性運動后不同時相大鼠心肌組織形態(tài)學改變及諾迪康膠囊的干預作用HE染色結果顯示,安靜對照組大鼠心肌組織結構正常。力竭運動后不同時相大鼠心肌組織均有不同程度損傷,其中以運動后24h最為嚴重。諾迪康膠囊大劑量6h、24h組以及諾迪康膠囊小劑量24h組,大鼠心肌組織病理學明顯改善。2.力竭性運動后不同時相大鼠血清中p38MAPK、COX-2和HSP70含量的動態(tài)變化及諾迪康膠囊的干預作用ELISA法實驗結果表明,與安靜對照組比較,力竭性運動后3h、6h、12h和24h組大鼠血清p38MAPK、COX-2濃度均顯著升高(P0.01和P0.05),其中p38MAPK分別在3h和24h時達高峰;力竭性運動后0h、3h、6h、12h和24h組大鼠血清中HSP70濃度均顯著升高(P0.01),24h時達高峰。與力竭運動后3h、6h和24h組比較,諾迪康膠囊大劑量、小劑量3h、6h和24h組大鼠血清中p38MAPK和COX-2濃度均顯著降低(P0.01和P0.05),HSP70濃度均顯著升高(P0.05)。3.力竭性運動后不同時相大鼠心肌組織中p38MAPK、COX-2和HSP70含量的動態(tài)變化及諾迪康膠囊的干預作用ELISA法實驗結果表明,與安靜對照組比較,力竭運動后3h、6h、12h和24h組大鼠心肌組織勻漿中p38MAPK、COX-2和HSP70濃度均顯著升高(P0.01和P0.05)。分別與力竭運動后3h、6h和24h組比較,諾迪康膠囊大、小劑量3h、24h組大鼠心肌組織中p38MAPK濃度均顯著降低(P0.01),大劑量6h組p38MAPK濃度也顯著降低(P0.01);諾迪康膠囊大、小劑量3h、6h、24h組大鼠心肌組織中COX-2濃度均顯著降低(P0.01);諾迪康膠囊大、小劑量3h、24h組大鼠心肌組織HSP70濃度均有顯著性增加(P0.01),大劑量6h組HSP70濃度也顯著增加(P0.01)。4.力竭性運動后不同時相大鼠心肌組織中p-p38MAPK、COX-2和HSP70蛋白的表達及諾迪康膠囊的干預作用Western-blotting實驗結果顯示,與安靜對照組比較,力竭運動后3h、6h、12h和24h組大鼠心肌組織中p-p38MAPK蛋白表達均顯著升高(P0.05),其中3h組表達高峰;COX-2和HSP70蛋白表達亦顯著性增加(P0.05和P0.01)。分別與力竭運動后3h、6h和24h組比較,諾迪康膠囊大、小劑量3h、6h和24h組大鼠心肌組織中p-p38MAPK和COX-2蛋白表達均明顯降低(P0.01);HSP70蛋白表達均顯著增加(P0.01)。免疫組織化學方法實驗結果顯示,p-p38MAPK、COX-2和HSP70的表達在安靜對照組大鼠心肌組織中幾乎沒有表達,在力竭運動后不同時間點大鼠心肌組織病變區(qū)域的表達明顯增加;諾迪康膠囊大、小劑量組p-p38MAPK、COX-2的表達減少,HSP70表達增加。5.力竭性運動后不同時相心肌組織中p38MAPKm RNA、COX-2m RNA和HSP70m RNA的表達及諾迪康膠囊的干預作用RT-PCR結果表明,與安靜對照組比較,力竭性運動后3h、6h和24h組大鼠心肌組織中p38MAPKm RNA、COX-2m RNA和HSP70m RNA的表達量均顯著升高(P0.05)。分別與力竭運動后3h、6h和24h組比較,諾迪康膠囊大、小劑量組均明顯降低力竭運動后不同時間點大鼠心肌組織中p38MAPKm RNA和COX-2m RNA的表達量(P0.01);諾迪康膠囊大、小劑量組均可顯著升高HSP70m RNA表達量(P0.01),其中大劑量組6h達高峰,隨后有所下降。結論1.本文成功建立了過度運動誘發(fā)急性心肌損傷模型。2.力竭性運動后不同時間點大鼠心肌組織有不同程度的損傷。諾迪康膠囊0.90g/kg和0.45g/kg劑量可以改善力竭性運動后大鼠心肌形態(tài)學改變。3.ELISA、Western-blotting及免疫組化法三種不同方法均證實,力竭性運動可以引起運動后不同時間點大鼠血清和心肌組織中p38MAPK、p-p38MAPK、COX-2和HSP70蛋白表達不同程度的升高,諾迪康膠囊可以降低心肌組織中p-p38MAPK、COX-2蛋白表達,同時增加HSP70蛋白表達。4.RT-PCR結果證實,力竭性運動后不同時相心肌組織中p38MAPKmRNA、COX-2m RNA和HSP70m RNA表達均顯著性的升高,諾迪康膠囊0.90g/kg和0.45g/kg劑量可以降低p38MAPKm RNA、COX-2m RNA表達水平,同時升高HSP70m RNA表達水平。5.不同方法均證實了p38MAPK、COX-2、HSP70參與了力竭運動誘發(fā)的心肌損傷。6.諾迪康膠囊對力竭性運動誘發(fā)心肌損傷具有保護作用,其機制可能與降低心肌組織中p38MAPK、COX-2的表達,同時增加HSP70表達有關。
【關鍵詞】：力竭性運動 心肌損傷 諾迪康膠囊 p38MAPK COX-2 HSP70
【學位授予單位】：濟南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R87
【目錄】：

• 摘要7-11
• Abstract11-16
• 符號說明16-17
• 前言17-20
• 第一部分 過度運動誘發(fā)大鼠急性心肌損傷中p38MAPK、COX-2、HSP70表達的動態(tài)變化20-34
• 1 實驗材料20-23
• 1.1 實驗動物20
• 1.2 藥品與試劑20-22
• 1.3 試劑配制22
• 1.4 實驗主要儀器22-23
• 2 實驗方法23-27
• 2.1 模型建立及分組23-24
• 2.2 標本收集24
• 2.3 心肌組織病理檢查—蘇木素-伊紅（HE）染色24
• 2.4 血清中p38MAPK、COX-2 和HSP70測定—ELISA法24-25
• 2.5 心肌組織中p38MAPK、COX-2 和HSP70測定—ELISA法25
• 2.6 心肌組織中p-p38MAPK、COX-2 和HSP70測定—Western Blotting25-26
• 2.7 統計學分析26-27
• 3 實驗結果27-32
• 3.1 左心室質量指數變化27
• 3.2 心肌組織病理學改變27-28
• 3.3 血清中p38MAPK、COX-2、HSP70的動態(tài)變化28-29
• 3.4 心肌組織中p38MAPK、COX-2、HSP70的動態(tài)變化29-30
• 3.5 Western-blotting法檢測蛋白表達30-32
• 4 討論32-34
• 第二部分 諾迪康膠囊對過度運動誘發(fā)急性心肌損傷中p38MAPK、COX-2、HSP70的干預作用34-53
• 1 實驗材料34-37
• 1.1 實驗動物34
• 1.2 藥品與試劑34-35
• 1.3 試劑配制35-36
• 1.4 實驗主要儀器36-37
• 2 實驗設計與方法37-40
• 2.1 模型建立及分組37
• 2.2 標本收集37
• 2.3 蘇木素-伊紅(HE）染色37-38
• 2.4 ELISA檢測血清p38MAPK、COX-2、HSP70含量38
• 2.5 ELISA檢測組織勻漿中p38MAPK、COX-2、HSP70含量38
• 2.6 Western-blotting檢測心肌組織中p-p38MAPK、COX-2、HSP70的表達38
• 2.7 免疫組織化學法檢測心肌組織中p-p38MAPK、COX-2、HSP70的表達38-39
• 2.8 RT-PCR檢測39-40
• 2.9 統計學分析40
• 3 實驗結果40-50
• 3.1 諾迪康膠囊對力竭運動大鼠游泳時間的影響40-41
• 3.2 諾迪康膠囊對大鼠心肌組織病理學的影響41-42
• 3.3 諾迪康膠囊對血清中p38MAPK、COX-2、HSP70表達的影響42-43
• 3.4 諾迪康膠囊對心肌組織中p38MAPK、COX-2、HSP70表達的影響43-45
• 3.5 諾迪康膠囊對心肌組織中p-p38MAPK、COX-2、HSP70表達的影響45-46
• 3.6 諾迪康膠囊對心肌組織中p-p38MAPK、COX-2、HSP70表達的影響-IHC3046-49
• 3.7 諾迪康膠囊對心肌組織p38MAPKm RNA、COX-2m RNA和HSP70m RNA表達的影響-RT-PCR49-50
• 4 討論50-53
• 結論53-54
• 參考文獻54-58
• 攻讀學位期間取得的研究成果58-59
• 致謝59

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

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本文編號：515891