本文關(guān)鍵詞：SPIO-MSCs歸巢至腫瘤轉(zhuǎn)移灶及其7.0T MR影像學(xué)表現(xiàn)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分：間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)以及SPIO的轉(zhuǎn)染目的將超順磁性氧化鐵(SPIO, superparamagenetic iron oxide)轉(zhuǎn)染至培養(yǎng)的原代間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs, mesenchymal stem cells),檢測(cè)SPIO的細(xì)胞毒性,測(cè)定MSCs細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)鐵量與培養(yǎng)基內(nèi)SPIO濃度的劑量依賴關(guān)系,并測(cè)定轉(zhuǎn)染SPIO后的MSCs在體外培養(yǎng)的條件下細(xì)胞內(nèi)的鐵含量隨時(shí)間變化關(guān)系。方法1)沖洗幼年SD大鼠脛骨、股骨骨髓腔,將分離出的MSCs于體外培養(yǎng)傳代,使用脂質(zhì)體作為轉(zhuǎn)染劑通過共培養(yǎng)的方式將SPIO轉(zhuǎn)染至MSCs細(xì)胞內(nèi)；2)使用透射電鏡以及普魯士藍(lán)染色的方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染至MSCs細(xì)胞內(nèi)的SPIO顆粒；3)使用CCK-8試劑盒檢測(cè)不同SPIO濃度(20 ug/ml、40ug/ml、 80 ug/ml、120ug/ml、160ug/ml)對(duì)細(xì)胞活性的影響；4)使用原子吸光光度法測(cè)定不同SPIO濃度條件下MSCs細(xì)胞內(nèi)的鐵含量以及以SPIO (160 ug/ml)轉(zhuǎn)染MSCs后該細(xì)胞于1天、3天、5天、7天、9天、11天時(shí)MSCs細(xì)胞內(nèi)的鐵含量。結(jié)果1)透射電鏡可見轉(zhuǎn)染SPIO后的MSCs細(xì)胞內(nèi)有高密度的致密顆粒物,普魯士藍(lán)染色結(jié)果可見MSCs內(nèi)的藍(lán)染顆粒物；2) MSCs在不同SPIO轉(zhuǎn)染濃度條件下的OD值之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；3)當(dāng)SPIO的轉(zhuǎn)染濃度為20 ug/ml、40 ug/ml、80 ug/ml、120 ug/ml、 160 ug/ml時(shí),每個(gè)MSCs細(xì)胞內(nèi)鐵含量分別為3.8 pg、6.6 pg、13.7 pg、 18.5 pg、23.7 pg;4)隨著MSCs的分裂,轉(zhuǎn)染濃度為160 ug/ml的MSCs第1天、3天、5天、7天、9天、11天時(shí)其細(xì)胞內(nèi)鐵含量分別為21.3 pg、10.7 pg、 4.2 pg、1.9 pg.0.9 pg、0.5 pg。結(jié)論1)使用脂質(zhì)體可以成功將SPIO轉(zhuǎn)染至MSCs內(nèi)；2)使用高濃度SPIO轉(zhuǎn)染MSCs也不會(huì)對(duì)MSCs的細(xì)胞活性造成明顯影響；3) MSCs轉(zhuǎn)鐵量與培養(yǎng)基中SPIO濃度呈正相關(guān),且轉(zhuǎn)鐵后的MSCs內(nèi)的鐵含量會(huì)隨著時(shí)間推移而相應(yīng)減少。第二部分：C6膠質(zhì)瘤肝轉(zhuǎn)移模型的構(gòu)建及其影像學(xué)表現(xiàn)目的通過肝門靜脈注射體外培養(yǎng)的C6膠質(zhì)瘤至裸鼠肝臟來構(gòu)建C6膠質(zhì)瘤血行肝轉(zhuǎn)移模型。對(duì)構(gòu)建的模型進(jìn)行HE染色,免疫組化染色,大體形態(tài)學(xué)觀察來了解該模型的基本特性,并使用3.0T磁共振(MR,magnetic resonance)對(duì)所構(gòu)建的轉(zhuǎn)移瘤模型進(jìn)行掃描,了解該轉(zhuǎn)移瘤的核磁共振成像(MRI, magnetic resonance imaging)的影像學(xué)特征。為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的開展奠定基礎(chǔ)。方法1)手術(shù)暴露裸鼠肝門靜脈,經(jīng)肝門靜脈注射C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞至36只裸鼠肝臟；2)于注射膠質(zhì)瘤后的7天、14天、21天時(shí)隨機(jī)抽取建模裸鼠12只行3.0T MRI T1WI、T2WI掃描；3)取經(jīng)MRI掃描后的建模裸鼠肝臟組織對(duì)其進(jìn)行大體形態(tài)學(xué)觀察、HE染色、S-100beta免疫組學(xué)染色。結(jié)果1)HE染色于注射細(xì)胞7天時(shí)最早發(fā)現(xiàn)裸鼠肝臟組織內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移灶的形成；注射細(xì)胞14天時(shí),大體形態(tài)學(xué)和3.0T MRI T2WI可觀測(cè)到裸鼠肝臟組織腫瘤轉(zhuǎn)移灶的形成,而T1WI不能發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移灶；注射細(xì)胞21天時(shí)HE染色、大體形態(tài)學(xué)、3.0T MRI T2WI及T1WI均能發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移灶,相應(yīng)改變較14天組更加明顯；2)組織切片S-100beta免疫組化結(jié)果見腫瘤轉(zhuǎn)移灶染色呈陽(yáng)性；3)轉(zhuǎn)移灶在MRI T2WI上表現(xiàn)為高信號(hào)改變,且對(duì)于較大結(jié)節(jié)3.0T MRI能顯示其內(nèi)壞死及瘤周水腫。結(jié)論1)該方法可用于膠質(zhì)瘤血行肝臟轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型的構(gòu)建,且成功率高重復(fù)性好；2)使用該方法構(gòu)建的膠質(zhì)瘤血行肝臟轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型其轉(zhuǎn)移灶于14天后可被3.OT MRI很好的檢測(cè)到,且對(duì)于腫瘤轉(zhuǎn)移灶的檢測(cè)T2WI較T1WI敏感性高。第三部分:SPIO-MSCs歸巢至腫瘤部位的MR檢測(cè)目的將體外標(biāo)記的攜帶有SPIO的MSCs通過尾靜脈注射至構(gòu)建的膠質(zhì)瘤血行肝轉(zhuǎn)移的裸鼠模型體內(nèi),通過MSCs的歸巢作用將SPIO轉(zhuǎn)運(yùn)至腫瘤灶。使用7.0T MR對(duì)注射細(xì)胞后的建模裸鼠肝臟進(jìn)行掃描,以確定通過MSCs的歸巢作用將SPIO轉(zhuǎn)移至腫瘤轉(zhuǎn)移灶的方法是否足以引起肝臟組織腫瘤轉(zhuǎn)移灶在7.0T MR上的信號(hào)改變。方法1)將構(gòu)建的膠質(zhì)瘤肝轉(zhuǎn)移模型裸鼠隨機(jī)分為兩組(每組3只),分別通過尾靜脈注射未標(biāo)記MSCs(1x106個(gè)/只)、SPIO-MSCs(1x106個(gè)/只)至2組模型裸鼠體內(nèi)；2)與注射細(xì)胞9天時(shí)使用7.0T MR掃描2組裸鼠肝臟組織得到相應(yīng)的T2WI信號(hào)強(qiáng)度值、T2*值;3)將裸鼠肝臟組織行冰凍切片并用普魯士藍(lán)染色的方法尋找標(biāo)記的SPIO-MSCs。結(jié)果1)2組模型裸鼠正常肝臟組織之間的T2WI信號(hào)強(qiáng)度及T2*值(T2*弛豫時(shí)間)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移灶部位的T2WI信號(hào)強(qiáng)度及T2*值檢測(cè)發(fā)現(xiàn),SPIO-MSCs組腫瘤轉(zhuǎn)移灶T2WI信號(hào)強(qiáng)度較MSCs組下降,T2*值縮短,結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；2)模型裸鼠肝臟組織的冰凍切片經(jīng)普魯士藍(lán)染色可見SPIO-MSCs注射組裸鼠腫瘤灶出現(xiàn)被藍(lán)染的顆粒物為體外標(biāo)記MSCs。結(jié)論MSCs能歸巢至腫瘤灶部位,并可將其內(nèi)攜帶的SPIO轉(zhuǎn)運(yùn)至腫瘤灶部位。聚集于腫瘤灶部位的SPIO于7.0T MR下可引起該部位T2WI信號(hào)強(qiáng)度及T2*值的改變。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 超順磁性氧化鐵 普魯士藍(lán)染色 透射電鏡 膠質(zhì)瘤 動(dòng)物模型 裸鼠 S-100beta 磁共振成像 磁共振 超順磁性氧化鐵 膠質(zhì)瘤 間充質(zhì)干細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R445.2;R730.44
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名稱對(duì)照5-7
• 中文摘要7-12
• 英文摘要12-18
• 前言18-22
• 參考文獻(xiàn)19-22
• 第一部分 間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)以及SPIO的轉(zhuǎn)染22-36
• 1 材料與方法22-27
• 2 結(jié)果27-32
• 3 討論32-34
• 4 結(jié)論34
• 參考文獻(xiàn)34-36
• 第二部分 C6膠質(zhì)瘤肝轉(zhuǎn)移模型的構(gòu)建及其影像學(xué)表現(xiàn)36-48
• 1 材料與方法36-40
• 2 結(jié)果40-44
• 3 討論44-46
• 4 結(jié)論46
• 參考文獻(xiàn)46-48
• 第三部分 SPIO-MSCs歸巢至腫瘤部位的MR檢測(cè)48-58
• 1 材料與方法48-50
• 2 結(jié)果50-54
• 3 討論54-56
• 4 結(jié)論56
• 參考文獻(xiàn)56-58
• 全文總結(jié)58-60
• 文獻(xiàn)綜述60-65
• 參考文獻(xiàn)62-65
• 致謝65-67
• 攻讀學(xué)位期間科研情況67

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本文編號(hào)：455386