目的:構(gòu)建內(nèi)皮細胞BRCA1特異性敲除(endothelial cells-specific BRCA1homozygous knockout,EC-BRCA1^-/-)小鼠和p21基因敲除(p21^-/-)小鼠放射性心臟損傷（radiation-induced heart disease,RIHD）模型,提取原代EC-BRCA1^-/-小鼠心臟微血管內(nèi)皮細胞(cardiac microvascular endothelial cells-BRCA1^-/-,CMEC-BRCA1^-/-),探討B(tài)RCA1/p21基因敲除對小鼠RIHD的影響。方法:1制備并繁殖p21^-/-小鼠和EC-BRCA1^-/-小鼠,鑒定并篩選p21^-/-小鼠和EC-BRCA1^-/-小鼠作為實驗組,p21^+/-小鼠和EC-BRCA1^+/-小鼠作為相應(yīng)對照組。2采用小動物輻射研究平臺對p21...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 引言
第2章 材料
    2.1 實驗動物
    2.2 主要試劑
    2.3 主要實驗設(shè)備
    2.4 主要試劑配制
        2.4.1 PBS(pH7.2)
        2.4.2 0.01M TBS
        2.4.3 TBE電泳液
        2.4.4 鼠尾裂解液(10ml)
        2.4.5 10×垂直電泳緩沖液
        2.4.6 1×轉(zhuǎn)膜緩沖液
        2.4.7 10×TBST
        2.4.8 5%脫脂牛奶封閉液
        2.4.9 0.1%BSA/dPBS
        2.4.10 內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基
第3章 方法
    3.1 EC-BRCA1^-/-小鼠和p21^-/-小鼠的繁殖及鑒定
        3.1.1 小鼠繁殖
        3.1.2 小鼠基因型鑒定
    3.2 RIHD小鼠模型構(gòu)建
    3.3 心功能檢測
    3.4 心臟微血管密度檢測
    3.5 心臟組織缺氧檢測
    3.6 凋亡檢測
    3.7 原代心臟微血管內(nèi)皮細胞提取
        3.7.1 制備CD31 抗體結(jié)合的磁珠
        3.7.2 從新生小鼠分離心臟血管內(nèi)皮細胞
        3.7.3 再次分選心臟內(nèi)皮細胞
    3.8 BRCA1 蛋白及P21 蛋白檢測
        3.8.1 總蛋白提取
        3.8.2 Western Blot步驟
    3.9 統(tǒng)計學(xué)方法
第4章 結(jié)果
    4.1 P21^-/-小鼠和EC-BRCA1^-/-小鼠基因鑒定
    4.2 小鼠RIHD模型建立
    4.3 P21 基因敲除對小鼠RIHD的影響
        4.3.1 P21^-/-小鼠心臟輻射后生存期縮短
        4.3.2 P21^-/-致小鼠輻射后心臟結(jié)構(gòu)重塑和功能下降
        4.3.3 P21^-/-致小鼠輻射后心臟微血管密度下降
        4.3.4 P21^-/-致小鼠輻射后心臟組織缺氧
        4.3.5 P21^-/-致小鼠輻射后心臟細胞凋亡
        4.3.6 小結(jié)
    4.4 內(nèi)皮細胞BRCA1 敲除對小鼠RIHD的影響
        4.4.1 EC-BRCA1^-/-致小鼠輻射后心臟結(jié)構(gòu)重塑和功能下降
        4.4.2 EC-BRCA1^-/-致小鼠照射后心臟微血管密度下降
        4.4.3 EC-BRCA1^-/-致小鼠照射后心臟組織缺氧加重
        4.4.4 EC-BRCA1^-/-致小鼠照射后心臟細胞凋亡加重
        4.4.5 小結(jié)
    4.5 原代細胞CMEC-BRCA1^-/-中P21 蛋白表達下降
第5章 討論
第6章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
致謝
參考文獻
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻



本文編號：4036634