目的： 探討miR-34a/KLF4在X射線外照射誘發(fā)小鼠肝細胞凋亡時的調(diào)節(jié)作用機制,為進一步闡明miR-34a在電離輻射損傷發(fā)生中的作用提供實驗依據(jù),并推動以其為靶點的輻射損傷救治新手段的探索。 方法： 1.雙熒光素酶活性實驗檢測miR-34a對KLF4的靶向作用。對數(shù)生長期的小鼠肝細胞瞬時轉(zhuǎn)染miR-34a模擬物和抑制劑后,Real-Time PCR方法檢miR-34a和KLF4mRNA表達,western blot蛋白印記法檢測KLF4蛋白表達。 2.對數(shù)生長期的小鼠肝細胞,經(jīng)10Gy X射線照射后不同時間點收集細胞,采用流式細胞儀檢測細胞凋亡變化,Real-Time PCR方法檢測miR-34a表達。瞬時轉(zhuǎn)染miR-34a模擬物和抑制劑后,流式細胞儀檢測10Gy X射線照射小鼠肝細胞凋亡變化。慢病毒干擾KLF4后,流式細胞儀檢測10Gy X射線照射小鼠肝細胞凋亡變化。 結(jié)果： 1.生物信息學(xué)軟件預(yù)測,發(fā)現(xiàn)miR-34a在KLF4-3’UTR有一個序列保守的潛在靶位點。為了驗證miR-34a和KLF4的靶點作用關(guān)系,構(gòu)建了含KLF4-3’UTR結(jié)合序列的報告基因質(zhì)粒。雙熒光素酶活...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
引言
第一部分 pGL3-KLF4-3'UTR和pGL3-KLF4-3'UTR-MUT質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.1 實驗材料
    1.2 方法
    1.3 實驗結(jié)果
    1.4 討論
第二部分 miR-34a和KLF4的靶作用驗證
    2.1 實驗材料
    2.2 方法
    2.3 結(jié)果
    2.4 討論
第三部分 miR-34a/KLF4對X射線照射小鼠肝細胞凋亡的調(diào)控機制
    3.1 實驗材料
    3.2 方法
    3.3 結(jié)果
    3.4 討論
結(jié)論
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
中英文對照縮略語詞表
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表和待發(fā)表論文
致謝



本文編號：3912651