發(fā)布時間：2017-05-19 17:24

  本文關(guān)鍵詞：SSOs演替用于PMI推斷的法醫(yī)學研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景： 死亡時間(postmortem interval, PMI)推斷一直是法醫(yī)工作的研究重點和熱點,腐敗尸體的PMI推斷更是法醫(yī)學實踐中的難題。微生物在尸體腐敗過程中的作用越來越引起法醫(yī)學者的重視。尸體腐解的原因是昆蟲和微生物共同作用的結(jié)果。尤其在機體死亡至昆蟲接觸尸體之前的時間間隔里,尸體的腐敗分解更是由微生物主導(dǎo)完成的。微生物中能產(chǎn)生腐敗代謝產(chǎn)物的細菌通常稱為特定腐敗微生物(specific spoilage organisms, SSOs)。已有研究表明腐敗過程也是SSOs相互作用和演替的過程,為研究尸體上SSOs的演替規(guī)律進行PMI推斷的法醫(yī)學研究提供了理論和實踐基礎(chǔ)。 目的： 在隔離昆蟲和未隔離昆蟲兩種不同的環(huán)境下,調(diào)查大鼠尸體上SSOs的演替規(guī)律,對比大鼠尸體上口腔、眼周、陰道不同部位SSOs種類差異,分析不同PMI的SSOs種類及數(shù)量變化規(guī)律,尋找具有PMI推斷價值的優(yōu)勢SSOs,探索利用SSOs演替規(guī)律進行PMI推斷的程序和方法。并對人尸體SSOs演替規(guī)律進行PMI推斷的初步探索。 方法： 運用Miseq高通量測序技術(shù),研究PMI=0h,24h,216h時的大鼠尸體口腔SSOs,初步篩選可規(guī)律性演替的菌群。基于該篩選結(jié)果,通過細菌常規(guī)生化鑒定法及16S rDNA分子鑒定法雙向驗證,對比研究大鼠尸體不同部位相關(guān)時間點SSOs種類變化規(guī)律；應(yīng)用細菌分析儀進行菌種半定量計數(shù),進一步驗證不同PMI有規(guī)律演替的菌群。并收集調(diào)查明確PMI的成人尸體上菌種的分布情況,探索利用SSOs演替規(guī)律對人尸體PMI推斷的新途徑。 結(jié)果： Miseq高通量測序結(jié)果在生物分類學種水平上共獲得81個種的SSOs,其中鏈球菌和巴斯德菌在口腔SSOs結(jié)構(gòu)中占主要地位,分別在每個組中占25%以上的序列數(shù)。尸體腐化24h后,大部分SSOs呈現(xiàn)遞減和消失趨勢,而八疊球菌屬及葡萄球菌屬呈遞增的趨勢并成為優(yōu)勢菌,SSOs多樣性顯著降低。通過常規(guī)生化鑒定法對SSOs菌種初步定性與定量并通過16S rDNA分子鑒定雙向驗證,獲取了隔離昆蟲和未隔離昆蟲兩種不同的環(huán)境下,大鼠尸體口腔、眼周和陰道三個不同部位,PMI=0h,24h,216h各個確定時間點上SSOs的詳細演替資料,共發(fā)現(xiàn)7個科(真菌,放線菌,假單胞菌,桿菌,腸桿菌,放線菌,葡萄球菌),并細分為38個種。成人尸體上共發(fā)現(xiàn)了8個科30個種的SSOs,種類和數(shù)量均要低于健康成人,成人和大鼠尸體之間的SSOs分布規(guī)律有著很多的相似性。 結(jié)論：本研究發(fā)現(xiàn)通過Miseq高通量測序,對比分析PMI=0h的樣本M1,PMI=24h的樣本M2以及PMI=216h的樣本M3發(fā)現(xiàn),大鼠尸體在24h內(nèi)口腔SSOs多樣性顯著降低,少數(shù)優(yōu)勢菌群如肺炎鏈球菌(Streptococcus_sp.)和侵肺巴斯德菌(Pasteurella_pneumotropica)等凸顯。而在尸體晚期PMIM3階段出現(xiàn)的優(yōu)勢菌屬為八疊球菌屬(Sporosarcina)及葡萄球菌屬(Staphylococcus)。在尸體各部位SSOs演替過程中豬鏈球菌(Streptococcus suis I)、解乳糖奈瑟菌(Neisseria lactamica)及糞腸球菌(Enterococcus faecalis)演替規(guī)律凸顯。大腸桿菌(Escherichia coli)和奇異變形桿菌(proteus mirabilis)在尸體腐解過程中表現(xiàn)出明顯的演替規(guī)律性和特異性,并初步建立了昆蟲活動與細菌行為在PMI推斷上的交匯點。人和大鼠的尸體之間的細菌演替規(guī)律有著很多的相似性,進一步證實在一定自然環(huán)境條件了所得結(jié)論具有一定的普適性。圖22幅,表2個,參考文獻26篇
【關(guān)鍵詞】：死亡時間推斷 腐敗微生物 高通量測序 細菌演替
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：D919
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 目錄8-10
• 符號說明10-11
• 1 前言11-14
• 2 材料與方法14-20
• 2.1 主要實驗試劑和儀器14-15
• 2.1.1 主要實驗試劑14-15
• 2.1.2 主要自制試劑15
• 2.1.3 主要實驗儀器15
• 2.2 Miseq測序分析,初步篩選目標SSOs15-17
• 2.2.1 測序樣本15-16
• 2.2.2 Miseq測序?qū)嶒灹鞒?/span>16-17
• 2.3 大鼠尸體SSOs鑒定17-19
• 2.3.1 實驗對象17
• 2.3.2 實驗地點17
• 2.3.3 實驗過程17-19
• 2.4 死亡早期成人尸體SSOs鑒定19-20
• 2.4.1 實驗對象19
• 2.4.2 實驗地點19
• 2.4.3 實驗過程19-20
• 3 結(jié)果20-36
• 3.1 技術(shù)路線圖20
• 3.2 Miseq測序分析20-28
• 3.2.1 多樣性指數(shù)分析(Alpha-diversity)20-24
• 3.2.2 群落結(jié)構(gòu)組分圖24-27
• 3.2.3 菌落組成演替分析27-28
• 3.3 SD大鼠尸體外觀演替28-29
• 3.4 SD大鼠細菌演替規(guī)律29-35
• 3.4.1 SD大鼠尸體細菌概況29-31
• 3.4.2 SD大鼠尸體口腔SSOs演替規(guī)律凸顯的菌種31-32
• 3.4.3 SD大鼠尸體眼周演替規(guī)律凸顯的菌種32-33
• 3.4.4 SD大鼠尸體陰道演替規(guī)律凸顯的菌種33-34
• 3.4.5 SD大鼠尸體不同部位演替規(guī)律相似的菌種34-35
• 3.5 死亡早期成人尸體與SD大鼠不同部位SSOs分布35-36
• 4 討論36-39
• 5 結(jié)論39-40
• 參考文獻40-43
• 綜述43-52
• 參考文獻49-52
• 致謝52-53
• 在讀期間發(fā)表論文情況53

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1 謝丹;SSOs演替用于PMI推斷的法醫(yī)學研究[D];中南大學;2014年

  本文關(guān)鍵詞：SSOs演替用于PMI推斷的法醫(yī)學研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：379336