發(fā)布時間：2017-05-19 17:03

  本文關(guān)鍵詞：miR-1和miR-206與下游基因Cx43和HDAC4在大鼠骨骼肌運動性損傷修復(fù)中表達(dá)變化的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的： 本研究通過沿用課題組前人所建立的大鼠運動性骨骼肌損傷修復(fù)的動物模型，連續(xù)檢測大鼠骨骼肌運動后損傷修復(fù)過程中肌肉特異性miRNAs（miR-1和miR-206）的表達(dá)變化，并分別從轉(zhuǎn)錄和翻譯水平觀察其下游靶基因的表達(dá)變化，期望能更好地了解肌肉特異性miRNAs在骨骼肌運動性損傷修復(fù)過程中的作用機制，為豐富和進(jìn)一步完善肌肉再生理論提供新的實驗依據(jù)，為運動性肌損傷、基因診斷和治療等提供新思路。 研究方法： 8周齡健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠72只，體重264.44±11.94g，隨機分為安靜對照組、運動后即刻組、6小時組、12小時組、1天組、2天組、3天組、1周組和2周組，每組8只。除安靜對照組，其余8組大鼠按組進(jìn)行一次持續(xù)性下坡跑訓(xùn)練。跑臺訓(xùn)練坡度為-16o，速度為16m/min，，時間為90min。于運動后即刻、6小時、12小時、1天、2天、3天、1周和2周，麻醉大鼠，取其左側(cè)腓腸肌進(jìn)行HE染色組織學(xué)光鏡觀察，取右側(cè)腓腸肌檢測肌肉特異性miRNAs（miR-1和miR-206）的表達(dá)水平，利用RT-PCR和Western Blot法分別檢測其下游靶基因Cx43、HDAC4的表達(dá)變化。 研究結(jié)果： 1. HE染色結(jié)果 對照組（C組），可見肌纖維呈多邊型，細(xì)胞緊密排列，形態(tài)規(guī)則。肌細(xì)胞膜完整，細(xì)胞核位于肌膜下。運動后即刻（0h組）細(xì)胞出現(xiàn)腫脹，細(xì)胞體積增大呈圓形，細(xì)胞間隙增大。運動后6h、12h、1d到2d組，細(xì)胞持續(xù)腫脹，細(xì)胞間隙較C組稍微減小。運動后3d組，細(xì)胞腫脹最為嚴(yán)重，并且出現(xiàn)大量的炎癥細(xì)胞浸潤，并見有血細(xì)胞滲出。在運動后1w，炎癥細(xì)胞浸潤減少，到2w時細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常，修復(fù)過程基本完成。 2.肌肉特異性miRNAs在大鼠肌肉損傷修復(fù)過程中表達(dá)變化 運動后肌肉特異性miR-1表達(dá)整體變化不明顯，運動后各組與對照組相比結(jié)果差異均無顯著性；miR-206的表達(dá)整體呈上調(diào)趨勢，統(tǒng)計結(jié)果顯示，與安靜對照組相比較，只有運動后1w組miR-206的表達(dá)水平結(jié)果差異具有顯著性（p0.05）。 3. miRNAs下游靶基因在大鼠肌肉損傷修復(fù)過程中的表達(dá)變化 與對照組相比，運動后即刻Cx43、HDAC4mRNA的表達(dá)迅速下調(diào)，隨后各組Cx43、HDAC4mRNA表達(dá)逐漸升高；與對照組相比，HDAC4mRNA表達(dá)在運動后1w組結(jié)果差異具有顯著性（p0.05）；Cx43mRNA表達(dá)在運動后各組結(jié)果差異均無顯著性（p0.05）。 與對照組相比，運動后即刻Cx43、HDAC4蛋白水平的表達(dá)迅速下調(diào)，隨后各組表達(dá)量逐漸升高回到正常水平，但是在運動后3天時再次出現(xiàn)較明顯的下調(diào)；統(tǒng)計結(jié)果顯示，與安靜對照組相比，Cx43蛋白水平在運動后0h、3d組結(jié)果差異具有顯著性（p0.05）；與安靜對照組相比，運動后各組HDAC4蛋白水平結(jié)果差異無顯著性（p0.05）。 結(jié)論： 1本研究在課題組前人成功所建的大鼠骨骼肌運動性微損傷修復(fù)的模型基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)肌肉特異性miR-1在大鼠腓腸肌運動性損傷修復(fù)過程中表達(dá)變化不明顯，miR-206表達(dá)上調(diào)，其下游靶基因Cx43在運動后即刻、運動后3天組表達(dá)變化顯著，提示可能是miR-206通過調(diào)節(jié)Cx43的表達(dá)參與了大鼠腓腸肌的運動性損傷修復(fù)過程。
【關(guān)鍵詞】：大鼠 腓腸肌 損傷修復(fù) miR-1 miR-206 Cx43 HDAC4
【學(xué)位授予單位】：上海體育學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R873
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 英文縮寫詞表9-12
• 第一部分 文獻(xiàn)綜述 miRNAs 在骨骼肌損傷修復(fù)過程中的調(diào)控作用12-19
• 1 miRNAs 的發(fā)現(xiàn)、生成及作用機制12-13
• 2 miRNAs 的組織特異性表達(dá)及肌肉特異性 miRNAs（MyomiRs）13
• 3 miRNAs 在衛(wèi)星細(xì)胞不同狀態(tài)以及生肌分化過程中的作用13-15
• 3.1 miRNAs 在維持衛(wèi)星細(xì)胞靜息態(tài)中的調(diào)節(jié)作用13-14
• 3.2 miRNAs 在衛(wèi)星細(xì)胞增殖過程中的調(diào)節(jié)作用14
• 3.3 miRNAs 在成肌細(xì)胞分化融合過程中的調(diào)節(jié)作用14-15
• 4 miRNAs 在骨骼肌修復(fù)過程中的研究15-16
• 5 miRNAs 在骨骼肌修復(fù)過程中的信號通路16
• 6 結(jié)語16
• 參考文獻(xiàn)16-19
• 第二部分 miR-1 和 miR-206 與下游基因 Cx43 和 HDAC4 在大鼠骨骼肌運動性損傷修復(fù)中表達(dá)變化的研究19-40
• 前言19-20
• 1 研究材料、對象與方法20-29
• 1.1 技術(shù)路線圖20-21
• 1.2 主要試劑21-22
• 1.3 主要儀器與設(shè)備22-24
• 1.4 實驗對象、分組與運動方案24
• 1.4.1 實驗對象24
• 1.4.2 實驗分組24
• 1.4.3 運動方案24
• 1.5 動物取材24
• 1.6 肌組織 HE 染色24-25
• 1.7 RT-PCR 檢測 miRNAs 及其靶基因 mRNA 表達(dá)25-27
• 1.7.1 Trizol RNA 抽提及質(zhì)量檢測方法25
• 1.7.2 cDNA 合成25-26
• 1.7.3 實時定量 PCR 反應(yīng)的詳細(xì)過程26-27
• 1.7.4 實時定量 PCR 使用引物的列表27
• 1.8 Western blot 法檢測 miRNAs 下游靶基因蛋白表達(dá)27-29
• 1.8.1 western blot 所需試劑配置27-28
• 1.8.2 組織總蛋白的提取28
• 1.8.3 測定蛋白含量28
• 1.8.4 SDS-PAGE 電泳28
• 1.8.5 轉(zhuǎn)膜28-29
• 1.8.6 免疫反應(yīng)29
• 1.8.7 凝膠圖像處理29
• 1.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理29
• 2 結(jié)果29-33
• 2.1 腓腸肌 HE 染色29-30
• 2.2 大鼠骨骼肌運動性損傷修復(fù)過程中肌肉特異性 miRNAs 表達(dá)變化30-31
• 2.3 肌肉特異性 miRNAs 的下游靶基因的表達(dá)變化31-33
• 2.3.1 肌肉特異性 miRNAs 的下游靶基因 mRNA 水平的表達(dá)變化31-32
• 2.3.2 肌肉特異性 miRNAs 的下游靶基因蛋白水平的表達(dá)變化32-33
• 3 分析討論33-37
• 3.1 大鼠骨骼肌運動性損傷修復(fù)模型的建立33
• 3.2 參與肌肉運動性損傷修復(fù)的 miRNAs33-35
• 3.3 肌肉特異性 miRNAs 在運動性損傷后肌肉再生過程中的作用35-37
• 3.3.1 miRNAs 靶基因 mRNA 與蛋白表達(dá)的變化趨勢35-36
• 3.3.2 運動性損傷修復(fù)過程中兩個特殊的時間點36-37
• 4 結(jié)論37
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 致謝40

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張勝年,陸愛云;骨骼肌運動損傷實驗研究中的動物模型[J];中國運動醫(yī)學(xué)雜志;2000年02期

  本文關(guān)鍵詞：miR-1和miR-206與下游基因Cx43和HDAC4在大鼠骨骼肌運動性損傷修復(fù)中表達(dá)變化的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：379242