本文關(guān)鍵詞：硫酸鎂防治人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞放射損傷機(jī)制的初步探索，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討硫酸鎂對人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)照射后的存活率、DNA損傷和炎癥反應(yīng)的影響及其可能分子機(jī)制。方法:1.CCK-8法檢測不同濃度的硫酸鎂對HUVEC存活率的影響,篩選合適的硫酸鎂工作濃度;克隆形成實驗檢測硫酸鎂對HUVEC克隆形成能力的影響。2.激光共聚焦顯微鏡觀察X射線照射后不同時間HUVEC中γ-H2AX簇集點(diǎn)(foci)的數(shù)量;流式細(xì)胞術(shù)和western blot檢測γ-H2AX蛋白的表達(dá)情況。3.實時熒光定量PCR方法檢測ICAM-1、NF-κB mRNA的表達(dá)水平;流式細(xì)胞術(shù)和細(xì)胞免疫熒光法檢測ICAM-1蛋白的表達(dá)水平;western blot法和細(xì)胞免疫熒光法檢測NF-κB蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果:1.CCK-8檢測結(jié)果顯示:硫酸鎂1.25-6.25 mg/mL濃度范圍內(nèi)對人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞無毒性,且1.25 mg/mL濃度的硫酸鎂能提高照射后的細(xì)胞存活率,大于12.5 mg/mL的硫酸鎂對HUVEC表現(xiàn)出明顯的增殖抑制作用;細(xì)胞克隆形成實驗顯示,12.5 mg/mL及以上濃度硫酸鎂抑制克隆的形成,1.25-2.5 mg/mL濃度范圍內(nèi)硫酸鎂可以減輕X射線對HUVEC克隆形成的抑制。2.細(xì)胞免疫熒光法、流式細(xì)胞術(shù)、western blot法證實γ-H2AX foci焦點(diǎn)數(shù)在照后0.5-1 h達(dá)到高峰,隨著時間的延長foci點(diǎn)數(shù)變少,強(qiáng)度減弱,具有時間依賴性,1.25 mg/mL硫酸鎂作用后可以減少照后foci的數(shù)量,降低γ-H2AX蛋白表達(dá)水平。3.實時熒光定量PCR結(jié)果顯示,X射線能增加NF-κB、ICAM-1 m RNA的表達(dá),而1.25 mg/mL硫酸鎂能有效降低其表達(dá)水平;流式細(xì)胞術(shù)和細(xì)胞免疫熒光法提示硫酸鎂能夠降低X射線引起的ICAM-1蛋白的增加;western blot法和細(xì)胞免疫熒光法提示硫酸鎂能夠抑制NF-κB的核轉(zhuǎn)位。結(jié)論:1.一定濃度的硫酸鎂能夠增加照后HUVEC的存活率,減輕照射引起的DNA損傷。2.硫酸鎂可能通過抑制NF-κB mRNA的表達(dá),阻止NF-κB的核轉(zhuǎn)位來降低ICAM-1 mRNA和蛋白水平的表達(dá),減輕炎癥反應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞 X射線 硫酸鎂 γ-H2AX NF-κB/ICAM-1
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.91;R730.55
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-13
• 第一部分 硫酸鎂對人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響13-21
• 1.1 實驗材料13-14
• 1.1.1 主要試劑及耗材13
• 1.1.2 主要儀器13-14
• 1.2 實驗方法14-16
• 1.2.1 細(xì)胞凍存、復(fù)蘇、培養(yǎng)及照射14-15
• 1.2.2 實驗內(nèi)容15-16
• 1.3 實驗結(jié)果16-19
• 1.4 討論19-21
• 第二部分 硫酸鎂對照射后人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞DNA損傷修復(fù)的影響21-32
• 2.1 實驗材料21-22
• 2.1.1 主要試劑及耗材21-22
• 2.1.2 主要溶液的配制22
• 2.1.3 主要儀器22
• 2.2 實驗方法22-26
• 2.2.1 細(xì)胞凍存、復(fù)蘇、培養(yǎng)及照射22-23
• 2.2.2 實驗內(nèi)容23-26
• 2.3 實驗結(jié)果26-29
• 2.4 討論29-32
• 第三部分 硫酸鎂對照射誘發(fā)的HUVEC中ICAM-1、NF-ΚB表達(dá)的影響32-43
• 3.1 實驗材料32-33
• 3.1.1 主要試劑及耗材32
• 3.1.2 主要溶液的配制32-33
• 3.1.3 主要儀器33
• 3.2 實驗方法33-35
• 3.2.1 細(xì)胞凍存、復(fù)蘇、培養(yǎng)及照射33
• 3.2.2 實驗內(nèi)容33-35
• 3.3 實驗結(jié)果35-39
• 3.4 討論39-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 文獻(xiàn)綜述50-58
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 中英文對照縮略詞表58-60
• 攻讀學(xué)位期間本人出版或公開發(fā)表的論著、論文60-61
• 致謝61-62

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王宇卉,邵福源;細(xì)胞粘附分子與缺血性腦損傷[J];臨床神經(jīng)病學(xué)雜志;2001年03期

2 阮林;韋力;廉春蓉;張文佳;莫立根;李小妹;;全腦照射后血腦屏障改變對放射性腦損傷的影響[J];中國神經(jīng)精神疾病雜志;2011年10期

  本文關(guān)鍵詞：硫酸鎂防治人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞放射損傷機(jī)制的初步探索，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：376063