發(fā)布時間：2017-05-16 08:02

  本文關(guān)鍵詞：束縛應(yīng)激加重擠壓傷大鼠孤束核損傷，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:在司法實踐中,經(jīng)常遇到在交通事故、綁架、刑訊逼供等案件中發(fā)生非致命性損傷經(jīng)歷一段時間后發(fā)生多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)甚至死亡的情況。但是由于損傷程度不足以危及生命,常常由于死亡原因不確定或有爭議,導(dǎo)致案件久拖不決。因此,研究此類損傷對機體重要生命器官形態(tài)和機能的影響對于揭示損傷導(dǎo)致死亡的確切機制具有重要意義。機體在受損傷后為適應(yīng)或保護機體,會出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)。應(yīng)激時機體的神經(jīng)內(nèi)分泌反應(yīng)主要表現(xiàn)為藍斑-交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)(Locus ceruleus-norepinephrine system,LC/NE)和下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)(Hypothalamus-pituitary-adrenal cortex system,HPA)興奮,血中兒茶酚胺(catecholamine,CA)濃度迅速升高,伴隨一系列功能代謝改變,具有重要的防御代償意義。但是如果應(yīng)激原過于強烈或持久,則會導(dǎo)致機體的功能異常、代謝障礙及組織損傷。上述機械性損傷本身是一種應(yīng)激原;此外當(dāng)事人遭受損傷后產(chǎn)生的焦慮、緊張或抑郁等不良情緒,也可作為應(yīng)激原引起機體心理應(yīng)激。束縛應(yīng)激是公認的復(fù)制心理精神應(yīng)激的動物模型,本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn),束縛應(yīng)激可以加重擠壓傷大鼠心臟、肝臟及腎臟損傷,導(dǎo)致MODS,表明強烈的心理應(yīng)激反應(yīng)可能在非致命性機械性損傷導(dǎo)致死亡的過程中發(fā)揮重要作用。孤束核(nucleus tractus solitarius,NTS)為延髓背側(cè)核團之一,存在較多的兒茶酚胺能神經(jīng)元和纖維終末,既參與應(yīng)激反應(yīng)調(diào)控,也是心血管反射的調(diào)節(jié)中樞之一。研究證實,損毀大鼠孤束核神經(jīng)元可以減弱壓力感受器反射、引起心律失常甚至猝死。因此,孤束核在維持心血管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮重要作用。心血管系統(tǒng)功能障礙是司法實踐中常見的死亡機制之一,那么應(yīng)激是否引起孤束核損傷,這是否參與了非致命性機械性損傷導(dǎo)致死亡的機制,目前均未見文獻報道。擠壓傷模型是公認的復(fù)制肢體軟組織挫傷的動物模型,為模擬實際案情,明確應(yīng)激性損傷機制,本實驗將建立束縛應(yīng)激加擠壓傷的復(fù)合模型,探討心理應(yīng)激和軀體應(yīng)激雙重應(yīng)激原刺激對大鼠孤束核的影響,為揭示非致命性機械性損傷導(dǎo)致死亡的機制提供實驗依據(jù)。方法:1健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,體重220~240g,于控制條件下適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,隨機分為四組(每組24只)。①對照組(Con):大鼠于固定時間禁食水(每日8h或10h或12h交替進行)。②束縛應(yīng)激組(Rs):大鼠于固定時間放入束縛應(yīng)激模具內(nèi)進行束縛,同時禁食水(每日8h或10h或12h交替進行)。③擠壓傷組(CI):大鼠用無水乙醚麻醉后,于雙后肢上壓24kg重物,連續(xù)擠壓6小時,此后不再進行擠壓,每日相應(yīng)時間禁食水。④復(fù)合模型組(Com):大鼠連續(xù)擠壓6小時,于當(dāng)日晚開始進行束縛(每日8h或10h或12h交替進行)。通過體重記錄,以評估是否成功建立束縛應(yīng)激模型。通過觀察大鼠擠壓后局部表現(xiàn)、活動狀態(tài)等證明擠壓傷模型是否建立成功。各組每天上午固定時間經(jīng)BP-98A無創(chuàng)血壓計測量血壓。造模21天后用10%水合氯醛腹腔注射麻醉,腹主動脈取血、離心、取上清,用于檢測兒茶酚胺濃度。于冰上迅速取出大腦放入10%的多聚甲醛溶液中固定。腦組織經(jīng)固定制作石蠟切片,進行硫堇染色觀察組織病理學(xué)改變,同時應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色(IHC)方法觀察酪氨酸羥化酶(TH)、膠質(zhì)細胞源性纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和凋亡執(zhí)行者Caspase-3蛋白表達的變化。2數(shù)據(jù)以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)”表示,用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析,各組均數(shù)的比較行單因素方差分析(ANOVA),用最小顯著差法(least significant difference,LSD)或Tamhane’s作兩兩比較,以P0.05為有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果:1體重測量結(jié)果對照組體重逐漸增加,束縛應(yīng)激組體重與對照組相比增長緩慢,P0.001。表明束縛應(yīng)激模型成功建立。2血漿中NE、E的濃度變化擠壓傷組NE、E濃度與對照組相比無統(tǒng)計學(xué)差異。與擠壓傷組相比,束縛應(yīng)激組和復(fù)合模型組血漿中NE、E濃度均明顯升高,P0.001。3酪氨酸羥化酶(TH)免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果對照組孤束核TH有少量表達。與對照組相比,其他各組TH表達水平均明顯升高。其中與擠壓傷組相比,復(fù)合模型組TH陽性細胞數(shù)目明顯增多,P0.001。TH蛋白表達檢測結(jié)果和血漿兒茶酚胺濃度檢測結(jié)果表明,與單純擠壓相比,雙重應(yīng)激原刺激確實可以引起機體更高強度的應(yīng)激反應(yīng)。4硫堇染色結(jié)果對照組孤束核神經(jīng)元中尼氏體分布均勻;擠壓傷組孤束核可見尼氏體消失或位置發(fā)生變化,神經(jīng)元出現(xiàn)不同程度水腫、變形;束縛應(yīng)激組可見少數(shù)神經(jīng)元出現(xiàn)固縮、壞死等病理改變;與擠壓傷組相比,復(fù)合模型組孤束核內(nèi)可見部分神經(jīng)元尼氏體分布不均、消失,多數(shù)神經(jīng)元變形、固縮,深染。5 Caspase-3蛋白免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果硫堇染色發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元有固縮、壞死現(xiàn)象,本研究進一步檢測了凋亡執(zhí)行蛋白Caspase-3的表達。對照組Caspase-3蛋白有少量表達,其他各組Caspase-3蛋白表達均增多。其中與擠壓傷組相比,復(fù)合模型組Caspase-3陽性細胞數(shù)目明顯增加,P0.001。結(jié)合硫堇染色結(jié)果、GFAP和Caspase-3蛋白表達水平變化,本研究認為束縛應(yīng)激加重擠壓傷大鼠孤束核的損傷,促進神經(jīng)元凋亡。6星形膠質(zhì)細胞(GFAP)免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果GFAP是星形膠質(zhì)細胞特異性標(biāo)志物。中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生損傷時,星形膠質(zhì)細胞激活,GFAP表達增強。對照組GFAP蛋白有少量表達,其他各組GFAP表達均增多。其中與擠壓傷組相比,復(fù)合模型組GFAP陽性細胞數(shù)目明顯增多,突起增多變長,P0.001。7血壓測量結(jié)果血壓波動幅度增大是孤束核損傷的標(biāo)志之一。對照組血壓波動較小,總體趨勢平穩(wěn)。與對照組相比,擠壓傷組血壓于擠壓第二天出現(xiàn)明顯下降,隨擠壓后時間延長逐漸升高,于第14天后血壓變化與對照組相比無統(tǒng)計學(xué)差異。束縛應(yīng)激組血壓出現(xiàn)較大幅度波動,與對照組相比具有統(tǒng)計學(xué)差異。與擠壓傷組相比,復(fù)合模型組血壓波動幅度顯著升高,變異程度增大,P0.001。結(jié)論:本研究成功建立了大鼠擠壓傷和束縛應(yīng)激的復(fù)合模型,通過觀察孤束核組織病理學(xué)改變、檢測血壓變異程度、血漿中CA濃度以及孤束核內(nèi)TH、GFAP和Casepase-3蛋白的表達水平,從形態(tài)和功能兩方面證實了束縛應(yīng)激加重擠壓傷大鼠孤束核神經(jīng)元的損傷。
【關(guān)鍵詞】：應(yīng)激 孤束核 兒茶酚胺 TH Caspase3 GFAP
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R642;D919
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-15
• 材料與方法15-23
• 結(jié)果23-25
• 附圖25-33
• 附表33-37
• 討論37-40
• 結(jié)論40
• 參考文獻40-43
• 綜述 星形膠質(zhì)細胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的作用43-58
• 參考文獻50-58
• 致謝58-60
• 個人簡歷60

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 李江山,嚴潔;孤束核與心胃相關(guān)初探[J];中醫(yī)藥導(dǎo)報;2005年04期

2 張寧;抑郁癥應(yīng)激性激素改變的理論模式[J];中國行為醫(yī)學(xué)科學(xué);2003年03期

3 陳澤斌,王述菊,王亞文,吳緒平,王華,張紅星;損毀室旁核及孤束核對電針內(nèi)關(guān)穴抗家兔心肌缺血作用的影響[J];中國中醫(yī)急癥;2005年08期

  本文關(guān)鍵詞：束縛應(yīng)激加重擠壓傷大鼠孤束核損傷，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：370254