本文關鍵詞：束縛應激加重擠壓傷大鼠孤束核損傷，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:在司法實踐中,經(jīng)常遇到在交通事故、綁架、刑訊逼供等案件中發(fā)生非致命性損傷經(jīng)歷一段時間后發(fā)生多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)甚至死亡的情況。但是由于損傷程度不足以危及生命,常常由于死亡原因不確定或有爭議,導致案件久拖不決。因此,研究此類損傷對機體重要生命器官形態(tài)和機能的影響對于揭示損傷導致死亡的確切機制具有重要意義。機體在受損傷后為適應或保護機體,會出現(xiàn)應激反應。應激時機體的神經(jīng)內分泌反應主要表現(xiàn)為藍斑-交感-腎上腺髓質系統(tǒng)(Locus ceruleus-norepinephrine system,LC/NE)和下丘腦-垂體-腎上腺皮質系統(tǒng)(Hypothalamus-pituitary-adrenal cortex system,HPA)興奮,血中兒茶酚胺(catecholamine,CA)濃度迅速升高,伴隨一系列功能代謝改變,具有重要的防御代償意義。但是如果應激原過于強烈或持久,則會導致機體的功能異常、代謝障礙及組織損傷。上述機械性損傷本身是一種應激原;此外當事人遭受損傷后產(chǎn)生的焦慮、緊張或抑郁等不良情緒,也可作為應激原引起機體心理應激。束縛應激是公認的復制心理精神應激的動物模型,本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn),束縛應激可以加重擠壓傷大鼠心臟、肝臟及腎臟損傷,導致MODS,表明強烈的心理應激反應可能在非致命性機械性損傷導致死亡的過程中發(fā)揮重要作用。孤束核(nucleus tractus solitarius,NTS)為延髓背側核團之一,存在較多的兒茶酚胺能神經(jīng)元和纖維終末,既參與應激反應調控,也是心血管反射的調節(jié)中樞之一。研究證實,損毀大鼠孤束核神經(jīng)元可以減弱壓力感受器反射、引起心律失常甚至猝死。因此,孤束核在維持心血管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮重要作用。心血管系統(tǒng)功能障礙是司法實踐中常見的死亡機制之一,那么應激是否引起孤束核損傷,這是否參與了非致命性機械性損傷導致死亡的機制,目前均未見文獻報道。擠壓傷模型是公認的復制肢體軟組織挫傷的動物模型,為模擬實際案情,明確應激性損傷機制,本實驗將建立束縛應激加擠壓傷的復合模型,探討心理應激和軀體應激雙重應激原刺激對大鼠孤束核的影響,為揭示非致命性機械性損傷導致死亡的機制提供實驗依據(jù)。方法:1健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,體重220~240g,于控制條件下適應性喂養(yǎng)一周后,隨機分為四組(每組24只)。①對照組(Con):大鼠于固定時間禁食水(每日8h或10h或12h交替進行)。②束縛應激組(Rs):大鼠于固定時間放入束縛應激模具內進行束縛,同時禁食水(每日8h或10h或12h交替進行)。③擠壓傷組(CI):大鼠用無水乙醚麻醉后,于雙后肢上壓24kg重物,連續(xù)擠壓6小時,此后不再進行擠壓,每日相應時間禁食水。④復合模型組(Com):大鼠連續(xù)擠壓6小時,于當日晚開始進行束縛(每日8h或10h或12h交替進行)。通過體重記錄,以評估是否成功建立束縛應激模型。通過觀察大鼠擠壓后局部表現(xiàn)、活動狀態(tài)等證明擠壓傷模型是否建立成功。各組每天上午固定時間經(jīng)BP-98A無創(chuàng)血壓計測量血壓。造模21天后用10%水合氯醛腹腔注射麻醉,腹主動脈取血、離心、取上清,用于檢測兒茶酚胺濃度。于冰上迅速取出大腦放入10%的多聚甲醛溶液中固定。腦組織經(jīng)固定制作石蠟切片,進行硫堇染色觀察組織病理學改變,同時應用免疫組織化學染色(IHC)方法觀察酪氨酸羥化酶(TH)、膠質細胞源性纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和凋亡執(zhí)行者Caspase-3蛋白表達的變化。2數(shù)據(jù)以“均數(shù)±標準差(Mean±SD)”表示,用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析,各組均數(shù)的比較行單因素方差分析(ANOVA),用最小顯著差法(least significant difference,LSD)或Tamhane’s作兩兩比較,以P0.05為有顯著統(tǒng)計學差異。結果:1體重測量結果對照組體重逐漸增加,束縛應激組體重與對照組相比增長緩慢,P0.001。表明束縛應激模型成功建立。2血漿中NE、E的濃度變化擠壓傷組NE、E濃度與對照組相比無統(tǒng)計學差異。與擠壓傷組相比,束縛應激組和復合模型組血漿中NE、E濃度均明顯升高,P0.001。3酪氨酸羥化酶(TH)免疫組織化學檢測結果對照組孤束核TH有少量表達。與對照組相比,其他各組TH表達水平均明顯升高。其中與擠壓傷組相比,復合模型組TH陽性細胞數(shù)目明顯增多,P0.001。TH蛋白表達檢測結果和血漿兒茶酚胺濃度檢測結果表明,與單純擠壓相比,雙重應激原刺激確實可以引起機體更高強度的應激反應。4硫堇染色結果對照組孤束核神經(jīng)元中尼氏體分布均勻;擠壓傷組孤束核可見尼氏體消失或位置發(fā)生變化,神經(jīng)元出現(xiàn)不同程度水腫、變形;束縛應激組可見少數(shù)神經(jīng)元出現(xiàn)固縮、壞死等病理改變;與擠壓傷組相比,復合模型組孤束核內可見部分神經(jīng)元尼氏體分布不均、消失,多數(shù)神經(jīng)元變形、固縮,深染。5 Caspase-3蛋白免疫組織化學檢測結果硫堇染色發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元有固縮、壞死現(xiàn)象,本研究進一步檢測了凋亡執(zhí)行蛋白Caspase-3的表達。對照組Caspase-3蛋白有少量表達,其他各組Caspase-3蛋白表達均增多。其中與擠壓傷組相比,復合模型組Caspase-3陽性細胞數(shù)目明顯增加,P0.001。結合硫堇染色結果、GFAP和Caspase-3蛋白表達水平變化,本研究認為束縛應激加重擠壓傷大鼠孤束核的損傷,促進神經(jīng)元凋亡。6星形膠質細胞(GFAP)免疫組織化學檢測結果GFAP是星形膠質細胞特異性標志物。中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生損傷時,星形膠質細胞激活,GFAP表達增強。對照組GFAP蛋白有少量表達,其他各組GFAP表達均增多。其中與擠壓傷組相比,復合模型組GFAP陽性細胞數(shù)目明顯增多,突起增多變長,P0.001。7血壓測量結果血壓波動幅度增大是孤束核損傷的標志之一。對照組血壓波動較小,總體趨勢平穩(wěn)。與對照組相比,擠壓傷組血壓于擠壓第二天出現(xiàn)明顯下降,隨擠壓后時間延長逐漸升高,于第14天后血壓變化與對照組相比無統(tǒng)計學差異。束縛應激組血壓出現(xiàn)較大幅度波動,與對照組相比具有統(tǒng)計學差異。與擠壓傷組相比,復合模型組血壓波動幅度顯著升高,變異程度增大,P0.001。結論:本研究成功建立了大鼠擠壓傷和束縛應激的復合模型,通過觀察孤束核組織病理學改變、檢測血壓變異程度、血漿中CA濃度以及孤束核內TH、GFAP和Casepase-3蛋白的表達水平,從形態(tài)和功能兩方面證實了束縛應激加重擠壓傷大鼠孤束核神經(jīng)元的損傷。
【關鍵詞】：應激 孤束核 兒茶酚胺 TH Caspase3 GFAP
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R642;D919
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-15
• 材料與方法15-23
• 結果23-25
• 附圖25-33
• 附表33-37
• 討論37-40
• 結論40
• 參考文獻40-43
• 綜述 星形膠質細胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的作用43-58
• 參考文獻50-58
• 致謝58-60
• 個人簡歷60

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 李江山,嚴潔;孤束核與心胃相關初探[J];中醫(yī)藥導報;2005年04期

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3 陳澤斌,王述菊,王亞文,吳緒平,王華,張紅星;損毀室旁核及孤束核對電針內關穴抗家兔心肌缺血作用的影響[J];中國中醫(yī)急癥;2005年08期

  本文關鍵詞：束縛應激加重擠壓傷大鼠孤束核損傷，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：370254