隨著生命科學(xué)的進步,免疫分析法獲得了不斷的發(fā)展。近來,電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）在免疫分析中成為人們關(guān)注的一個檢測手段。由于電感耦合等離子體質(zhì)譜具有靈敏度高、檢出限低、線性動態(tài)范圍寬、干擾較少等優(yōu)點,并可以進行多元素同時快速分析,因此在高通量的生物免疫檢測方面具有廣泛的應(yīng)用前景。本工作中研究了穩(wěn)定同位素碘標(biāo)記蛋白技術(shù),建立了電感耦合等離子體質(zhì)譜免疫碘標(biāo)記蛋白分析方法,并將該法應(yīng)用到特異性免疫蛋白檢測和致病性菌檢測中。論文共有四個部分組成:1.文獻綜述;2.穩(wěn)定性同位素碘標(biāo)記蛋白;3.碘-127標(biāo)記-電感耦合等離子體質(zhì)譜用于免疫分析;4.蒸氣發(fā)生-電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定碘。 第一章通過文獻綜述介紹了免疫分析方法的發(fā)展?fàn)顩r及其在各領(lǐng)域的應(yīng)用,闡述了免疫分析的標(biāo)記方法及進展,并對免疫分析發(fā)展趨勢作了扼要論述,突出了電感耦合等離子體質(zhì)譜在免疫分析應(yīng)用中的可行性。 第二章研究穩(wěn)定性同位素碘-127標(biāo)記蛋白的方法。介紹了不同的碘標(biāo)記方法及其發(fā)展情況,并對各種碘的標(biāo)記方法進行了比較;研究中采用溴代琥珀酰亞胺法實現(xiàn)非放射性碘-127對蛋白的標(biāo)記:溴代琥珀酰亞胺是一種比較溫... 

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文章綜述
    1 引言
    2 標(biāo)記免疫分析
        2.1 放射分析技術(shù)和非同位素標(biāo)記
            2.1.1 放射免疫分析的基本試劑
            2.1.2 放射性同位素的選擇
            2.1.3 放射免疫分析(RIA)的優(yōu)點
            2.1.4 放射免疫分析(RIA)的缺點
        2.2 酶免疫分析
            2.2.1 類型
            2.2.2 原理
        2.3 熒光免疫分析
            2.3.1 類型
        2.4 發(fā)光免疫分析
            2.4.1 類型
            2.4.2 原理
            2.4.3 發(fā)光免疫分析優(yōu)點
        2.5 金屬離子免疫分析
    3 標(biāo)記化合物物的免疫活性
        3.1 免疫活性測定的重要性
        3.2 標(biāo)記化合物的免疫活性測定方法
    4 影響標(biāo)記免疫分析的因素
    5 標(biāo)記免疫分析的標(biāo)準(zhǔn)化問題
        5.1 標(biāo)準(zhǔn)化研究的進展
        5.2 常用“標(biāo)準(zhǔn)化”方法及局限性
    6 標(biāo)記免疫分析的發(fā)展趨勢
        6.1 抗體
        6.2 標(biāo)記方法
        6.3 多元標(biāo)記免疫分析
        6.4 標(biāo)記免疫分析的自動化
    7 電感耦合等離子體質(zhì)譜與免疫分析
    8 本工作設(shè)想
    參考文獻:
第二章 穩(wěn)定性同位素碘標(biāo)記蛋白
    1 引言
    2 蛋白質(zhì)與多肽激素的放射性碘標(biāo)記方法
        2.1 氯胺T法
            2.1.1 原理
            2.1.2 標(biāo)記步驟
            2.1.3 注意事項
        2.2 乳過氧化物酶法(LPO)
            2.2.1 原理
            2.2.2 標(biāo)記步驟
            2.2.3 注意事項
        2.3 �；噭�(Bolton和Hunter試劑)法
            2.3.1 原理
            2.3.2 標(biāo)記步驟
        2.4 Iodogen碘化法
            2.4.1 原理
            2.4.2 方法
            2.4.3 注意事項
    3 標(biāo)記反應(yīng)液中~(125)I-蛋白與~(125)I純化與鑒定
    4 碘標(biāo)記蛋白的貯存
    5 穩(wěn)定性碘標(biāo)記
        5.1 方法與原理
        5.2 實驗部分
            5.2.1 儀器和試劑
            5.2.2 非放射性~(127)I標(biāo)記蛋白
            5.2.3 紫外分光光度測定標(biāo)記后蛋白濃度和計算標(biāo)記比
        5.3 結(jié)果與討論
            5.3.1 溴代琥珀酰胺法(NBS)標(biāo)記蛋白及分離
            5.3.2 氧化劑用量對標(biāo)記的影響
            5.3.3 反應(yīng)時間對標(biāo)記的影響
            5.3.4 溫度因素
            5.3.5 反應(yīng)體積因素
            5.3.6 pH的影響
            5.3.7 碘標(biāo)記羊抗兔蛋白穩(wěn)定性
    6 小節(jié)
    參考文獻
第三章 碘127標(biāo)記-電感耦合等離子體質(zhì)譜用于免疫分析
    第一節(jié) 碘標(biāo)記-電感耦合等離子體質(zhì)譜免疫分析法的建立
        1 引言
        2 實驗部分
            2.1 儀器和試劑
            2.2 等離子體質(zhì)譜儀工作條件
            2.3 實驗方法
                2.3.1 聚苯乙烯板的修飾
                2.3.2 兔抗大腸桿菌的包被
            2.4 結(jié)果與討論
                2.4.1 聚苯乙烯微孔板的修飾
                    2.4.1.1 不同處理的PS板的蛋白吸附效果
                    2.4.1.2 紫外燈照射PS板時間影響
                2.4.2 PS板封閉研究
                2.4.3 免疫反應(yīng)實驗
                    2.4.3.1 方法
                    2.4.3.2 方法的檢出限及重現(xiàn)性
                2.4.4 標(biāo)記碘的解脫
                    2.4.4.1 氨水濃度對溶解碘的影響
                    2.4.4.2 時間對氨水溶解碘的影響
                2.4.5 ICP-MS測定碘
    第二節(jié) 碘標(biāo)記-電感耦合等離子體質(zhì)譜法應(yīng)用于細(xì)菌檢測
        1 引言
        2 方法原理
            2.1 IgG分離提純方法
            2.2 免疫板上細(xì)菌抗原的固定
        3 實驗部分
            3.1 儀器與試劑
            3.2 實驗方法
                3.2.1 抗體提純
                3.2.2 純化蛋白的碘標(biāo)記
                3.2.3 細(xì)菌的固定及與碘標(biāo)蛋白的反應(yīng)
        4 結(jié)果與討論
            4.1 鹽析法-蛋白A親和層析法提純抗體蛋白
            4.2 溴代琥珀酰胺法(NBS)標(biāo)記蛋白及分離
            4.3 3種致病菌的檢測
            4.4 抗體特異性實驗
        參考文獻
第四章 蒸氣發(fā)生-電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定碘
    1 引言
    2 實驗部分
        1.1 儀器與試劑
        1.2 碘蒸氣產(chǎn)生流程圖
        1.3 等離子體質(zhì)譜工作條件
        1.4 實驗方法
            1.4.1 化學(xué)蒸氣發(fā)生
            1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作
            1.4.3 方法檢出限及重現(xiàn)性
    2 結(jié)果與討論
        2.1 載氣流量
        2.2 樣品的進樣量
        2.3 酸及氧化劑的選擇
        2.5 樣品加標(biāo)回收率
        2.6 高價碘檢測
            2.6.1 碘酸根離子檢測
            2.6.2 抗壞血酸影響
    3 小結(jié)
    參考文獻
附錄：攻讀碩士期間發(fā)表論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]125I標(biāo)記抗CD20HI47F（ab’）2性質(zhì)研究[J]. 許元生,熊東生,范冬梅,王金宏,楊銘,紀(jì)慶,劉漢芝,楊純正.  放射免疫學(xué)雜志. 2004(03)
[2]《國外醫(yī)學(xué)》預(yù)防、診斷、治療用生物制品分冊第26卷（2003年）主題索引[J].   國外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊. 2003(06)
[3]國標(biāo)法與快速法測定水碘的對比實驗[J]. 王欣,黃居梅,葉平,劉源.  地方病通報. 2003(03)
[4]稀氨水密封溶解-電感耦合等離子體質(zhì)譜測定土壤沉積物及生物樣品中的碘溴[J]. 馬新榮,李冰,韓麗榮.  巖礦測試. 2003(03)
[5]125I-RC-160的標(biāo)記方法研究及其正常小鼠體內(nèi)的分布特征[J]. 汪靜,王喜青,王連剛,李富軍,鄧敬蘭.  核技術(shù). 2002(11)
[6]125I-RC-160的標(biāo)記及與NCI-H446細(xì)胞體外受體結(jié)合特性的研究[J]. 李富軍,汪靜,鄧敬蘭,李焰.  核技術(shù). 2002(05)
[7]電感耦合等離子體質(zhì)譜法同時測定地質(zhì)樣品中痕量碘溴硒砷的研究 Ⅱ.土壤及沉積物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分析[J]. 李冰,史世云,何紅蓼,馬新榮,溫宏利,呂彩芬.  巖礦測試. 2001(04)
[8]缺血性心肌損傷生化標(biāo)志物檢測的標(biāo)準(zhǔn)化[J]. 王玻,韓靖云.  國外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊. 2001(06)
[9]電感耦合等離子體質(zhì)譜法同時測定地質(zhì)樣品中痕量碘溴硒砷的研究Ⅰ.不同介質(zhì)及不同陰離子形態(tài)對測定信號的影響[J]. 李冰,何紅蓼,史世云,馬新榮,溫宏利,呂彩芬.  巖礦測試. 2001(03)
[10]電感耦合等離子體發(fā)射光譜法測定碘的研究[J]. 范哲鋒,靳曉濤,王亞峰.  光譜學(xué)與光譜分析. 2001(03)



本文編號：3698668