發(fā)布時(shí)間：2021-07-09 10:14

　　目的 輻射能誘導(dǎo)細(xì)胞基因表達(dá)的改變，機(jī)體輻射損傷效應(yīng)是大量基因表達(dá)變化的結(jié)果。骨髓型急性放射病以骨髓等造血組織損傷為基本病變，為深入理解骨髓輻射損傷的分子機(jī)制，有必要研究整體照射條件下，輻射前后骨髓基因表達(dá)的變化。方法 運(yùn)用抑制消減雜交（SSH）和cDNA陣列雜交等分子生物學(xué)技術(shù)，以及序列比對(duì)等生物信息學(xué)分析方法研究大劑量照射后早期小鼠骨髓基因在mRNA水平的差異表達(dá)。結(jié)果成功構(gòu)建C57BL／6J小鼠受7Gyγ射線照射后4hr的骨髓組織相對(duì)未受輻射正常對(duì)照的消減cDNA文庫(kù)，經(jīng)PCR鑒定后，保存480個(gè)含差異表達(dá)cDNA片段的單克隆。7Gyγ射線照射后4hr C57BL／6J小鼠骨髓表達(dá)可能升高的基因有一未命名蛋白、干擾素誘導(dǎo)蛋白（IFIT1）、嗜中性粒蛋白（NPG）、鈣結(jié)合蛋白（S100a8）、珠蛋白α鏈（Hba1）、MPG（甲基嘌呤糖基化酶）、CDKN1A（周期蛋白依賴的蛋白激酶抑制蛋白）、CAT（過(guò)氧化氫酶）、HO1（血紅素加氧酶）和CYP2E1（細(xì)胞色素P450家族成員）；表達(dá)可能降低的有CCT3（分子伴侶3）、NAT3（N-乙酰轉(zhuǎn)移酶3）、NPM1（核仁蛋白）、PTGS1（前... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍軍事科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：98 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

SmartcDNA合成中PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖電泳l一4.照射組(R)eDNA的PCR擴(kuò)增，循環(huán)數(shù)依次為15，18，21，24

實(shí)驗(yàn)方、驅(qū)動(dòng)方cDNA雙鏈經(jīng)Rsal酶切后獲得平均大小為600bp的平末端酶切片段，瓊脂糖電泳顯示cDNA雙鏈酶切前后大小的改變，酶切較為充分(如圖6)。對(duì)酶切產(chǎn)物進(jìn)一步純化，純化產(chǎn)物紫外吸光值比值0D260/0D28。介于1.8一1.9，表明純度較好，將實(shí)驗(yàn)方、驅(qū)動(dòng)方cDNA雙鏈Rsal酶切片段濃度調(diào)整為300ng/u1，以備進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。1.2實(shí)驗(yàn)方cDNA酶切片段與接頭的連接實(shí)驗(yàn)方cDNA酶切片段分為兩份，與不同接頭AdaPtorl、AdaPtorZR連接。為檢測(cè)連接效率進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖電泳，由PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的大小和產(chǎn)量推測(cè)接頭連接效率大于25%，滿足進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的要求，引物PCRPrilnerl與兩接頭序列互補(bǔ)，G3PDH為看家基因

的大小和產(chǎn)量推測(cè)接頭連接效率大于25%，滿足進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的要求，引物PCRPrilnerl與兩接頭序列互補(bǔ)，G3PDH為看家基因，擴(kuò)增循環(huán)數(shù)為25cycle，處于指數(shù)擴(kuò)增期(如圖7)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]電離輻射對(duì)小鼠骨髓造血細(xì)胞周期進(jìn)程的影響[J]. 馬淑梅,付士波,鞠桂芝.  輻射研究與輻射工藝學(xué)報(bào). 2000(02)
[2]細(xì)胞凋亡和細(xì)胞增殖抑制在射線損傷造血功能中的作用[J]. 鄒仲敏,羅成基.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 1997(02)
[3]γ-射線對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞核DNA轉(zhuǎn)錄活性的影響及其機(jī)理研究[J]. 孫志賢,王懷賓,夏壽萱.  細(xì)胞生物學(xué)雜志. 1983(03)



本文編號(hào)：3273555