發(fā)布時間：2021-07-09 10:14

　　目的 輻射能誘導細胞基因表達的改變，機體輻射損傷效應是大量基因表達變化的結果。骨髓型急性放射病以骨髓等造血組織損傷為基本病變，為深入理解骨髓輻射損傷的分子機制，有必要研究整體照射條件下，輻射前后骨髓基因表達的變化。方法 運用抑制消減雜交（SSH）和cDNA陣列雜交等分子生物學技術，以及序列比對等生物信息學分析方法研究大劑量照射后早期小鼠骨髓基因在mRNA水平的差異表達。結果成功構建C57BL／6J小鼠受7Gyγ射線照射后4hr的骨髓組織相對未受輻射正常對照的消減cDNA文庫，經PCR鑒定后，保存480個含差異表達cDNA片段的單克隆。7Gyγ射線照射后4hr C57BL／6J小鼠骨髓表達可能升高的基因有一未命名蛋白、干擾素誘導蛋白（IFIT1）、嗜中性粒蛋白（NPG）、鈣結合蛋白（S100a8）、珠蛋白α鏈（Hba1）、MPG（甲基嘌呤糖基化酶）、CDKN1A（周期蛋白依賴的蛋白激酶抑制蛋白）、CAT（過氧化氫酶）、HO1（血紅素加氧酶）和CYP2E1（細胞色素P450家族成員）；表達可能降低的有CCT3（分子伴侶3）、NAT3（N-乙酰轉移酶3）、NPM1（核仁蛋白）、PTGS1（前... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學院北京市

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

SmartcDNA合成中PCR擴增產物的瓊脂糖電泳l一4.照射組(R)eDNA的PCR擴增，循環(huán)數(shù)依次為15，18，21，24

實驗方、驅動方cDNA雙鏈經Rsal酶切后獲得平均大小為600bp的平末端酶切片段，瓊脂糖電泳顯示cDNA雙鏈酶切前后大小的改變，酶切較為充分(如圖6)。對酶切產物進一步純化，純化產物紫外吸光值比值0D260/0D28。介于1.8一1.9，表明純度較好，將實驗方、驅動方cDNA雙鏈Rsal酶切片段濃度調整為300ng/u1，以備進一步實驗。1.2實驗方cDNA酶切片段與接頭的連接實驗方cDNA酶切片段分為兩份，與不同接頭AdaPtorl、AdaPtorZR連接。為檢測連接效率進行PCR擴增，擴增產物進行瓊脂糖電泳，由PCR擴增產物的大小和產量推測接頭連接效率大于25%，滿足進一步實驗的要求，引物PCRPrilnerl與兩接頭序列互補，G3PDH為看家基因

的大小和產量推測接頭連接效率大于25%，滿足進一步實驗的要求，引物PCRPrilnerl與兩接頭序列互補，G3PDH為看家基因，擴增循環(huán)數(shù)為25cycle，處于指數(shù)擴增期(如圖7)。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]電離輻射對小鼠骨髓造血細胞周期進程的影響[J]. 馬淑梅,付士波,鞠桂芝.  輻射研究與輻射工藝學報. 2000(02)
[2]細胞凋亡和細胞增殖抑制在射線損傷造血功能中的作用[J]. 鄒仲敏,羅成基.  第三軍醫(yī)大學學報. 1997(02)
[3]γ-射線對哺乳動物細胞核DNA轉錄活性的影響及其機理研究[J]. 孫志賢,王懷賓,夏壽萱.  細胞生物學雜志. 1983(03)



本文編號：3273555