目的 探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基（hUC-MSCs-CM）干預(yù)對輻射誘導(dǎo)小鼠海馬體神經(jīng)元細(xì)胞（HT22）凋亡及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK-ATF4-CHOP通路的影響,闡明其相關(guān)的作用機(jī)制,為放射性腦損傷（RBI）的防治提供新思路。方法 1采用酶消化法分離培養(yǎng)hUC-MSCs,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),流式鑒定細(xì)胞表型。選取生長對數(shù)期良好的第3代hUC-MSCs用無血清的IMEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)48h,收集上清制備hUC-MSCs-CM。2采用6MV-XRay直線加速器照射HT22細(xì)胞制備放射性神經(jīng)元損傷模型,分別用hUC-MSCs-CM和PERK磷酸化抑制劑GSK2606414干預(yù),設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)分5組:空白對照組（Control組）、單純照射組（RT 組）、照射+hUC-MSCs-CM 組（RT+MSCs-CM 組）、單純 hUC-MSCs-CM 組（MSCs-CM 組）、照射+GSK2606414 組（RT+GSK2606414 組）。各組經(jīng)上述刺激培養(yǎng)24h后,采用倒置顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,采用Annexin V/PI雙染色法流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞凋亡率,采用Western Bl... 

【文章來源】：華北理工大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

倒置顯微鏡下第3代hUC-MSCs細(xì)胞形態(tài)表現(xiàn)（100×）

第1章實(shí)驗(yàn)研究-15-1.2.1.2hUC-MSCs表面抗原鑒定流式細(xì)胞儀鑒定表面抗原結(jié)果顯示：hUC-MSCs表達(dá)基質(zhì)細(xì)胞相關(guān)的表面抗原CD73、CD90和CD105；不表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)記的CD11b、CD34，不表達(dá)CD19，不表達(dá)人類白細(xì)胞共同抗原CD45和MHC-Ⅱ類HLA-DR（見圖2）。圖2hUC-MSCs表面抗原鑒定結(jié)果1.2.2不同輻射劑量對HT22細(xì)胞增殖活力的影響采用6-MV-XRay直線加速器分別給予0、5、10、15Gy射線照射，CCK-8法檢測各實(shí)驗(yàn)組24h后的細(xì)胞活力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表示：經(jīng)5、10、15Gy射線照射后的HT22細(xì)胞24h后細(xì)胞活力發(fā)生了不同的變化，與空白對照組相比，5、10、15Gy劑量組細(xì)胞存活率較均有所下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（結(jié)果見圖3）。同時(shí)，10Gy劑量照射后24h細(xì)胞存活率與其他實(shí)驗(yàn)組相比在50%左右，遂選取10Gy射線劑量進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。1.2.3不同濃度GSK2606414預(yù)處理對輻射后HT22細(xì)胞增殖活力的影響GSK2606414是一種新型、高效、高選擇性的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK蛋白抑制劑，可顯著抑制PERK活性。經(jīng)不同濃度GSK2606414（0、0.5、1.0、2.0μmol/L）預(yù)處理后，采用CCK-8檢測輻射后HT22細(xì)胞24h細(xì)胞存活率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表示：與Control組相比，0.5、1.0、2.0μmol/L組細(xì)胞存活率均升高，其中1.0μmol/L組與其他各組相比，細(xì)胞存活率最高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（結(jié)果見圖4），

華北理工大學(xué)碩士學(xué)位論文-16-遂選取1.0μmol/LGSK2606414抑制劑濃度為最適濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。注：**表示與0Gy組相比，HT22細(xì)胞存活率降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。圖3不同輻射劑量對HT22細(xì)胞24h存活率的影響注：*表示與其余各組相比，HT22細(xì)胞存活率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。圖4不同濃度GSK2606414預(yù)處理對輻射后HT22細(xì)胞24h細(xì)胞存活率的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]細(xì)胞自噬與神經(jīng)退行性疾病機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 馮會超,陳乃耀.  臨床與病理雜志. 2018(03)



本文編號：3134903