本文關(guān)鍵詞：RCCS模擬微重力對小鼠肝Kupffer細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景和目的我國載人航天工程已處于關(guān)鍵時(shí)期,要實(shí)現(xiàn)長期駐留太空的目標(biāo),維持航天員的健康、安全和高效的工作能力至關(guān)重要。失重是制約人類長期駐留太空的主要因素,一方面失重使機(jī)體發(fā)生一系列生理病理變化,包括骨質(zhì)減少、肌肉萎縮、心血管紊亂和免疫功能低下等,另一方面失重會(huì)導(dǎo)致微生物生物學(xué)特性改變,多方面的因素增加了航天員患感染性疾病的風(fēng)險(xiǎn)。肝臟是人體重要的生化代謝、解毒和免疫器官,枯否細(xì)胞(Kupffer Cells,KCs)是肝臟的巨噬細(xì)胞,是全身單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的重要組成部分,具有吞噬、分泌和免疫功能,在全身尤其是肝臟疾病發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。模擬微重力條件下肝KCs的研究尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用RCCS培養(yǎng)系統(tǒng)(Rotary Cell Culture System,RCCS)作為微重力模型,探討失重對肝臟KCs的影響,旨在為當(dāng)前及今后載人航天飛行中出現(xiàn)的相關(guān)醫(yī)學(xué)問題提供對策思路和科學(xué)依據(jù)。研究方法采用RCCS培養(yǎng)系統(tǒng)建立小鼠肝KCs模擬微重力培養(yǎng)體系,將小鼠肝原代KCs隨機(jī)分為模擬微重力(simulated microgravity,SMG)組和正常重力(normal gravity,NG)組,SMG組旋轉(zhuǎn)器軸心與地面平行,NG組回轉(zhuǎn)器軸心與地面垂直。倒置相差顯微鏡下觀察小鼠肝KCs的形態(tài)和生長情況,于培養(yǎng)第3 d、5 d、7 d收獲細(xì)胞,血球計(jì)數(shù)板細(xì)胞計(jì)數(shù),流式細(xì)胞儀檢測小鼠肝KCs的細(xì)胞周期,qPCR和Western Blotting技術(shù)分別檢測小鼠肝KCs的PCNA、Ki-67、ERK、CDK2及Cyclin B基因和蛋白表達(dá)水平,掃描電鏡觀察小鼠肝KCs的表面結(jié)構(gòu),透射電鏡觀察小鼠肝KCs超微結(jié)構(gòu),激光共聚焦顯微鏡觀察小鼠肝KCs細(xì)胞微絲骨架熒光強(qiáng)度的變化。結(jié)果細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示,培養(yǎng)第3 d時(shí)SMG組明顯低于NG組(2.59±0.13 vs.3.10±0.15,p0.05),培養(yǎng)第5d、7d時(shí)smg組明顯高于ng組(6.92±0.35vs.5.87±0.17,p0.05;8.41±0.27vs.6.54±0.26,p0.05)。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示,培養(yǎng)第3d時(shí)smg組g0/g1期明顯高于ng組(78.10±0.22vs.59.69±1.19,p0.05),s期、g2/m期明顯低于ng組(11.97±0.43vs.27.63±0.88,p0.05;9.93±0.27vs.12.68±0.42,p0.05);培養(yǎng)第5d時(shí),smg組g0/g1期低于ng組(69.52±1.48vs.74.83±0.66,p0.05),s期、g2/m期高于ng組(21.18±1.47vs.17.25±0.36,p0.05;9.30±0.37vs.7.92±0.38,p0.05);培養(yǎng)第7d時(shí),smg組g0/g1期依然低于ng組(73.86±1.91vs.81.70±1.29,p0.05),s期、g2/m期亦高于ng組((18.88±1.94vs.12.07±0.84,p0.05;26±0.24vs.6.23±0.55,p0.05)。qpcr結(jié)果顯示,與ng組相比,smg組pcna、ki-67、erk、cdk2以及cyclinb基因表達(dá)在培養(yǎng)3d時(shí)均下調(diào),5d和7d時(shí)呈現(xiàn)明顯上調(diào)趨勢。westernblotting檢測結(jié)果顯示,小鼠肝kcs培養(yǎng)3d時(shí),與ng組相比較,smg組的pcna、ki-67、p-erk、cdk2以及cyclinb1蛋白表達(dá)量均較低(p0.05);細(xì)胞培養(yǎng)5d時(shí),smg組的pcna、ki-67、p-erk、cdk2以及cyclinb1蛋白表達(dá)量高于ng組(p0.05);模擬微重力7d時(shí),pcna、ki-67、p-erk、cdk2以及cyclinb1蛋白表達(dá)量進(jìn)一步變化,蛋白表達(dá)量明顯高于ng組(p0.05)。掃描電鏡結(jié)果顯示,ng組和smg組的小鼠肝kcs貼附在微載體上,細(xì)胞呈橢圓形或圓形或梭形,細(xì)胞表面有很多細(xì)胞突起,細(xì)胞與細(xì)胞之間相互連接聚集成團(tuán),細(xì)胞伸出細(xì)細(xì)的偽足或傘形貼于微載體表面,隨著時(shí)間的延長,微載體上貼附的細(xì)胞逐漸增多,尤其是第7d微載體上的細(xì)胞最多,ng組與smg組細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)無明顯差異。透射電鏡結(jié)果顯示,rccs模擬微重力培養(yǎng)小鼠肝kcs5d時(shí),ng組粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中度擴(kuò)張,線粒體固縮;smg組粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕微擴(kuò)張外未見明顯異常;7d時(shí),ng組粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張更加明顯,部分細(xì)胞線粒體腫脹、空化;smg組粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張,線粒體出現(xiàn)固縮。激光共聚焦微絲熒光強(qiáng)度結(jié)果顯示,小鼠肝kcs培養(yǎng)第3d時(shí),smg組的熒光強(qiáng)度相對于ng組較弱,隨著時(shí)間的延長,ng組和smg組的熒光強(qiáng)度均有所降低,ng組的熒光強(qiáng)度衰退相對于smg組明顯,在第5dsmg組的熒光強(qiáng)度高于ng組,至第7d時(shí)smg組的熒光強(qiáng)度明顯優(yōu)于ng組。結(jié)論在RCCS模擬失重應(yīng)激損傷期,小鼠肝KCs的增殖功能受到抑制,一定時(shí)相后其增殖能力在相關(guān)基因蛋白的參與調(diào)節(jié)下得以恢復(fù)并被激活強(qiáng)化。在模擬微重力條件下,小鼠肝KCs的形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)亦發(fā)生變化。模擬微重力影響小鼠肝KCs增殖、形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)的機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：模擬微重力 RCCS 肝臟 枯否細(xì)胞 增殖 超微結(jié)構(gòu)
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R852.22
【目錄】：

• 縮略詞表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 第一部分 小鼠肝Kupffer細(xì)胞RCCS微載體培養(yǎng)體系的建立15-24
• 引言15
• 材料與方法15-21
• 結(jié)果21-22
• 討論22-24
• 第二部分 RCCS模擬微重力對小鼠肝Kupffer細(xì)胞增殖影響的研究24-51
• 引言24
• 材料與方法24-34
• 結(jié)果34-48
• 討論48-51
• 第三部分 模擬微重力對小鼠肝Kupffer細(xì)胞形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)的影響51-59
• 引言51
• 材料與方法51-53
• 結(jié)果53-57
• 討論57-59
• 全文結(jié)論59-62
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 個(gè)人簡歷66-67
• 致謝67-68
• 綜述68-79
• 參考文獻(xiàn)74-79

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本文編號(hào)：309158