MDM2-p53-p21通路具有阻滯細(xì)胞周期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和促進(jìn)DNA修復(fù)作用,從而避免受損DNA堆積,維持遺傳的穩(wěn)定性和防止細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。本實(shí)驗(yàn)采用分析細(xì)胞學(xué)及分子生物學(xué)手段,主要研究了電離輻射對(duì)人胚胎腎細(xì)胞（HEK293）中p53信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響及其分子調(diào)控機(jī)制。實(shí)驗(yàn)表明,大劑量電離輻射引起HEK293細(xì)胞發(fā)生死亡,其中以細(xì)胞廣泛壞死為主,而細(xì)胞凋亡率呈降低表現(xiàn)。同時(shí),大劑量電離輻射（2 Gy）作用于HEK293細(xì)胞后可誘導(dǎo)P53、P21和MDM2蛋白表達(dá)上調(diào)。轉(zhuǎn)染p53 shRNA進(jìn)行基因沉默48 h時(shí), P53蛋白的表達(dá)受到完全抑制,而P21蛋白的表達(dá)只受到部分程度的抑制,MDM2蛋白表達(dá)繼續(xù)升高,提示p21在HEK293細(xì)胞中還存在p53非依賴性調(diào)節(jié)通路,而MDM2的持續(xù)高表達(dá)則有助于反向調(diào)控P53蛋白,有利于P53表達(dá)最終趨于回落。以上結(jié)果將為揭示電離輻射對(duì)p53信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響提供重要的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ),并為輻射細(xì)胞效應(yīng)研究提供新的生物學(xué)依據(jù)。 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
前言
英文縮寫
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1. P53 信號(hào)傳導(dǎo)通路
        1.1 p53 基因
        1.2 MDM2 基因
        1.3 p21 基因
        1.4 MDM2-p53-p21 信號(hào)傳導(dǎo)通路
            1.4.1 MDM2 與p53
            1.4.2 p53 與p21
    2. 電離輻射對(duì)P53 信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響
    3. RNA 干擾對(duì)MDM2-P53-P21 信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響
        3.1 RNA 干擾
        3.2 RNA 干擾對(duì)p53 信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響
第二章 材料與方法
    1. 主要試劑及器材
        1.1 試劑
        1.2 器材
    2. 主要儀器
    3. 細(xì)菌菌株及質(zhì)粒
        3.1 細(xì)菌菌株
        3.2 質(zhì)粒
    4. 細(xì)胞株
    5. 照射條件
    6. DNA 的提取及純化
        6.1 DNA 提純
            6.1.1 感受態(tài)細(xì)菌的制備及質(zhì)粒轉(zhuǎn)化篩選（無(wú)菌操作）
            6.1.2 質(zhì)粒的大量提取
            6.1.3 質(zhì)粒的純化
            6.1.4 質(zhì)粒的酶切鑒定
    7. 流式細(xì)胞術(shù)（FLOW CYTOMETRY, FCM）
        7.1 細(xì)胞周期的檢測(cè)
        7.2 蛋白表達(dá)的檢測(cè)
        7.3 細(xì)胞凋亡、細(xì)胞壞死的檢測(cè)
        7.4 細(xì)胞存活率的檢測(cè)
    8. 載體構(gòu)建
        8.1 寡核苷酸的合成與退火
        8.2 線性化載體回收
        8.3 載體連接
    9. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    10. 統(tǒng)計(jì)分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1. X射線照射對(duì)HEK293 細(xì)胞存活率的影響
    2. X射線照射對(duì)HEK293 細(xì)胞凋亡及壞死的影響
        2.1 X射線照射對(duì)HEK293 細(xì)胞凋亡及壞死的時(shí)程變化
        2.2 X射線照射對(duì)HEK293 細(xì)胞后24 h 細(xì)胞凋亡及壞死的劑量效應(yīng)關(guān)系
    3. X射線照射對(duì)HEK293 細(xì)胞周期的影響
        3.1 X射線照射對(duì)HEK293 細(xì)胞周期的時(shí)程變化
        3.2 X射線照射對(duì)HEK293 細(xì)胞后24 h 細(xì)胞周期的劑量效應(yīng)關(guān)系
    4. X射線照射對(duì)HEK293 細(xì)胞P53、P21 及MDM2 蛋白表達(dá)的影響
        4.1 X射線照射對(duì)HEK293 細(xì)胞P53 蛋白表達(dá)的影響
        4.2 X射線照射對(duì)HEK293 細(xì)胞P21 蛋白表達(dá)的影響
            4.2.1 X射線照射對(duì)HEK293 細(xì)胞P21 蛋白表達(dá)的時(shí)程變化
            4.2.2 X射線照射對(duì)HEK293 細(xì)胞后24 h P21 蛋白表達(dá)的劑量效應(yīng)關(guān)系
        4.3 X射線照射對(duì)HEK293 細(xì)胞MDM2 蛋白表達(dá)的影響
            4.3.1 X射線照射對(duì)HEK293 細(xì)胞MDM2 蛋白表達(dá)的時(shí)程變化
            4.3.2 X射線照射對(duì)HEK293 細(xì)胞后24 h MDM2 蛋白表達(dá)的劑量效應(yīng)關(guān)系
    5. X射線對(duì)P53 沉默HEK293 細(xì)胞中P53、MDM2 和P21 蛋白表達(dá)的影響
        5.1 pRNAT-U6.1-shRNA 載體構(gòu)建
            5.1.1 pRNAT-U6.1 載體線性化
            5.1.2 pRNAT-U6.1-shRNA 載體構(gòu)建
            5.1.3 pRNAT-U6.1-shRNA 載體測(cè)序結(jié)果
        5.2 X射線照射p53 沉默HEK293 細(xì)胞后1 h p53、MDM2 和p21 蛋白表達(dá)的變化
        5.3 X射線照射p53 沉默HEK293 細(xì)胞后4 h p53、MDM2 和p21 蛋白表達(dá)的變化
        5.4 X 射線照射p53 沉默HEK293 細(xì)胞后8 h p53、MDM2 和p21 蛋白表達(dá)的變化
        5.4 X 射線照射p53 沉默HEK293 細(xì)胞后8 h p53、MDM2 和p21 蛋白表達(dá)的變化
        5.5 X 射線照射p53 沉默HEK293 細(xì)胞后24 h p53、MDM2 和p21 蛋白表達(dá)的變化
第四章 討論
    1. 電離輻射對(duì)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞壞死及細(xì)胞存活率的影響
    2. 電離輻射對(duì)細(xì)胞周期的影響
    3. 電離輻射對(duì)MDM2-P53-P21 信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響
    4. 電離輻射對(duì)P53 沉默HEK293 細(xì)胞中MDM2-P53-P21 信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
摘要
    1. 電離輻射對(duì)MDM2-P53-P21 信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響
        1.1 電離輻射誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞壞死及細(xì)胞存活率
        1.2 電離輻射對(duì)細(xì)胞周期的影響
        1.3 電離輻射對(duì)p53、p21、MDM2 蛋白表達(dá)的影響
    2. RNA 干擾對(duì)MDM-P53-P21 信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響
致謝
碩士期間發(fā)表及待發(fā)表文章



本文編號(hào)：3056473