MDM2-p53-p21通路具有阻滯細胞周期、誘導細胞凋亡和促進DNA修復作用,從而避免受損DNA堆積,維持遺傳的穩(wěn)定性和防止細胞的轉化。本實驗采用分析細胞學及分子生物學手段,主要研究了電離輻射對人胚胎腎細胞（HEK293）中p53信號傳導通路的影響及其分子調(diào)控機制。實驗表明,大劑量電離輻射引起HEK293細胞發(fā)生死亡,其中以細胞廣泛壞死為主,而細胞凋亡率呈降低表現(xiàn)。同時,大劑量電離輻射（2 Gy）作用于HEK293細胞后可誘導P53、P21和MDM2蛋白表達上調(diào)。轉染p53 shRNA進行基因沉默48 h時, P53蛋白的表達受到完全抑制,而P21蛋白的表達只受到部分程度的抑制,MDM2蛋白表達繼續(xù)升高,提示p21在HEK293細胞中還存在p53非依賴性調(diào)節(jié)通路,而MDM2的持續(xù)高表達則有助于反向調(diào)控P53蛋白,有利于P53表達最終趨于回落。以上結果將為揭示電離輻射對p53信號傳導通路的影響提供重要的細胞學基礎,并為輻射細胞效應研究提供新的生物學依據(jù)。 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
前言
英文縮寫
第一章 文獻綜述
    1. P53 信號傳導通路
        1.1 p53 基因
        1.2 MDM2 基因
        1.3 p21 基因
        1.4 MDM2-p53-p21 信號傳導通路
            1.4.1 MDM2 與p53
            1.4.2 p53 與p21
    2. 電離輻射對P53 信號傳導通路的影響
    3. RNA 干擾對MDM2-P53-P21 信號傳導通路的影響
        3.1 RNA 干擾
        3.2 RNA 干擾對p53 信號傳導通路的影響
第二章 材料與方法
    1. 主要試劑及器材
        1.1 試劑
        1.2 器材
    2. 主要儀器
    3. 細菌菌株及質(zhì)粒
        3.1 細菌菌株
        3.2 質(zhì)粒
    4. 細胞株
    5. 照射條件
    6. DNA 的提取及純化
        6.1 DNA 提純
            6.1.1 感受態(tài)細菌的制備及質(zhì)粒轉化篩選（無菌操作）
            6.1.2 質(zhì)粒的大量提取
            6.1.3 質(zhì)粒的純化
            6.1.4 質(zhì)粒的酶切鑒定
    7. 流式細胞術（FLOW CYTOMETRY, FCM）
        7.1 細胞周期的檢測
        7.2 蛋白表達的檢測
        7.3 細胞凋亡、細胞壞死的檢測
        7.4 細胞存活率的檢測
    8. 載體構建
        8.1 寡核苷酸的合成與退火
        8.2 線性化載體回收
        8.3 載體連接
    9. 細胞轉染
    10. 統(tǒng)計分析
第三章 實驗結果
    1. X射線照射對HEK293 細胞存活率的影響
    2. X射線照射對HEK293 細胞凋亡及壞死的影響
        2.1 X射線照射對HEK293 細胞凋亡及壞死的時程變化
        2.2 X射線照射對HEK293 細胞后24 h 細胞凋亡及壞死的劑量效應關系
    3. X射線照射對HEK293 細胞周期的影響
        3.1 X射線照射對HEK293 細胞周期的時程變化
        3.2 X射線照射對HEK293 細胞后24 h 細胞周期的劑量效應關系
    4. X射線照射對HEK293 細胞P53、P21 及MDM2 蛋白表達的影響
        4.1 X射線照射對HEK293 細胞P53 蛋白表達的影響
        4.2 X射線照射對HEK293 細胞P21 蛋白表達的影響
            4.2.1 X射線照射對HEK293 細胞P21 蛋白表達的時程變化
            4.2.2 X射線照射對HEK293 細胞后24 h P21 蛋白表達的劑量效應關系
        4.3 X射線照射對HEK293 細胞MDM2 蛋白表達的影響
            4.3.1 X射線照射對HEK293 細胞MDM2 蛋白表達的時程變化
            4.3.2 X射線照射對HEK293 細胞后24 h MDM2 蛋白表達的劑量效應關系
    5. X射線對P53 沉默HEK293 細胞中P53、MDM2 和P21 蛋白表達的影響
        5.1 pRNAT-U6.1-shRNA 載體構建
            5.1.1 pRNAT-U6.1 載體線性化
            5.1.2 pRNAT-U6.1-shRNA 載體構建
            5.1.3 pRNAT-U6.1-shRNA 載體測序結果
        5.2 X射線照射p53 沉默HEK293 細胞后1 h p53、MDM2 和p21 蛋白表達的變化
        5.3 X射線照射p53 沉默HEK293 細胞后4 h p53、MDM2 和p21 蛋白表達的變化
        5.4 X 射線照射p53 沉默HEK293 細胞后8 h p53、MDM2 和p21 蛋白表達的變化
        5.4 X 射線照射p53 沉默HEK293 細胞后8 h p53、MDM2 和p21 蛋白表達的變化
        5.5 X 射線照射p53 沉默HEK293 細胞后24 h p53、MDM2 和p21 蛋白表達的變化
第四章 討論
    1. 電離輻射對細胞凋亡、細胞壞死及細胞存活率的影響
    2. 電離輻射對細胞周期的影響
    3. 電離輻射對MDM2-P53-P21 信號傳導通路的影響
    4. 電離輻射對P53 沉默HEK293 細胞中MDM2-P53-P21 信號傳導通路的影響
結論
參考文獻
摘要
    1. 電離輻射對MDM2-P53-P21 信號傳導通路的影響
        1.1 電離輻射誘導細胞凋亡、細胞壞死及細胞存活率
        1.2 電離輻射對細胞周期的影響
        1.3 電離輻射對p53、p21、MDM2 蛋白表達的影響
    2. RNA 干擾對MDM-P53-P21 信號傳導通路的影響
致謝
碩士期間發(fā)表及待發(fā)表文章



本文編號：3056473