研究背景:甲基苯丙胺(Methamphetamine,METH俗稱“冰毒”,是一種新型合成毒品。因其見(jiàn)效快、興奮持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)、價(jià)格低以及合成技術(shù)簡(jiǎn)單等特點(diǎn),已成為全球?yàn)E用排名第二的毒品。METH濫用對(duì)多器官具有毒性損傷作用,其中對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的毒性損傷作用尤為突出。大量的臨床資料表明,METH可對(duì)大腦神經(jīng)元產(chǎn)生直接的損害作用,導(dǎo)致神經(jīng)元變性、壞死,并出現(xiàn)一系列急慢性功能障礙。一直以來(lái),關(guān)于METH神經(jīng)毒性損傷的研究往往與其導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡及自噬相關(guān),但對(duì)METH誘導(dǎo)的神經(jīng)元程序性壞死則未見(jiàn)報(bào)道。研究表明程序性壞死(Necroptosis)與多種疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān),包括創(chuàng)傷、缺血/再灌注損傷、神經(jīng)退行性變等。因此我們對(duì)METH是否可以導(dǎo)致神經(jīng)元發(fā)生程序性壞死及其機(jī)制進(jìn)行了探索,發(fā)現(xiàn)METH可以引起程序性壞死關(guān)鍵信號(hào)分子受體相關(guān)作用蛋白激酶-3(Receptor-interacting protein kinase 3,RIP3)表達(dá)升高及活化,但RIP3 是怎樣介導(dǎo)METH誘導(dǎo)的神經(jīng)元程序性壞死呢?目的:本課題擬探討RIP3在METH誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元程序性壞死的分子機(jī)制,旨在明確了 RIP3在METH介導(dǎo)的細(xì)胞程序性壞死中的作用,完善和補(bǔ)充METH介導(dǎo)的細(xì)胞死亡的機(jī)制,為METH神經(jīng)毒性損傷機(jī)制研究及基因干預(yù)提供理論依據(jù)。方法:本課題擬從吸食METH死者的腦組織標(biāo)本入手,通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察確定METH能引起神經(jīng)元發(fā)生壞死。通過(guò)構(gòu)建體內(nèi)、外METH染毒模型,使用特異性抑制劑,慢病毒干擾干預(yù)RIP3的表達(dá)及活化。采用HE染色,免疫組化染色,Western Blot,TUNEL染色,免疫熒光等技術(shù)檢測(cè)干預(yù)前后RIP3的表達(dá)情況,及其下游信號(hào)通路分子的變化情況探討RIP3在METH誘導(dǎo)的神經(jīng)元程序性壞死作用。結(jié)果:1.吸食METH死者紋狀體區(qū)域出現(xiàn)噬神經(jīng)現(xiàn)象,表明了 METH可以促進(jìn)神經(jīng)元發(fā)生壞死,同時(shí)檢測(cè)到RIP3蛋白的表達(dá)升高。2.METH染毒小鼠模型紋狀體區(qū)域中也發(fā)現(xiàn)了類似現(xiàn)象,同時(shí)高表達(dá)RIP3蛋白的區(qū)域,神經(jīng)元死亡數(shù)量也明顯升高,表明了RIP3在METH誘導(dǎo)的細(xì)胞程序性壞死中起了關(guān)鍵作用。3.敲低RIP3表達(dá)后,紋狀體區(qū)域神經(jīng)元死亡數(shù)量得到了恢復(fù),而且pMLKL(S345)和pDRP1(S616)蛋白表達(dá)以及外周血血漿中NSE含量,線粒體分裂均降低,RIP3可能通過(guò)激活下游蛋白MLKL和DRP1來(lái)介導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生程序性壞死。4.METH可引起原代多巴胺能神經(jīng)元中RIP與RIP3相互作用并激活RIP3同時(shí)激活下游的MLKL蛋白,從而破壞細(xì)胞膜引起細(xì)胞程序性壞死。5.激活的DRP1會(huì)移位到線粒體中,引起線粒體分裂增多,線粒體膜電位下降,ROS產(chǎn)生增多等紊亂現(xiàn)象從而介導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生程序性壞死。結(jié)論:RIP3在METH誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元程序性壞死起了關(guān)鍵性作用,為METH的神經(jīng)毒性治療提供可能的分子干預(yù)靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：D919
【部分圖文】：

領(lǐng)士學(xué)位論文逡逑２結(jié)果逡逑２．１人體標(biāo)本和ＭＥＴＨ染毒小鼠模型紋狀體組織形態(tài)學(xué)改變逡逑在正常狀態(tài)下，膠質(zhì)細(xì)胞在均勻分布在紋狀體中，當(dāng)暴露在ＭＥＴＨ后，ＨＥ逡逑結(jié)果顯示膠質(zhì)細(xì)胞在神經(jīng)元周圍強(qiáng)烈聚集，而免疫組織化學(xué)法檢測(cè)可發(fā)現(xiàn)聚集逡逑在神經(jīng)元周圍的膠質(zhì)細(xì)胞部分為活化的小膠質(zhì)細(xì)胞（噬神經(jīng)細(xì)胞現(xiàn)象），與對(duì)照逡逑組形成明顯差異。這初步證實(shí)了在人或ＭＥＴＨ染毒小鼠模型中，ＭＥＴＨ都可以逡逑導(dǎo)致多巴胺能神經(jīng)元發(fā)生壞死。（圖１－１邋Ａ、Ｂ）逡逑

熱徑炯U型紋狀體組織形態(tài)學(xué)以及Ｒ１Ｐ３蛋白改變逡逑模型中，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和免疫熒光結(jié)果均顯示，給藥組中ＲＩＰ３蛋白的表達(dá)明顯上逡逑升，與對(duì)照組相比具有明顯差異。（＊Ｐ＜0．000ｌ）。（圖１－２Ｂ、Ｃ、Ｄ）逡逑Ａ邐Ｄ逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邐ＭＥＴＴ１逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邐ＭＬｌｌｌ－Ｔｒｅａｔｅｄ逡逑－■ＭＢ逡逑；■■■邋—邋—邋—ｉ逡逑■■■邋＾邋■■逡逑圖１－２邋ＭＥＴＨ處理后，人體標(biāo)本或ＭＥＴＨ染毒小鼠模型紋狀體區(qū)域ＲＩＰ３的表達(dá)升高。逡逑Ｆｉｇ．１－２邋Ｔｈｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｏｆ邋ＲＩＰ３邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋ｉｎｃｒｅａｓｅｄ邋ｉｎ邋ｈｕｍａｎ邋ａｎｄ邋ｍｉｃｅ邋ｅｘｐｏｓｅｄ邋ｔｏ邋ＭＥＴＨ逡逑２．３ＲＩＰ３蛋白表達(dá)升高的區(qū)域，ＴＵＮＥＬ信號(hào)也明顯升高逡逑ＭＥＴＨ處理后，小鼠紋狀體中ＲＩＰ３蛋白的表達(dá)己被證實(shí)明顯升高，同時(shí)在逡逑此區(qū)域中可以檢測(cè)到ＴＵＮＥＬ信號(hào)明顯增強(qiáng)，這初步得出了邋ＲＩＰ３能介導(dǎo)ＭＥＴＨ逡逑誘導(dǎo)的細(xì)胞壞死。（圖１－３）逡逑ＲＩＩＭ邐ＴＵＮＥＬ邐ＯＡＰＩ逡逑ｍｍｍｍ逡逑■■■■逡逑圖１－３邋ＲＩＰ３蛋白表達(dá)升氋區(qū)域中，ＴＵＮＥＬ信號(hào)增強(qiáng)逡逑Ｆｉｇ．１－３邋ｔｈｅ邋ｉｎｃｒｅｍｅｎｔ邋ｏｆ邋ＲＩＰ３邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｓｔｒｉａｔｕｍ邋ｗａｓ邋

邐第二章邋ＲＩＰ３在ＭＥＴＨ誘導(dǎo)的神經(jīng)元程序性壞死的作用邐逡逑２．３動(dòng)物模型中ＭＬＫＬ、ｐＭＬＫＬ（Ｓ３４５）和ＤＲＰ１、ｐＤＲＰｌ（Ｓ６１６）蛋白的表達(dá)變逡逑化情況以及線粒體的改變逡逑（ｌ）Ｗｅｓｔｅｒａ邋ｂｌｏｔ和免疫熒光法檢測(cè)紋狀體細(xì)胞內(nèi)ｐＭＬＫＬ（Ｓ３４５）蛋白表達(dá)情逡逑況。結(jié)果顯示：與ＬＶ－ＧＦＰ組相比，ＬＶ－ＧＦＰ＋ＭＥＴＨ組細(xì)胞內(nèi)ｐＭＬＫＬ（Ｓ３４５）蛋逡逑白的表達(dá)含量明顯升高，而當(dāng)紋狀體細(xì)胞內(nèi)ＲＩＰ３被敲低時(shí)，ｐＭＬＫＬ（Ｓ３４５）蛋白逡逑的表達(dá)也同時(shí)降低（＊Ｐ＜0．000１）。（圖２－４Ａ、Ｂ）邋ＭＬＫＬ曾多次被報(bào)道其磷酸逡逑化狀態(tài)會(huì)形成寡聚體從而破壞細(xì)胞膜完整性，介導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生壞死ＲＩＰ３可能逡逑通過(guò)ＭＬＫＬ的磷酸化介導(dǎo)ＭＥＴＨ誘導(dǎo)的細(xì)胞程序性壞死。而免疫熒光結(jié)果也與逡逑Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ邋結(jié)果相似。（圖邋２－４Ｃ）逡逑Ａ邐Ｂ逡逑２0

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1 張建軍;;警惕止咳水成癮[J];科學(xué)世界;2017年07期

2 劉敏;邢昂;;多巴胺能神經(jīng)元與帕金森病[J];青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2013年01期

3 李s

本文編號(hào)：2831793