研究背景刑事偵查中,判定案發(fā)現(xiàn)場收集的可疑生物斑的組織來源,為犯罪現(xiàn)場重建、案件事實查明提供重要線索。近年來基于mRNA/microRNA的分子生物學方法被廣泛探索,研究證實其特異性、靈敏度較傳統(tǒng)鑒定方法高,但穩(wěn)定性容易受空氣中存在的核糖核酸酶影響,因此難以廣泛應用于法醫(yī)學實踐�；贒NA甲基化標記的方法具有特異性好、靈敏度和穩(wěn)定性高、不額外消耗生物檢材、和法醫(yī)標準試驗室DNA分型平臺相兼容等優(yōu)勢,成為法醫(yī)學界新的研究熱點。人類基因組中存在大量組織特異性差異甲基化區(qū)域(tDMRs),通過比對這些區(qū)域的甲基化狀態(tài)可以鑒定不同的組織類型。近年來法醫(yī)學相關(guān)研究報道了一些體液特異性DNA甲基化標記,可有效鑒定生物斑的組織來源,但依然存在諸多問題,如不同研究篩選出的甲基化標記不一致以及不同體液間甲基化水平容易出現(xiàn)交叉。因此有必要對現(xiàn)有研究結(jié)果通過統(tǒng)一平臺作驗證比較分析,通過采用準確可行的甲基化定量方法,篩選出適用于本地人群的更加高效的體液來源鑒定標記,為建立可靠的體液來源鑒定方法提供一定的參考。方法從相關(guān)文獻報道中選擇五種體液特異性較好的CpG位點作為本次研究的候選標記。以人體外周血、精液、唾液、陰道分泌液和月經(jīng)血五種常見法醫(yī)學體液斑為研究樣本,每種體液斑20例。采用甲基化SNaPshot方法,經(jīng)基因組DNA提取,亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化,PCR擴增,單堿基引物延伸,毛細管電泳分析等步驟,檢測候選CpG位點的甲基化水平。最后對每個候選CpG位點在不同體液的甲基化特異性和個體穩(wěn)定性進行分析,篩選出甲基化體液特異性強且穩(wěn)定性好的CpG位點。CpG位點甲基化水平計算公式為:甲基化%=C峰高/(C峰高+T峰高)×100=G峰高/(G峰高+A峰高)×100。結(jié)果本課題篩選出了9個較為理想的體液特異性DNA甲基化標記:精液特異性低甲基化標記cg22407458-288d,精液特異性高甲基化標記cg05656364-283d;血液特異性高甲基化標記cg08792630,血液特異性未甲基化標記cg26285698+39d和cg26285698-14d;唾液特異性高甲基化標記cg09652652-2d;陰道分泌液特異性高甲基化標記cg26079753-7d;月經(jīng)血特異性甲基化標記cg09696411和cg09696411+25d。結(jié)論本次研究利用復合甲基化SNaPshot的方法驗證篩選出9個在本地人群具有更高體液特異性和個體穩(wěn)定性的DNA甲基化遺傳標記,為構(gòu)建更加高效、可靠的體液來源鑒定方法提供可靠的參考。
【學位單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：D919
【部分圖文】：

圖 2 五種體液 M1 體系甲基化檢測電泳圖2.2.2 M2 體系甲基化檢測電泳圖結(jié)果血液鑒定候選標記 BL1 顯示出較高的血液特異性，在血液中高甲基化（甲基化水平 0.9），在其他體液低甲基化（月經(jīng)血，甲基化水平 0.6）甚至完全未甲基化（精液、唾液和陰道分泌液）。唾液鑒定候選標記 SA1 顯示出極高的唾液特異性，在唾液中高甲基化（甲基化水平 0.85），其他體液完全未甲基化。

圖 3 五種體液 M2 體系甲基化檢測電泳圖2.2.3 M3 體系甲基化檢測圖結(jié)果精液鑒定候選標記 SE4 和 SE3 顯示極高的精液特異性：SE4 在精液中完全甲基化，在其他體液完全未甲基化；SE3 在精液中完全未甲基化，在其他體液完全甲基化。血液鑒定候選標記 BL3 顯示較高的血液特異性，在血液中完全未甲基化，在其他體液中部分甲基化。血液鑒定候選標記 BL5 未顯示血液特異性，幾乎在所有體液中均未甲基化。唾液鑒定候選標記 SA3 顯示精液特異性高甲基化，在精液中高甲基化（甲基化水平 0.9），在其他體液低甲基化（血液、唾液、月經(jīng)血，甲基化水平 0.3），甚至未甲基化（陰道分泌液）。陰道分泌液鑒定候選標記 VF4顯示出陰道分泌液特異性，雖然在陰道分泌液甲基化水平很低（約 0.1），但在其他體液完全未甲基化。

圖 4 五種體液 M3 體系甲基化檢測電泳圖2.2.4 M4 體系甲基化檢測電泳圖結(jié)果血液鑒定候選標記 BL6 并未顯示血液特異性，在血液、陰道分泌液和月經(jīng)中均顯示較低甲基化（甲基化水平約 0.2），在精液和唾液中完全未甲基化；血鑒定候選標記 BL4 顯示出較好的血液特異性，在血液中完全未甲基化，在其他液顯示部分甲基化（陰道分泌液、月經(jīng)血），甚至完全甲基化（精液、唾液）陰道分泌液鑒定候選標記 VF3 顯示精液特異性未甲基化，在其他體液中低甲基（甲基化水平 0.2）。唾液鑒定候選標記 SA2 顯示較高的唾液特異性，在唾液高甲基化（甲基化水平 0.7），其他體液完全未甲基化。月經(jīng)血鑒定候選標記 和 MB2 顯示極高的月經(jīng)血特異性，在月經(jīng)血中高甲基化（甲基化水平約 0.25）其他體液完全未甲基化。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 李永增;謝樹森;陳榮;;人體組織拉曼光譜檢測與技術(shù)進展[J];中國激光醫(yī)學雜志;2011年03期

本文編號：2814307