【摘要】：目的構(gòu)建一套基于連接酶檢測(cè)反應(yīng)(LDR)的熒光標(biāo)記PCR復(fù)合擴(kuò)增體系,為解決高度降解DNA法醫(yī)學(xué)分析提供新的策略。方法選擇8個(gè)單核苷酸多態(tài)性(SNPs)位點(diǎn)(rs10802248、rs10516197、rs10488372、rs2278945、rs4757318、rs4887255、rs4889002和rs9304473),設(shè)計(jì)合成各SNPs位點(diǎn)的LDR探針和連接產(chǎn)物PCR引物,通過(guò)LDR將連接產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,并將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管凝膠電泳,構(gòu)建復(fù)合擴(kuò)增SNPs分型體系。結(jié)果使用熒光標(biāo)記LDR-PCR復(fù)合擴(kuò)增方法,對(duì)不同個(gè)體的8個(gè)SNPs位點(diǎn)進(jìn)行分型,分型結(jié)果與測(cè)序結(jié)果完全一致;對(duì)于甲醛固定石蠟包埋組織(FFPET)檢材高度降解的DNA樣品,熒光標(biāo)記LDR-PCR復(fù)合擴(kuò)增體系能夠?qū)崿F(xiàn)8個(gè)SNPs位點(diǎn)的準(zhǔn)確分型。結(jié)論熒光標(biāo)記LDR-PCR復(fù)合擴(kuò)增方法能夠?qū)?個(gè)SNPs位點(diǎn)進(jìn)行一次性分型,結(jié)果準(zhǔn)確、可靠,是一種簡(jiǎn)單、高效并且較為實(shí)用的SNPs分型新方法,適用于高度降解檢材的檢測(cè)。

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