【摘要】：在現(xiàn)實(shí)生活中時(shí)常會(huì)遇到在遭受重大心理應(yīng)激后發(fā)生精神障礙甚至死亡的案例。例如:在遭受電信詐騙而受到強(qiáng)烈心理應(yīng)激原刺激突發(fā)死亡;因欠債被債權(quán)人控制束縛限制體位發(fā)生死亡;因貪污受賄突然被羈押出現(xiàn)精神障礙甚至死亡;因目睹慘烈交通事故或者自然災(zāi)害而發(fā)生精神障礙。上述案件有著顯著的共同特點(diǎn),即均存在明確的心理應(yīng)激及軀體應(yīng)激因素。我國(guó)司法鑒定對(duì)在遭受強(qiáng)烈心理應(yīng)激或軀體應(yīng)激后導(dǎo)致的機(jī)體損傷及精神障礙的評(píng)估及鑒定還無(wú)確切的標(biāo)準(zhǔn),應(yīng)激導(dǎo)致的精神損傷乃至死亡機(jī)制仍尚不清楚。因缺乏科學(xué)依據(jù),故難以客觀公正地對(duì)上述案件進(jìn)行評(píng)估鑒定,使案件的處理陷入僵局,造成不良的社會(huì)影響。因此,研究應(yīng)激導(dǎo)致的精神損傷機(jī)制是法醫(yī)學(xué)亟待解決的重大科學(xué)問(wèn)題。中樞神經(jīng)系統(tǒng)與應(yīng)激最密切相關(guān),揭示應(yīng)激導(dǎo)致的中樞神經(jīng)系統(tǒng)病理性改變機(jī)制的基礎(chǔ)研究尤為重要。流行病學(xué)調(diào)查顯示,51.2%-60.7%的人一生中至少經(jīng)歷過(guò)一次重大心理應(yīng)激事件,說(shuō)明心理應(yīng)激是人生體驗(yàn)的一部分。經(jīng)歷重大心理應(yīng)激后約7%的人可能會(huì)發(fā)生精神障礙,嚴(yán)重影響生活質(zhì)量和社會(huì)活動(dòng)能力。既往研究表明經(jīng)歷戰(zhàn)爭(zhēng)的士兵在恐懼性刺激時(shí)杏仁核和腦島激活水平明顯升高。對(duì)出征前后士兵大腦功能與結(jié)構(gòu)性神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)連接進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)出征前后大腦杏仁核和內(nèi)側(cè)額葉等功能發(fā)生顯著變化。911恐怖襲擊發(fā)生三年后,研究者發(fā)現(xiàn)目擊者的杏仁核、海馬、前扣帶和前額葉皮層的體積顯著減小,表明杏仁核體積減小和遭遇的生活事件呈顯著地正相關(guān)。2008年汶川大地震后對(duì)幸存者的研究發(fā)現(xiàn),地震25天包括杏仁核在內(nèi)的多腦區(qū)興奮程度增加伴功能連接下降。說(shuō)明嚴(yán)重而持續(xù)的應(yīng)激導(dǎo)致杏仁核在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能方面均發(fā)生了明顯的變化,因此研究杏仁核在應(yīng)激刺激后的變化機(jī)制是重要的科學(xué)問(wèn)題。杏仁核(Amygdala)作為大腦邊緣系統(tǒng)的關(guān)鍵組成部分,在恐懼性情感形成和表達(dá)過(guò)程中發(fā)揮著不可或缺的作用。杏仁核基底外側(cè)核(Basolateral nucleus,BLA)已被大量的研究證實(shí)在恐懼性情緒的學(xué)習(xí)和記憶中發(fā)揮著重要的作用,同時(shí)作為恐懼性神經(jīng)環(huán)路中的關(guān)鍵結(jié)構(gòu),受到廣泛關(guān)注。杏仁核在未受到應(yīng)激刺激的靜息狀態(tài)下呈現(xiàn)出明顯的高抑制狀態(tài),其自發(fā)性放電活動(dòng)明顯弱于周邊腦區(qū),但是在應(yīng)激性精神障礙病人中發(fā)現(xiàn)杏仁核卻處于持續(xù)過(guò)度的興奮狀態(tài)。應(yīng)激導(dǎo)致杏仁核靜息功能狀態(tài)的改變,與其E/I平衡(balance of excitation and inhibition)紊亂有關(guān),同時(shí)腦內(nèi)E/I平衡紊亂還是焦慮癥產(chǎn)生的內(nèi)在原因。γ氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)作為BLA區(qū)最重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì),其參與應(yīng)激導(dǎo)致的E/I失衡的機(jī)制目前尚未完全闡明。因此本研究旨在探明應(yīng)激導(dǎo)致的杏仁核病理性改變及E/I失衡機(jī)制與杏仁核神經(jīng)細(xì)胞(包括GABA能神經(jīng)細(xì)胞)損傷的相關(guān)關(guān)系。我們前期研究初步證實(shí)較長(zhǎng)時(shí)程的應(yīng)激可導(dǎo)致大鼠下丘腦神經(jīng)細(xì)胞的變性死亡,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)相關(guān)蛋白可能參與了下丘腦神經(jīng)細(xì)胞的損傷過(guò)程。ERS是應(yīng)激細(xì)胞發(fā)揮自我保護(hù)的一種機(jī)制,較長(zhǎng)時(shí)程過(guò)度的ERS可造成細(xì)胞的病理性改變。有研究證實(shí)ERS在神經(jīng)退行性疾病導(dǎo)致的神經(jīng)細(xì)胞損傷和發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。缺氧、缺血、能量代謝障礙均可誘發(fā)ERS的發(fā)生。發(fā)生ERS時(shí),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)與未折疊或錯(cuò)誤折疊蛋白結(jié)合,從而使其與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)跨膜蛋白受體雙鏈RNA依賴的蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(PKR-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)、1型跨膜蛋白激酶(inositol requirement 1,IRE1)和激活作用轉(zhuǎn)錄因子6(artificial transcription factor 6,ATF6)解離,從而激活這三條信號(hào)通路,促進(jìn)蛋白質(zhì)的正確折疊,發(fā)揮對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用。但是持續(xù)過(guò)度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可損害內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能,PERK和ATF6的啟動(dòng)又會(huì)促進(jìn)生長(zhǎng)抑制因子(C/EBP homologous protein,CHOP)的激活,增加其表達(dá)量,CHOP的高表達(dá)使得內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激達(dá)到頂峰,可誘導(dǎo)細(xì)胞損傷的發(fā)生。caspase12作為ERS反應(yīng)時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞損傷的關(guān)鍵分子,僅在ERS時(shí)被激活,而在線粒體或死亡受體凋亡過(guò)程中卻不被激活。caspase12從無(wú)活性酶原的形式發(fā)生重組,切割并激活caspase 9酶原,繼而啟動(dòng)caspase3。研究表明,caspase3可以啟動(dòng)凋亡程序,引起細(xì)胞凋亡;也可以通過(guò)裂解蛋白,產(chǎn)生多種片段,對(duì)細(xì)胞造成損傷,引起神經(jīng)細(xì)胞變性死亡。因此,caspase12被認(rèn)為是ERS的標(biāo)志性分子;caspase12和caspase3在導(dǎo)致細(xì)胞損傷中具有重要作用。本研究旨在探明在應(yīng)激導(dǎo)致的杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞損傷中是否存在ERS的參與。在眾多復(fù)制應(yīng)激的動(dòng)物模型中,束縛應(yīng)激是一種不可逃避性心理應(yīng)激模型;冰水游泳則既具有軀體應(yīng)激,也具有心理應(yīng)激。本研究采用束縛加冰水游泳的應(yīng)激模型,以模擬司法實(shí)踐中復(fù)雜的應(yīng)激情況。本研究在建立束縛加冰水游泳應(yīng)激大鼠模型的基礎(chǔ)上,系統(tǒng)觀察大鼠的精神行為學(xué)、神經(jīng)內(nèi)分泌、神經(jīng)病理學(xué)及ERS相關(guān)蛋白的表達(dá)變化,探討應(yīng)激所致的杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞病理變化與神經(jīng)內(nèi)分泌以及精神行為學(xué)之間的相關(guān)關(guān)系,闡明應(yīng)激導(dǎo)致杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞病理性改變的參與機(jī)制。為應(yīng)激導(dǎo)致的精神疾病的評(píng)估及法醫(yī)病理學(xué)鑒定提供理論支持,也可為應(yīng)激性精神障礙的治療提供新的治療靶點(diǎn)。第一部分應(yīng)激導(dǎo)致大鼠杏仁核基底外側(cè)核神經(jīng)細(xì)胞損傷目的:在成功建立束縛加冰水游泳應(yīng)激大鼠模型的基礎(chǔ)上,觀察應(yīng)激大鼠行為學(xué)改變及相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)的變化;通過(guò)HE染色、硫堇染色及可特異性標(biāo)記變性死亡神經(jīng)細(xì)胞的Fluoro-Jade B熒光標(biāo)記染色和免疫組織化學(xué)方法,觀察杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的病理學(xué)改變。方法1采用束縛加冰水游泳建立應(yīng)激大鼠模型。通過(guò)自發(fā)活動(dòng)和高架十字迷宮觀察應(yīng)激行為學(xué)改變。2酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)血清及杏仁核兒茶酚胺以及ATP的含量;采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)杏仁核GABA和GLU及其衍生物的含量;觀察大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌的改變。3通過(guò)HE染色、硫堇染色和Fluoro-Jade B熒光染色和免疫組織化學(xué)方法觀察大鼠杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的病理學(xué)改變。結(jié)果1.自發(fā)活動(dòng)及高架十字迷宮觀察到應(yīng)激大鼠與對(duì)照組相比出現(xiàn)明顯焦慮樣行為(P0.05),且隨應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng),癥狀逐漸加重(P0.01)。2.應(yīng)激大鼠血清兒茶酚胺含量于應(yīng)激第1天迅速升高(P0.01),其后呈逐漸下降,應(yīng)激第21天血清兒茶酚胺仍較對(duì)照組明顯升高(P0.05)。應(yīng)激大鼠杏仁核腎上腺素和去甲腎上腺素則于應(yīng)激后緩慢逐漸升高,于應(yīng)激第1天與對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。應(yīng)激大鼠杏仁核ATP含量于應(yīng)激后呈逐漸下降趨勢(shì),于應(yīng)激后第1天與對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.杏仁核GLU于應(yīng)激后持續(xù)增高,于應(yīng)激第3天較對(duì)照組明顯升高(P0.05),第7天達(dá)高峰,其后略有下降,但較對(duì)照組仍顯著升高(P0.01);杏仁核GABA于應(yīng)激后短期內(nèi)出現(xiàn)波動(dòng),第7天較對(duì)照組明顯下降(P0.05)。GLU/GABA比值于應(yīng)激后第3天較對(duì)照組顯著升高(P0.01),并隨應(yīng)激時(shí)間延長(zhǎng)比值逐漸增大。4.HE染色結(jié)果表明隨著應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng),杏仁核BLA神經(jīng)細(xì)胞逐漸出現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞水腫,組織結(jié)構(gòu)疏松,神經(jīng)細(xì)胞固縮,小膠質(zhì)細(xì)胞增生,并出現(xiàn)衛(wèi)星現(xiàn)象和嗜神經(jīng)現(xiàn)象。5.硫堇染色結(jié)果表明隨著應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng),杏仁核BLA神經(jīng)細(xì)胞逐漸出現(xiàn)結(jié)構(gòu)不清,尼氏體排列不規(guī)則、消失,細(xì)胞固縮深染等現(xiàn)象,并可見衛(wèi)星現(xiàn)象。6.Fluoro-Jade B染色結(jié)果表明杏仁核BLA神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生了變性死亡,且隨著應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng),變性死亡的神經(jīng)細(xì)胞逐漸增多。7.運(yùn)用GABA能神經(jīng)細(xì)胞特異性標(biāo)記蛋白GAD65/67,通過(guò)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果表明長(zhǎng)時(shí)程應(yīng)激可導(dǎo)致杏仁核BLA區(qū)GABA能神經(jīng)細(xì)胞比例下降。小結(jié)1.應(yīng)激可導(dǎo)致大鼠杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的變性死亡。2.應(yīng)激導(dǎo)致的大鼠杏仁核E/I失衡可能與杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的變性死亡有相關(guān)關(guān)系。第二部分兒茶酚胺介導(dǎo)應(yīng)激大鼠杏仁核基底外側(cè)核神經(jīng)細(xì)胞損傷機(jī)制研究目的:腹腔注射酪氨酸羥化酶抑制劑(alpha-methyl-p-tyrosine,AMPT),通過(guò)抑制兒茶酚胺生成,對(duì)比觀察抑制前后血清及杏仁核兒茶酚胺水平、神經(jīng)遞質(zhì)以及ATP含量變化。HE染色、硫堇染色及Fluoro-Jade B熒光標(biāo)記觀察抑制前后杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞病理學(xué)改變差異及caspase12、caspsae3的表達(dá)變化,探討應(yīng)激大鼠是否通過(guò)兒茶酚胺介導(dǎo)了杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞(包括GABA能神經(jīng)細(xì)胞)的損傷及與caspase12、caspsae3的相關(guān)關(guān)系。方法1造模前給予腹腔注射AMPT,采用束縛加冰水游泳建立應(yīng)激大鼠模型。通過(guò)自發(fā)活動(dòng)和高架十字迷宮觀察應(yīng)激大鼠行為學(xué)改變。2酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠血清及杏仁核兒茶酚胺及ATP的含量;采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)杏仁核GABA和GLU及其衍生物的含量。3通過(guò)HE染色、硫堇染色和Fluoro-Jade B熒光染色觀察大鼠杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的病理學(xué)改變。4通過(guò)免疫組織化學(xué)觀察杏仁核BLA區(qū)GABA能神經(jīng)細(xì)胞的表達(dá);免疫組織化學(xué)觀察大鼠杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞caspase12、caspase3的表達(dá)。5運(yùn)用Western blot檢測(cè)大鼠杏仁核caspase12、caspase3蛋白的表達(dá)。6通過(guò)免疫熒光多重標(biāo)記觀察杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞中caspase12、caspase3與GAD65/67的共表達(dá)陽(yáng)性神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果1.自發(fā)活動(dòng)及高架十字迷宮觀察到stress+AMPT組與stress組大鼠相比焦慮樣行為程度明顯減輕(P0.05),但與對(duì)照組和AMPT組相比仍有焦慮樣行為改變(P0.05)。2.stress+AMPT組大鼠血清兒茶酚胺含量明顯低于stress組大鼠(P0.05),但與對(duì)照組相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。stress+AMPT組杏仁核去甲腎上腺素較stress組明顯下降(P0.05),但較對(duì)照組仍明顯升高(P0.01)。stress+AMPT組杏仁核ATP含量較stress組明顯提高(P0.05),但與對(duì)照組相比仍稍降低(P0.05)。3.stress+AMPT組杏仁核GLU含量明顯低于stress組(P0.01);GABA含量顯著高于stress組(P0.01),能有效改善GLU/GABA比值。4.HE染色結(jié)果表明stress+AMPT組杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞固縮數(shù)量,小膠質(zhì)細(xì)胞增生程度與stress組相比明顯減輕。5.硫堇染色結(jié)果表明stress+AMPT組杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞變性現(xiàn)象較stress組相比明顯減輕。6.Fluoro-Jade B染色結(jié)果表明stress+AMPT組杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞變性死亡數(shù)量較stress組明顯減少(P0.01);但與對(duì)照組相比仍有所增多(P0.01)。7.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示stress+AMPT組杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞caspase12、caspsae3表達(dá)量較stress組相比明顯降低(P0.01);但與對(duì)照組相比仍明顯升高(P0.01)。8.Western blot檢測(cè)蛋白半定量結(jié)果顯示,stress+AMPT組杏仁核caspase12、caspsae3表達(dá)量與stress組相比降低(P0.05);但與對(duì)照組相比仍有所增加(P0.05)。與免疫組織化學(xué)染色結(jié)果基本一致。9.杏仁核BLA區(qū)GABA能神經(jīng)細(xì)胞GAD65/67與caspase12、caspsae3免疫熒光多重標(biāo)記(激光共聚焦)顯微鏡觀察:stress+AMPT組GAD65/67與caspase12、caspsae3共表達(dá)的陽(yáng)性神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量較stress組明顯減少(P0.05)。10.GAD65/67免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,stress+AMPT組杏仁核BLA區(qū)GABA能神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量較stress組明顯增多(P0.05)。小結(jié)1.酪氨酸羥化酶抑制劑AMPT可降低應(yīng)激大鼠血清以及杏仁核兒茶酚胺水平,改善杏仁核E/I比值,能有效地改善應(yīng)激大鼠焦慮樣行為;2.酪氨酸羥化酶抑制劑AMPT可降低應(yīng)激大鼠杏仁核BLA神經(jīng)細(xì)胞caspase12、caspsae3的表達(dá),減輕BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞(包括GABA能神經(jīng)細(xì)胞)的損傷。第三部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK通路參與應(yīng)激大鼠杏仁核基底外側(cè)核神經(jīng)細(xì)胞損傷的機(jī)制研究目的:探討杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞(包括GABA能神經(jīng)細(xì)胞)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK通路中GRP78、p-PERK、CHOP、caspase12、caspase3蛋白表達(dá)動(dòng)態(tài)變化以及與神經(jīng)細(xì)胞損傷的相關(guān)關(guān)系;使用PERK通路相關(guān)抑制劑salubrinal,對(duì)比觀察應(yīng)激大鼠行為學(xué)、神經(jīng)內(nèi)分泌變化以及杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞(包括GABA能神經(jīng)細(xì)胞)的病理學(xué)改變,明確內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK通路在杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞(包括GABA能神經(jīng)細(xì)胞)損傷中作用機(jī)制。方法1造模前給予腹腔注射salubrinal,采用束縛加冰水游泳建立應(yīng)激大鼠模型。通過(guò)自發(fā)活動(dòng)和高架十字迷宮觀察應(yīng)激大鼠行為學(xué)改變。2酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠杏仁核ATP的含量;采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)GABA和GLU及其衍生物的含量。3通過(guò)HE染色、硫堇染色和Fluoro-Jade B熒光染色觀察大鼠杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的病理學(xué)改變。4免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白GRP78、p-PERK、CHOP和caspase12、caspase3的表達(dá)變化。采用GABA能神經(jīng)細(xì)胞特異性標(biāo)記蛋白GAD65/67,觀察杏仁核BLA區(qū)GABA能神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量變化。5 Western blot檢測(cè)杏仁核內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白GRP78、p-PERK、CHOP和caspase12、caspase3的表達(dá)變化。6免疫熒光多重標(biāo)記觀察杏仁核BLA區(qū)GABA能神經(jīng)細(xì)胞GAD65/67與GRP78、p-PERK、CHOP、caspase12、caspase3的共表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果1.通過(guò)自發(fā)活動(dòng)及高架十字迷宮觀察到stress+SAL組與stress組大鼠相比焦慮樣行為程度有所減輕(P0.05),但與對(duì)照組和溶劑組相比仍有明顯的焦慮樣行為改變(P0.05)。2.Stress+SAL組杏仁核ATP含量明顯高于stress組大鼠(P0.05),但與對(duì)照組和溶劑組相比仍降低(P0.05)。3.Stress+SAL組杏仁核GLU含量低于stress組(P0.01);GABA含量高于stress組(P0.01),改善GLU/GABA比值。4.HE染色結(jié)果表明stress+SAL組BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞固縮現(xiàn)象與stress組相比明顯減少。5.硫堇染色結(jié)果表明stress+SAL組杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞變性現(xiàn)象較stress組相比有所減輕。6.Fluoro-Jade B染色結(jié)果表明stress+SAL組杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞變性死亡數(shù)量較stress組相比減少(P0.01);但與對(duì)照組和溶劑組相比仍有增多(P0.01)。7.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白GRP78、p-PERK、CHOP呈現(xiàn)先明顯升后略下降的趨勢(shì),與對(duì)照組相比均明顯升高(P0.05)。caspase12、caspsae3則表現(xiàn)為持續(xù)增加的趨勢(shì),與對(duì)照組相比均明顯升高(P0.05)。Stress+SAL組杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞CHOP、caspase12和caspsae3的表達(dá)量較應(yīng)激組均顯著降低(P0.01);表明salubrinal可改善杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的損傷。8.Western blot檢測(cè)蛋白半定量結(jié)果顯示,大鼠杏仁核中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白GRP78、p-PERK、CHOP呈現(xiàn)先增加后略降低的趨勢(shì),與對(duì)照組相比均明顯升高(P0.05);caspase12、caspsae3表現(xiàn)為持續(xù)增加的趨勢(shì),對(duì)照組相比均明顯升高(P0.05)。Stress+SAL組杏仁核CHOP、caspase12和caspsae3表達(dá)量較應(yīng)激組相比均明顯下降(P0.05)。9.免疫熒光多重標(biāo)記(激光共聚焦)顯微鏡觀察:隨著應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng),GRP78、p-PERK、CHOP及caspase12、caspsae3與GAD65/67共表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量均呈現(xiàn)了先增加后略降低的趨勢(shì),但較對(duì)照組均明顯升高(P0.01)。Stress+SAL組CHOP、caspase3蛋白GAD65/67共表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量較應(yīng)激組明顯減少(P0.01);caspsae12與GAD65/67共表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量較應(yīng)激組有所減少(P0.05);但均較對(duì)照組仍明顯增加(P0.01)。表明salubrinal可有效降低應(yīng)激大鼠杏仁核BLA區(qū)GABA能神經(jīng)細(xì)胞的損傷。10.GAD65/67免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:stress+SAL組杏仁核BLA區(qū)GABA能神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量和應(yīng)激組相比有所升高(P0.05)。表明salubrinal可有效改善應(yīng)激大鼠杏仁核BLA區(qū)GABA能神經(jīng)細(xì)胞的生存狀況。小結(jié)1.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK通路參與了杏仁核BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的變性死亡。2.Salubrinal抑制劑可以減輕BLA區(qū)神經(jīng)細(xì)胞(包括GABA能神經(jīng)細(xì)胞)的損傷狀況,改善杏仁核E/I比值,緩解應(yīng)激大鼠焦慮狀態(tài)。結(jié)論本研究以束縛應(yīng)激加冰水游泳大鼠應(yīng)激模型為主要研究對(duì)象,結(jié)合在體使用酪氨酸羥化酶抑制劑AMPT和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK通路相關(guān)抑制劑salubrinal,觀察在不同條件作用下應(yīng)激大鼠精神行為學(xué)、神經(jīng)內(nèi)分泌以及杏仁核基底外側(cè)核神經(jīng)細(xì)胞(包括GABA能神經(jīng)細(xì)胞)相關(guān)蛋白表達(dá)變化,得出以下結(jié)論:1.束縛加冰水游泳應(yīng)激可導(dǎo)致杏仁核基底外側(cè)核神經(jīng)細(xì)胞(包括GABA能神經(jīng)細(xì)胞)變性死亡和E/I失衡,出現(xiàn)焦慮樣行為改變。2.兒茶酚胺介導(dǎo)應(yīng)激大鼠杏仁核基底外側(cè)核神經(jīng)細(xì)胞(包括GABA能神經(jīng)細(xì)胞)變性死亡。3.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK通路參與應(yīng)激大鼠杏仁核基底外側(cè)核神經(jīng)細(xì)胞(包括GABA能神經(jīng)細(xì)胞)變性死亡過(guò)程。綜上,束縛加冰水游泳應(yīng)激大鼠在兒茶酚胺的介導(dǎo)下,持續(xù)激活杏仁核,造成杏仁核E/I失衡、ATP含量下降,誘發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激過(guò)度表達(dá),經(jīng)PERK通路導(dǎo)致杏仁核基底外側(cè)核神經(jīng)細(xì)胞(包括GABA能神經(jīng)細(xì)胞)變性死亡。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：D919
【圖文】：

杏仁核最大冠狀面

C 圖 1-2 大鼠自發(fā)活動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果g.1-2 Effects of spontaneous experiment on raf spontaneous experiment. (B)The movemeriment. (C) The percentage of movement d

B C圖 1-3大鼠高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果Fig.1-3 Effects of elevated plus maze test on ratsA) The path of elevated plus maze test .(B) Open arms of total entries.

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本文編號(hào)：2805833