【摘要】:目的:測(cè)定藥物過(guò)敏性休克死亡者右心血、心包液、胸腔液及腹腔液中肥大細(xì)胞羧肽酶A3、類胰蛋白酶及類糜蛋白酶的含量;觀察類胰蛋白酶、類糜蛋白酶在藥物過(guò)敏性休克死亡者心、肺、咽喉、胃及空腸組織中的表達(dá);試圖為藥物過(guò)敏性休克死亡的法醫(yī)學(xué)診斷提供客觀的實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo)及檢測(cè)方法。方法:方法:實(shí)驗(yàn)設(shè)立藥物過(guò)敏性休克死亡組、冠心病猝死組及對(duì)照組三組。藥物過(guò)敏性休克死亡組20例,死因確診為藥物過(guò)敏性休克死亡,并排除其生前存在冠心病、肥大細(xì)胞增多癥、顱腦損傷及吸食毒品;過(guò)敏性休克的原因分別為靜脈滴注青霉素2例、頭孢曲松鈉6例、左氧氟沙星5例、鹽酸林可霉素1例、賴氨匹林1例、洛美沙星1例、中藥清開(kāi)靈1例,中藥雙黃連1例,口服布洛芬1例,水合氯醛灌腸1例;20例中5例在死后48h內(nèi)進(jìn)行了尸體解剖檢驗(yàn),14例在死后7d內(nèi)進(jìn)行了尸體解剖檢驗(yàn),1例在死后15d尸體解剖。冠心病猝死組20例,死因確診為冠狀動(dòng)脈性猝死,并排除生前為過(guò)敏體質(zhì)者、肥大細(xì)胞增多癥患者及毒品吸食者,其中10例在死后48h內(nèi)進(jìn)行了尸體解剖檢驗(yàn),10例在死后7d內(nèi)進(jìn)行了尸體解剖檢驗(yàn)。對(duì)照組20例,排除過(guò)敏性休克、顱腦損傷、冠心病及吸食毒品導(dǎo)致的死亡,并排除生前為過(guò)敏體質(zhì)者及肥大細(xì)胞增多癥患者,20例均在死亡后48h內(nèi)做了系統(tǒng)尸體解剖。以上實(shí)驗(yàn)組在進(jìn)行尸體解剖檢驗(yàn)時(shí)均采取尸體右心血、心包液、胸腔液和腹腔液,離心后取上清,-80℃冷凍保存,以備熒光酶聯(lián)免疫(FEIA)和酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)檢測(cè);提取心臟、肺臟、咽喉、胃及空腸組織,甲醛固定并石蠟包埋,以備進(jìn)行免疫熒光染色;提取心臟、肺臟、咽喉、胃及空腸組織并進(jìn)行蛋白提取,以備進(jìn)行western blot檢測(cè)。(1)ELISA雙抗體夾心法測(cè)定右心血、心包液、胸腔液及腹腔液中肥大細(xì)胞羧肽酶A3和類糜蛋白酶的含量;(2)FEIA法測(cè)定右心血、心包液、胸腔液及腹腔液中肥大細(xì)胞類胰蛋白酶含量;(3)免疫熒光染色法對(duì)心、肺、咽喉、胃和空腸組織中類胰蛋白酶和類糜蛋白酶進(jìn)行染色,Olympus BX61熒光顯微鏡觀察并進(jìn)行圖像采集,Image-pro plus6.2軟件進(jìn)行圖像分析;(4)western blot法檢測(cè)心、肺、咽、胃和空腸器組織中類胰蛋白酶含量;(5)應(yīng)用3種甲苯胺藍(lán)異染肥大細(xì)胞的方法,觀察藥物過(guò)敏性休克死亡組肥大細(xì)胞脫顆粒現(xiàn)象;(6)SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,組間差異采用單因素方差分析(ANOVA)進(jìn)行檢驗(yàn),兩兩檢驗(yàn)采用LSD法進(jìn)行校正。結(jié)果:結(jié)果:藥物過(guò)敏性休克死亡組右心血、心包液、胸腔液及腹腔液肥大細(xì)胞羧肽酶A3含量分別為10.13±2.11ng/ml、4.34±1.61ng/ml、4.60±1.81ng/ml、4.49±1.21ng/ml,類胰蛋白酶含量分別為41.57±5.48ug/l、28.96±4.82ug/l、29.71±4.90ug/l、22.62±4.10ug/l,類糜蛋白酶含量分別為7.85±1.46ng/ml、7.31±1.37ng/ml、7.32±1.79ng/ml、7.29±1.53ng/ml。冠心病猝死組右心血、心包液、胸腔液及腹腔液肥大細(xì)胞羧肽酶A3含量分別為4.51±0.91ng/ml、2.07±0.41ng/ml、1.85±0.61ng/ml、1.89±0.66ng/ml,類胰蛋白酶含量分別為16.42±2.91ug/l、11.55±2.41ug/l、12.74±2.84ug/l、10.66±2.76ug/l,類糜蛋白酶含量分別為3.02±0.86ng/ml、2.80±0.67ng/ml、2.82±0.76ng/ml、2.79±0.76ng/ml。對(duì)照組右心血、心包液、胸腔液及腹腔液肥大細(xì)胞羧肽酶A3含量分別為3.18±1.30ng/ml、1.36±0.48ng/ml、1.26±0.36ng/ml、1.59±0.51ng/ml,類胰蛋白酶含量分別為4.86±0.86ug/l、4.64±0.95ug/l、3.30±0.84ug/l、3.11±0.96ug/l,類糜蛋白酶含量為1.22±0.55ng/ml、1.13±0.48ng/ml、1.15±0.58ng/ml、1.11±0.49ng/ml。藥物過(guò)敏性休克死亡組右心血、心包液、胸腔液及腹腔液中肥大細(xì)胞羧肽酶A3、類胰蛋白酶、類糜蛋白酶含量與冠心病猝死組及對(duì)照組相比,顯著升高(P0.05),其中尤以右心血含量升高最為明顯;藥物過(guò)敏性休克死亡組心臟、肺臟、喉、胃及空腸組織組織中類胰蛋白酶及類糜蛋白酶表達(dá)均明顯高于冠心病猝死組及對(duì)照組(P0.05)。冠心病猝死組右心血及心包液肥大細(xì)胞羧肽酶A3、類胰蛋白酶及類糜蛋白酶含量與對(duì)照組相比顯著升高(P0.05),但其含量顯著低于藥物過(guò)敏性休克死亡組(P0.05),胸腔液和腹腔液中肥大細(xì)胞羧肽酶A3、類胰蛋白酶、類糜蛋白酶與對(duì)照組相比,無(wú)明顯差異(P0.05);冠心病猝死組心臟組織中類胰蛋白酶及類糜蛋白酶表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P0.05),肺臟、喉、胃及空腸組織中類胰蛋白酶及類糜蛋白酶表達(dá)與對(duì)照組相比,無(wú)明顯差異(P0.05)。結(jié)論:結(jié)論:(1)FEIA法、ELISA雙抗體夾心法測(cè)定尸體右心血、心包液、腹腔液及胸腔液中羧肽酶A3、類胰蛋白酶及類糜蛋白酶含量,可作為藥物過(guò)敏性休克死亡法醫(yī)學(xué)鑒定的依據(jù);(2)無(wú)法獲得心血、心包液、胸腔液及腹腔液或尸體腐敗的案例,western blot法、免疫熒光染色法檢測(cè)心臟、肺臟、喉、胃及空腸組織中類胰蛋白酶和類糜蛋白酶的表達(dá),可應(yīng)用于藥物過(guò)敏性休克死亡的法醫(yī)學(xué)鑒定。(3)藥物過(guò)敏性休克死亡者右心血、心包液、胸腔液及腹腔液中肥大細(xì)胞羧肽酶A3、類胰蛋白酶及類糜蛋白酶含量高低與其用藥后發(fā)敏時(shí)間、過(guò)敏后存活時(shí)間有關(guān),且受死亡后保存條件及保存時(shí)間長(zhǎng)短的影響;(4)藥物過(guò)敏性休克死亡者臟器組織中類胰蛋白酶及類糜蛋白酶表達(dá)多或少與用藥后發(fā)敏時(shí)間、過(guò)敏后存活時(shí)間及不同的靶向器官有關(guān);與體液相比其受死亡后保存條件及保存時(shí)間長(zhǎng)短的影響相對(duì)較小。(5)藥物過(guò)敏性休克死亡的機(jī)制復(fù)雜,加之鑒定過(guò)程中存在死后自溶、凝血及溶血,藥物過(guò)敏性休克死亡的實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo)的準(zhǔn)確性、靈敏度受到一定的影響,因此法醫(yī)學(xué)診斷非常困難;涉及藥物過(guò)敏性休克死亡法醫(yī)學(xué)鑒定應(yīng)盡可能多指標(biāo)、多組織臟器(或體液)以及多種方法共同檢測(cè)、綜合分析。
【學(xué)位授予單位】:山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號(hào)】:D919
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本文編號(hào):
2804018
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