發(fā)布時間：2020-07-15 15:38

【摘要】：一般認(rèn)為,小腦顆粒神經(jīng)元主要來源于外顆粒層(EGL)中的顆粒神經(jīng)元祖細(xì)胞(GNPs)。這些處于增殖狀態(tài)的GNPs對輻射非常敏感,但在EGL中存在一部分細(xì)胞能抵抗輻射并恢復(fù)EGL,但這些細(xì)胞的身份是未知的。NEPs是一群存在于EGL內(nèi)層的Nestin陽性顆粒神經(jīng)元祖細(xì)胞。我們的研究發(fā)現(xiàn)這群獨(dú)特的顆粒神經(jīng)元祖細(xì)胞亞群具有一定的輻射抗性并且在輻射后從原來的靜止?fàn)顟B(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)樵鲋碃顟B(tài),補(bǔ)充了受損的EGL。當(dāng)我們用SHH通路抑制劑Vismodegib處理輻射后的小鼠時,受輻射小鼠損傷的EGL無法正常恢復(fù)。我們的研究鑒定了小腦中參與損傷修復(fù)的細(xì)胞亞群NEPs并揭示了其參與損傷修復(fù)的機(jī)制。研究方法:(1)利用Nestin-CFP轉(zhuǎn)基因小鼠準(zhǔn)確示蹤鑒定出Nestin陽性細(xì)胞,以此來研究NEPs在小腦輻射損傷后參與EGL的修復(fù)與再生的機(jī)制。(2)利用Math1-GFP/Nestin-CFP轉(zhuǎn)基因小鼠,通過顯微切割與流式分選技術(shù),特異性分離出位于外顆粒層中的GNPs與NEPs。(3)通過建立輻射損傷小鼠模型,研究其損傷修復(fù)的機(jī)制。(4)采用分子生物學(xué),細(xì)胞生物學(xué)和藥理學(xué)等多種方法檢測信號通路活化與蛋白表達(dá)。研究結(jié)果:(1)產(chǎn)后小鼠小腦輻射后2天顆粒神經(jīng)元祖細(xì)胞大部分凋亡,外顆粒層變薄,僅僅殘存少量的細(xì)胞。輻射后4天外顆粒層幾乎完全恢復(fù),大量細(xì)胞處于增殖狀態(tài)。(2)利用Nestin-CFP轉(zhuǎn)基因鼠發(fā)現(xiàn),輻射后小腦外顆粒層中殘存的顆粒細(xì)胞大部分為Nestin陽性。(3)體外培養(yǎng)的Nestin陽性顆粒細(xì)胞對輻射的抗性高于Math1陽性顆粒細(xì)胞。(4)輻照后小腦中Nestin陽性顆粒神經(jīng)元祖細(xì)胞從原來的靜止?fàn)顟B(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)樵鲋碃顟B(tài),參與小腦中外顆粒層的修復(fù)與顆粒神經(jīng)元的形成。(5)SHH通路參與驅(qū)動顆粒神經(jīng)元輻射損傷后的修復(fù)。研究結(jié)論:小腦對輻射的損傷具有一定的修復(fù)能力,而我們的研究證實(shí)了參與損傷修復(fù)的顆粒神經(jīng)元祖細(xì)胞亞群為Nestin陽性顆粒神經(jīng)元祖細(xì)胞,并且這群細(xì)胞的損傷后增殖依賴著SHH信號通路。這就表明SHH信號通路在正常的小腦發(fā)育中以及在小腦的損傷修復(fù)中都起到關(guān)鍵作用,這一發(fā)現(xiàn)有助于我們進(jìn)一步了解小腦發(fā)育以及損傷修復(fù)的研究。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R818

【參考文獻(xiàn)】

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1 Jing Yang;Philipp Andre;Ling Ye;Ying-Zi Yang;;The Hedgehog signalling pathway in bone formation[J];International Journal of Oral Science;2015年02期

本文編號：2756685