【摘要】：目的:探討小鼠腦部受照后,外泌體中的mi R-7通過靶基因Bcl-2調(diào)節(jié)肺部細(xì)胞自噬的機(jī)制,為進(jìn)一步探討腫瘤患者行放療后正常組織產(chǎn)生的可能損傷及損傷防護(hù)提供依據(jù)。方法:1.免疫組化法、Western Blot法檢測肺組織中Cleaved caspase-3、Beclin-1、LC 3B、Bcl-2等相關(guān)蛋白的表達(dá)。2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測小鼠腦組織、肺組織、血液、星形膠質(zhì)細(xì)胞等樣本中的mi R-7、m RNA Bcl-2的表達(dá)水平。3.構(gòu)建了含Bcl-2-3'UTR野生型及突變型的報(bào)告基因質(zhì)粒,雙熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證Bcl-2是mi R-7的直接靶基因。4.超高速梯度離心法提取細(xì)胞培養(yǎng)基中的外泌體。5.Di I染料對外泌體進(jìn)行染色,并加入到正常星形膠質(zhì)細(xì)胞原代細(xì)胞培養(yǎng)基中,共聚焦觀察外泌體進(jìn)入細(xì)胞情況。結(jié)果:1.小鼠腦部照射后,肺部組織中Beclin-1、LC 3BⅡ/Ⅰ蛋白表達(dá)量顯著增加Cleaved caspase-3蛋白表達(dá)量無顯著變化。2.小鼠腦部受照后,肺組織mi R-7表達(dá)水平較正常小鼠肺部組織高,mRNA Bcl-2表達(dá)水平與mi R-7趨勢相反,且肺部組織Bcl-2蛋白表達(dá)水平較對照組降低。3.雙熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),mi R-7可顯著抑制Bcl-2-3'UTR野生型報(bào)告基因質(zhì)粒的熒光素酶活性而對突變型無顯著影響,證實(shí)Bcl-2是mi R-7的直接靶基因。4.用照射后星膠細(xì)胞分泌的外泌體(rad-exo)處理正常星膠細(xì)胞后,其mi R-7表達(dá)水平顯著高于未照射星膠細(xì)胞分泌的外泌體(nc-exo)處理的星膠細(xì)胞,m RNA Bcl-2顯著降低。同時(shí)處理組細(xì)胞LC 3BⅡ/Ⅰ、Beclin-1蛋白表達(dá)水平高于對照組,Bcl-2蛋白表達(dá)水平則降低。通過尾靜脈注射外泌體至小鼠體內(nèi),結(jié)果發(fā)現(xiàn)rad-exo組mi R-7表達(dá)水平顯著高于nc-exo組,m RNA Bcl-2水平顯著降低,LC 3BⅡ/Ⅰ、Beclin-1蛋白則顯著性升高。結(jié)論:1.Bcl-2是mi R-7的直接靶基因。2.Exosome/mi R-7通過調(diào)節(jié)Bcl-2介導(dǎo)了腦部受照后肺部出現(xiàn)的遠(yuǎn)位旁觀者效應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R730.55

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本文編號(hào)：2733771